Besides Onconase (ONC) and its V11/

Besides Onconase (ONC) and its V11/N20/R103-variant, oocytes of the Northern Leopard frog (Rana pipiens) contain another homologue of ribonuclease A, which we named Amphinase (Amph). Four variants (Amph-1–4) were isolated and sequenced, each 114 amino acid residues in length and N-glycosylated at two positions. Sequence identities (a) among the variants and (b) versus ONC are 86.8–99.1% and 38.2–40.0%, respectively. When compared with other amphibian ribonucleases, a typical pattern of cysteine residues is evident but the N-terminal pyroglutamate residue is replaced by a six-residue extension. Amph variants have relatively weak ribonucleolytic activity that is insensitive to human ribonuclease inhibitor protein (RI). Values of kcat/KM with hypersensitive fluorogenic substrates are 104 and 102-fold lower than the maximum values exhibited by ribonuclease A and ONC, respectively, and there is little cytosine/uracil or adenine/guanine discrimination at the B1 or B2 subsites, respectively. Amph variants have cytotoxic activity toward A-253 carcinoma cells that requires intact ribonucleolytic activity. The glycan component has little or no influence over single-stranded RNA cleavage, RI evasion or cytotoxicity. The crystal structures of natural and recombinant Amph-2 (determined at 1.8 and 1.9 Å resolution, respectively) reveal that the N terminus is unlikely to play a catalytic role (but an unusual α2–β1 loop may do so) and the B2 subsite is rudimentary. At the active site, structural features that may contribute to the enzyme's low ribonucleolytic activity are the fixture of Lys14 in an obstructive position, the accompanying ejection of Lys42, and a lack of constraints on the conformations of Lys42 and His107.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นอกจาก Onconase (ONC) และของ V11/N20/R103-ตัวแปร แช่สารละลายของกบเสือดาวเหนือ (Rana pipiens) ประกอบด้วย homologue อื่นของ ribonuclease A ซึ่งเรามีชื่อว่า Amphinase (Amph) 4 ตัวแปร (Amph-1-4) แยกต่างหาก และเรียง ลำดับ ตกกรดอะมิโนแต่ละ 114 ในความยาวและ N-glycosylated ที่ตำแหน่งที่สอง ลำดับรหัสประจำตัว (ก) ระหว่างตัวแปร และ (ข) เมื่อเทียบ กับ ONC มี 86.8-99.1% และ 38.2-40.0% ตามลำดับ เมื่อเปรียบเทียบกับ ribonucleases อื่น ๆ amphibian รูปแบบทั่วไปของ cysteine ตกก็เห็นชัด แต่สารตกค้าง pyroglutamate N-เทอร์มินัลถูกแทนที่ ด้วยส่วนขยายเป็นหกตกค้าง ตัวแปร Amph มีกิจกรรม ribonucleolytic ค่อนข้างอ่อนแอที่ซ้อนเพื่อมนุษย์ ribonuclease สารยับยั้งโปรตีน (RI) ค่าของ kcat/KM กับพื้นผิว hypersensitive fluorogenic ได้ 104 และ 102-fold ต่ำกว่ากว่าค่าสูงสุดจัดแสดงโดย ribonuclease A ONC ตามลำดับ และไม่เลือกปฏิบัติ cytosine/uracil หรือ adenine/guanine ที่ B1 น้อย หรือ B2 subsites ตามลำดับ ย่อย Amph cytotoxic กิจกรรมไปทาง A-253 carcinoma เซลล์ที่ต้องการกิจกรรม ribonucleolytic เหมือนเดิมได้ คอมโพเนนต์ glycan มีน้อย หรือไม่มีอิทธิพลควั่นเดียวปริอาร์เอ็นเอ หลบหลีก RI หรือ cytotoxicity โครงสร้างผลึกของธรรมชาติ และ recombinant ค่อย ๆ Amph-2 (กำหนดที่ละเอียดÅ 1.8 และ 1.9 ตามลำดับ) ที่นัส N น่าจะเล่นบทบาทของตัวเร่งปฏิกิริยา a (แต่เป็นห่วงปกติ α2 – β1 อาจทำ) และไซต์ย่อย B2 rudimentary เว็บไซต์การใช้งาน ลักษณะโครงสร้างที่อาจเกี่ยวข้องกับเอนไซม์ ribonucleolytic ต่ำ มีแข่งของ Lys14 ในตำแหน่งที่อุปสรรค ขับมาของ Lys42 และไม่มีข้อจำกัดของ conformations Lys42 และ His107

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

นอกจาก Onconase (ONC) และ V11 / ของ N20 / R103-ตัวแปรเซลล์ไข่ของกบเสือดาวเหนือ (นา pipiens) มีคล้ายคลึงกันอีก ribonuclease ซึ่งเราชื่อ Amphinase (AMPH) สี่สายพันธุ์ (AMPH-1-4) ถูกโดดเดี่ยวและลำดับขั้นตอนในแต่ละ 114 กรดอะมิโนในความยาวและ N-glycosylated ที่สองตำแหน่ง อัตลักษณ์ลำดับ (ก) ในหมู่สายพันธุ์และ (ข) เมื่อเทียบกับ ONC เป็น 86.8-99.1% และ 38.2-40.0% ตามลำดับ เมื่อเทียบกับ ribonucleases ครึ่งบกครึ่งน้ำอื่น ๆ ที่มีรูปแบบตามแบบฉบับของ cysteine​​ ตกค้างเห็นได้ชัด แต่ที่เหลือ pyroglutamate n- ขั้วจะถูกแทนที่ด้วยการขยายหกสารตกค้าง สายพันธุ์ AMPH มีกิจกรรม ribonucleolytic ค่อนข้างอ่อนแอที่เป็นความรู้สึกที่มนุษย์โปรตีนยับยั้ง ribonuclease (RI) ค่านิยมของ kcat / KM กับพื้นผิว fluorogenic เสียวเป็น 104 และ 102 เท่าต่ำกว่าค่าสูงสุดแสดงโดย ribonuclease และ ONC ตามลำดับและมีน้อย cytosine uracil / หรือ adenine / เลือกปฏิบัติ guanine ที่ B1 หรือ B2 ไซต์ย่อยตามลำดับ สายพันธุ์ AMPH มีฤทธิ์ต่อ-253 เซลล์มะเร็งที่ต้องใช้กิจกรรม ribonucleolytic เหมือนเดิม องค์ประกอบที่มีอิทธิพลไกลแคนน้อยหรือไม่มีเลยในช่วงแตกแยก RNA สายเดี่ยวสายการหลีกเลี่ยง RI หรือเป็นพิษ โครงสร้างผลึกของธรรมชาติและ recombinant AMPH-2 (ตา​​ม 1.8 และ 1.9 มีการลงมติตามลำดับ) เผยให้เห็นว่าสถานี N คือไม่น่าจะมีบทบาทในการเร่งปฏิกิริยา (แต่ห่วงα2-β1ที่ผิดปกติอาจทำเช่นนั้น) และไซต์ย่อย B2 เป็น เป็นพื้นฐาน ที่เว็บไซต์ที่ใช้งานลักษณะโครงสร้างที่อาจนำไปสู่​​การของเอนไซม์ต่ำ ribonucleolytic กิจกรรมที่มีการติดตั้งของ Lys14 ในตำแหน่งที่อุดกั้นออกประกอบของ Lys42 และขาดการ จำกัด ใน conformations ของ Lys42 และ His107

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นอกจากนี้ onconase ( สบายมาก ) และ v11 / 20 / r103 แตกต่างเซลล์ภาคเหนือของเสือดาวกบ ( Rana pipiens ) มีอีกผิวของไรโบนิวคลีเ ที่เราตั้งชื่อ amphinase ( amph ) สี่สายพันธุ์ ( amph-1 – 4 ) ถูกแยก และลำดับกรดอะมิโนแต่ละ 114 ตกค้างในความยาวและ n-glycosylated อยู่สองตำแหน่ง ลำดับชื่อ ( ) ระหว่างตัวแปร และ ( ข ) เมื่อเทียบกับซิดนีย์เป็น 86.8 – 97.2 % และ 382 – 40.0 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ เมื่อเทียบกับ ribonucleases ครึ่งบกครึ่งน้ำอื่น ๆ รูปแบบโดยทั่วไปของซิสเทอีนตกค้างจะปรากฏชัด แต่กาก pyroglutamate กรดอะมิโนจะถูกแทนที่ด้วยการขยาย 6 กาก amph สายพันธุ์มีกิจกรรม ribonucleolytic ค่อนข้างอ่อนที่ไม่ไวต่อโปรตีนยับยั้งเอนไซม์ไรโบนิวคลีเมนุษย์ ( ริ )คุณค่าของ kcat / km กับซี่ fluorogenic พื้นผิวเป็น 104 และ 102 พับต่ำกว่าค่าที่มากที่สุดแสดงโดยไรโบนิวคลีเและสบายมาก ตามลำดับ และมีเพียงเล็กน้อยที่ย้ายถิ่น / Name และ / หรือเสียงกรอบแกรบการแบ่งแยกที่ B1 หรือ B2 ลักษณะตามลำดับ amph สายพันธุ์เป็นพิษต่อเซลล์มะเร็ง a-253 มีกิจกรรมที่ต้องมีกิจกรรม ribonucleolytic เหมือนเดิมและไกลแคนส่วนประกอบมีอิทธิพลน้อยหรือมากกว่าเดียวควั่น rna ความแตกแยก , ริเลี่ยงหรือเซลล์ . โครงสร้างผลึกของธรรมชาติและรีคอมบิแนนท์ amph-2 ( กำหนดที่ 1.8 1.9 •ความละเอียดตามลำดับ ) พบว่า N ปลายทางไม่น่าจะมีบทบาทเร่ง ( แต่ปกติα 2 –β 1 ห่วงอาจทำเช่นนั้น ) และ B2 ไซต์ย่อยคือพื้นฐาน ที่ไซต์งาน ,มีโครงสร้างที่อาจมีส่วนร่วมในกิจกรรมของเอนไซม์ต่ำ ribonucleolytic แข่งของ lys14 ในตำแหน่งที่อุดกั้น มากับดีดตัวของ lys42 และไม่มีข้อจำกัดในโครงสร้างของ lys42 และ his107 .