Reversed-phase chromatography (RPC)

Reversed-phase chromatography (RPC)[edit]

A chromatogram of complex mixture (perfume water) obtained by reversed phase HPLC
For more details on this topic, see Reversed-phase chromatography.
Reversed phase HPLC (RP-HPLC) has a non-polar stationary phase and an aqueous, moderately polar mobile phase. One common stationary phase is a silica which has been surface-modified with RMe2SiCl, where R is a straight chain alkyl group such as C18H37 or C8H17. With such stationary phases, retention time is longer for molecules which are less polar, while polar molecules elute more readily (early in the analysis). An investigator can increase retention times by adding more water to the mobile phase; thereby making the affinity of the hydrophobic analyte for the hydrophobic stationary phase stronger relative to the now more hydrophilic mobile phase. Similarly, an investigator can decrease retention time by adding more organic solvent to the eluent. RP-HPLC is so commonly used that it is often incorrectly referred to as "HPLC" without further specification. The pharmaceutical industry regularly employs RP-HPLC to qualify drugs before their release.

RP-HPLC operates on the principle of hydrophobic interactions, which originates from the high symmetry in the dipolar water structure and plays the most important role in all processes in life science. RP-HPLC allows the measurement of these interactive forces. The binding of the analyte to the stationary phase is proportional to the contact surface area around the non-polar segment of the analyte molecule upon association with the ligand on the stationary phase. This solvophobic effect is dominated by the force of water for "cavity-reduction" around the analyte and the C18-chain versus the complex of both. The energy released in this process is proportional to the surface tension of the eluent (water: 7.3×10−6 J/cm², methanol: 2.2×10−6 J/cm²) and to the hydrophobic surface of the analyte and the ligand respectively. The retention can be decreased by adding a less polar solvent (methanol, acetonitrile) into the mobile phase to reduce the surface tension of water. Gradient elution uses this effect by automatically reducing the polarity and the surface tension of the aqueous mobile phase during the course of the analysis.

Structural properties of the analyte molecule play an important role in its retention characteristics. In general, an analyte with a larger hydrophobic surface area (C–H, C–C, and generally non-polar atomic bonds, such as S-S and others) is retained longer because it is non-interacting with the water structure. On the other hand, analytes with higher polar surface area (conferred by the presence of polar groups, such as -OH, -NH2, COO– or -NH3+ in their structure) are less retained as they are better integrated into water. Such interactions are subject to steric effects in that very large molecules may have only restricted access to the pores of the stationary phase, where the interactions with surface ligands (alkyl chains) take place. Such surface hindrance typically results in less retention.

Retention time increases with hydrophobic (non-polar) surface area. Branched chain compounds elute more rapidly than their corresponding linear isomers because the overall surface area is decreased. Similarly organic compounds with single C–C bonds elute later than those with a C=C or C–C triple bond, as the double or triple bond is shorter than a single C–C bond.

Aside from mobile phase surface tension (organizational strength in eluent structure), other mobile phase modifiers can affect analyte retention. For example, the addition of inorganic salts causes a moderate linear increase in the surface tension of aqueous solutions (ca. 1.5×10−7 J/cm² per Mol for NaCl, 2.5×10−7 J/cm² per Mol for (NH4)2SO4), and because the entropy of the analyte-solvent interface is controlled by surface tension, the addition of salts tend to increase the retention time. This technique is used for mild separation and recovery of proteins and protection of their biological activity in protein analysis (hydrophobic interaction chromatography, HIC).

Another important factor is the mobile phase pH since it can change the hydrophobic character of the analyte. For this reason most methods use a buffering agent, such as sodium phosphate, to control the pH. Buffers serve multiple purposes: control of pH, neutralize the charge on the silica surface of the stationary phase and act as ion pairing agents to neutralize analyte charge. Ammonium formate is commonly added in mass spectrometry to improve detection of certain analytes by the formation of analyte-ammonium adducts. A volatile organic acid such as acetic acid, or most commonly formic acid, is often added to the mobile phase if mass spectrometry is used to analyze the column effluent. Trifluoroacetic acid is used infrequently in mass spectrometry applications due to its persistence in the detector and solvent delivery system, but can be effective in improving retention of analytes such as carboxylic acids in applications utilizing other detectors, as it is a fairly strong organic acid. The effects of acids and buffers vary by application but generally improve chromatographic resolution.

Reversed phase columns are quite difficult to damage compared with normal silica columns; however, many reversed phase columns consist of alkyl derivatized silica particles and should never be used with aqueous bases as these will destroy the underlying silica particle. They can be used with aqueous acid, but the column should not be exposed to the acid for too long, as it can corrode the metal parts of the HPLC equipment. RP-HPLC columns should be flushed with clean solvent after use to remove residual acids or buffers, and stored in an appropriate composition of solvent. The metal content of HPLC columns must be kept low if the best possible ability to separate substances is to be retained. A good test for the metal content of a column is to inject a sample which is a mixture of 2,2'- and 4,4'- bipyridine. Because the 2,2'-bipy can chelate the metal, the shape of the peak for the 2,2'-bipy will be distorted (tailed) when metal ions are present on the surface of the silica.[citation needed]..

Reversed-phase chromatography (RPC)[edit]

A chromatogram of complex mixture (perfume water) obtained by reversed phase HPLC
For more details on this topic, see Reversed-phase chromatography.
Reversed phase HPLC (RP-HPLC) has a non-polar stationary phase and an aqueous, moderately polar mobile phase. One common stationary phase is a silica which has been surface-modified with RMe2SiCl, where R is a straight chain alkyl group such as C18H37 or C8H17. With such stationary phases, retention time is longer for molecules which are less polar, while polar molecules elute more readily (early in the analysis). An investigator can increase retention times by adding more water to the mobile phase; thereby making the affinity of the hydrophobic analyte for the hydrophobic stationary phase stronger relative to the now more hydrophilic mobile phase. Similarly, an investigator can decrease retention time by adding more organic solvent to the eluent. RP-HPLC is so commonly used that it is often incorrectly referred to as "HPLC" without further specification. The pharmaceutical industry regularly employs RP-HPLC to qualify drugs before their release.

RP-HPLC operates on the principle of hydrophobic interactions, which originates from the high symmetry in the dipolar water structure and plays the most important role in all processes in life science. RP-HPLC allows the measurement of these interactive forces. The binding of the analyte to the stationary phase is proportional to the contact surface area around the non-polar segment of the analyte molecule upon association with the ligand on the stationary phase. This solvophobic effect is dominated by the force of water for "cavity-reduction" around the analyte and the C18-chain versus the complex of both. The energy released in this process is proportional to the surface tension of the eluent (water: 7.3×10−6 J/cm², methanol: 2.2×10−6 J/cm²) and to the hydrophobic surface of the analyte and the ligand respectively. The retention can be decreased by adding a less polar solvent (methanol, acetonitrile) into the mobile phase to reduce the surface tension of water. Gradient elution uses this effect by automatically reducing the polarity and the surface tension of the aqueous mobile phase during the course of the analysis.

Structural properties of the analyte molecule play an important role in its retention characteristics. In general, an analyte with a larger hydrophobic surface area (C–H, C–C, and generally non-polar atomic bonds, such as S-S and others) is retained longer because it is non-interacting with the water structure. On the other hand, analytes with higher polar surface area (conferred by the presence of polar groups, such as -OH, -NH2, COO– or -NH3+ in their structure) are less retained as they are better integrated into water. Such interactions are subject to steric effects in that very large molecules may have only restricted access to the pores of the stationary phase, where the interactions with surface ligands (alkyl chains) take place. Such surface hindrance typically results in less retention.

Retention time increases with hydrophobic (non-polar) surface area. Branched chain compounds elute more rapidly than their corresponding linear isomers because the overall surface area is decreased. Similarly organic compounds with single C–C bonds elute later than those with a C=C or C–C triple bond, as the double or triple bond is shorter than a single C–C bond.

Aside from mobile phase surface tension (organizational strength in eluent structure), other mobile phase modifiers can affect analyte retention. For example, the addition of inorganic salts causes a moderate linear increase in the surface tension of aqueous solutions (ca. 1.5×10−7 J/cm² per Mol for NaCl, 2.5×10−7 J/cm² per Mol for (NH4)2SO4), and because the entropy of the analyte-solvent interface is controlled by surface tension, the addition of salts tend to increase the retention time. This technique is used for mild separation and recovery of proteins and protection of their biological activity in protein analysis (hydrophobic interaction chromatography, HIC).

Another important factor is the mobile phase pH since it can change the hydrophobic character of the analyte. For this reason most methods use a buffering agent, such as sodium phosphate, to control the pH. Buffers serve multiple purposes: control of pH, neutralize the charge on the silica surface of the stationary phase and act as ion pairing agents to neutralize analyte charge. Ammonium formate is commonly added in mass spectrometry to improve detection of certain analytes by the formation of analyte-ammonium adducts. A volatile organic acid such as acetic acid, or most commonly formic acid, is often added to the mobile phase if mass spectrometry is used to analyze the column effluent. Trifluoroacetic acid is used infrequently in mass spectrometry applications due to its persistence in the detector and solvent delivery system, but can be effective in improving retention of analytes such as carboxylic acids in applications utilizing other detectors, as it is a fairly strong organic acid. The effects of acids and buffers vary by application but generally improve chromatographic resolution.

Reversed phase columns are quite difficult to damage compared with normal silica columns; however, many reversed phase columns consist of alkyl derivatized silica particles and should never be used with aqueous bases as these will destroy the underlying silica particle. They can be used with aqueous acid, but the column should not be exposed to the acid for too long, as it can corrode the metal parts of the HPLC equipment. RP-HPLC columns should be flushed with clean solvent after use to remove residual acids or buffers, and stored in an appropriate composition of solvent. The metal content of HPLC columns must be kept low if the best possible ability to separate substances is to be retained. A good test for the metal content of a column is to inject a sample which is a mixture of 2,2'- and 4,4'- bipyridine. Because the 2,2'-bipy can chelate the metal, the shape of the peak for the 2,2'-bipy will be distorted (tailed) when metal ions are present on the surface of the silica.[citation needed]..

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

ระยะกลับ chromatography (RPC) [แก้ไข]Chromatogram ของส่วนผสมที่ซับซ้อน (น้ำหอม) ได้ โดยระยะกลับ HPLCหากต้องการรายละเอียดเพิ่มเติมในหัวข้อนี้ ดูย้อนกลับเฟส chromatographyกลับเฟส HPLC (RP-HPLC) ได้ไม่ใช่ขั้วโลกกับระยะและระยะเคลื่อนอควี โพลาร์ปานกลาง ระยะเครื่องเขียนทั่วไปหนึ่งคือ ซิลิกาซึ่งได้รับการปรับเปลี่ยนพื้นผิว ด้วย RMe2SiCl ที่ R คือ กลุ่ม alkyl โซ่ตรงเช่น C18H37 หรือ C8H17 เวลาคงจะไม่ยาวสำหรับโมเลกุลที่มีขั้วน้อย ขั้วโมเลกุล elute มากขึ้น (ในช่วงวิเคราะห์) กับระยะเช่นเครื่องเขียน เอกชนที่สามารถเพิ่มเวลาเก็บข้อมูล โดยการเพิ่มน้ำมากระยะเคลื่อนที่ จึงทำให้ความสัมพันธ์ของ hydrophobic analyte สำหรับระยะเครื่องเขียน hydrophobic ที่แข็งแกร่งเมื่อเทียบกับระยะเคลื่อน hydrophilic มากตอนนี้ ทำนอง นักสืบที่สามารถลดเวลาเก็บข้อมูล โดยการเพิ่มตัวทำละลายอินทรีย์มาก eluent RP HPLC เป็นดังนั้นโดยทั่วไปใช้ว่า มันมักจะถูกเรียกว่า "HPLC" โดยไม่มีข้อมูลจำเพาะเพิ่มเติม อุตสาหกรรมยาประจำใช้ RP-HPLC เพื่อยาเสพติดก่อนปล่อยตัวRP HPLC ทำงานหลักของ hydrophobic โต้ตอบ ต้นกำเนิดของสมมาตรสูงในน้ำ dipolar โครงสร้าง และบทบาทสำคัญในกระบวนการทั้งหมดในวิทยาศาสตร์ การประเมินของกองกำลังเหล่านี้แบบ RP-HPLC ได้ ผูกพันของ analyte กับระยะเป็นสัดส่วนกับพื้นที่ติดต่อสถานส่วนไม่มีขั้วของโมเลกุล analyte เมื่อบังคับกับลิแกนด์ระยะเครื่องเขียน ผล solvophobic นี้ถูกครอบงำ โดยแรงของน้ำ "โพรงลด" รอบ C18-โซ่กับซับซ้อนทั้งการ analyte พลังงานที่ปล่อยออกมาในกระบวนการนี้เป็นสัดส่วนกับแรงตึงผิวของ eluent (น้ำ: 7.3 × 10−6 J/cm² เมทานอล: 2.2 × 10−6 J/cm²) และพื้นผิว hydrophobic ของ analyte และลิแกนด์ตามลำดับ เก็บรักษาสามารถลดลงได้ โดยการเพิ่มเป็นขั้วโลกน้อยกว่าตัวทำละลาย (เมทานอล acetonitrile) เป็นเฟสเคลื่อนที่เพื่อลดแรงตึงผิวของน้ำ Elution ไล่ระดับใช้ลักษณะพิเศษนี้ โดยการลดขั้วและผิวของเฟสเคลื่อนที่อควีระหว่างการวิเคราะห์โดยอัตโนมัติคุณสมบัติโครงสร้างของโมเลกุล analyte มีบทบาทสำคัญในลักษณะคง ทั่วไป analyte กับ hydrophobic พื้นผิวพื้นที่กว้าง (C – H, C – C และโดยทั่วไปไม่ใช่ขั้วอะตอมพันธบัตร S-S และอื่น ๆ) จะถูกเก็บไว้อีกต่อไปเพราะไม่ใช่โต้ตอบกับโครงสร้างของน้ำ ในทางกลับกัน analytes มีพื้นที่ผิวสูงกว่าขั้วโลก (รางวัล โดยสถานะของกลุ่มขั้วโลก เช่น -OH, - NH2 บิลล์- หรือ - NH3 + ในโครงสร้าง) มีน้อยเก็บไว้เป็นดีจะถูกรวมอยู่ในน้ำ โต้ตอบดังกล่าวอาจมีผล steric ที่โมเลกุลมีขนาดใหญ่มากอาจมีเพียงจำกัดเข้ารูขุมขนของเฟสเครื่องเขียน ที่โต้ตอบกับผิว ligands (alkyl โซ่) เกิดขึ้น กำแพงดังกล่าวผิวโดยทั่วไปผลลัพธ์ในคงน้อยเวลาเก็บข้อมูลเพิ่มขึ้นกับพื้นที่ผิว hydrophobic (ไม่ใช่โพลาร์) สารแบบแยกสาขาโซ่ elute เร็วกว่า isomers เชิงความสอดคล้องกันเนื่องจากพื้นที่ผิวโดยรวมจะลดลง ในทำนองเดียวกัน สารประกอบอินทรีย์กับพันธบัตร C – C เดียว elute ช้ากว่าผู้ที่มีพันธะแบบ triple C = C หรือ C – C เป็นดับเบิ้ลหรือทริปเปิ้ลพันธะสั้นกว่าพันธะ C-C เดียวนอกเหนือจากแรงตึงผิวในขั้นตอนการเคลื่อน (องค์กรแรงในโครงสร้างของ eluent), วิเศษณ์เฟสเคลื่อนที่มีผลต่อเงินวางประกันการ analyte ตัวอย่าง การเพิ่มเกลืออนินทรีย์ทำการเชิงเส้นเพิ่มขึ้นปานกลางในผิวของโซลูชั่นอควี (ca. × 1.5 J 10−7/cm² ต่อโมลใน NaCl, 2.5 × J 10−7/cm² ต่อโมลสำหรับ (NH4) 2SO4), และเนื่องจากเอนโทรปีของอินเทอร์เฟซของตัวทำละลาย analyte ถูกควบคุม โดยแรงตึงผิว การเพิ่มเกลือมักจะ เพิ่มเวลาคง เทคนิคนี้ใช้สำหรับแยกอ่อนและการฟื้นตัวของโปรตีนและการป้องกันของกิจกรรมทางชีวภาพในการวิเคราะห์โปรตีน (hydrophobic โต้ chromatography ชไอ)อีกหนึ่งปัจจัยสำคัญคือ pH ระยะเคลื่อนเนื่องจากมันสามารถเปลี่ยนอักขระ hydrophobic ของ analyte ด้วยเหตุนี้ วิธีการส่วนใหญ่ใช้ตัวบัฟเฟอร์แทน เช่นโซเดียมฟอสเฟต การควบคุม pH บัฟเฟอร์ใช้วัตถุประสงค์หลาย: ควบคุม ของแก้ค่าธรรมเนียมบนพื้นผิวซิลิกาของเฟสเครื่องเขียน และทำหน้าที่เป็นไอออนจับคู่ตัวแทนการค่าธรรมเนียมการ analyte แอมโมเนียรูปแบบเอกสารทั่วไปเพิ่มในโตรเมทรีปรับปรุงของบาง analytes โดยการก่อตัวของ analyte แอมโมเนีย adducts เป็นกรดอินทรีย์ระเหยเช่นกรดอะซิติก หรือมักกรด มักจะเพิ่มระยะเคลื่อนรเมทจะใช้วิเคราะห์คอลัมน์น้ำ กรด Trifluoroacetic ใช้ขึ้นนาน ๆ ครั้งในโปรแกรมประยุกต์รเมทเนื่องจากของมีอยู่ในเครื่องตรวจจับและจัดระบบตัวทำละลาย แต่สามารถมีประสิทธิภาพในการปรับปรุงรักษา analytes เช่นกรด carboxylic ในโปรแกรมประยุกต์ที่ใช้ตรวจจับอื่น ๆ ซึ่งเป็นกรดอินทรีย์ค่อนข้างแข็งแรง ผลของกรดและบัฟเฟอร์เปลี่ยนตามโปรแกรม แต่โดยทั่วไปปรับปรุงแก้ไข chromatographicReversed phase columns are quite difficult to damage compared with normal silica columns; however, many reversed phase columns consist of alkyl derivatized silica particles and should never be used with aqueous bases as these will destroy the underlying silica particle. They can be used with aqueous acid, but the column should not be exposed to the acid for too long, as it can corrode the metal parts of the HPLC equipment. RP-HPLC columns should be flushed with clean solvent after use to remove residual acids or buffers, and stored in an appropriate composition of solvent. The metal content of HPLC columns must be kept low if the best possible ability to separate substances is to be retained. A good test for the metal content of a column is to inject a sample which is a mixture of 2,2'- and 4,4'- bipyridine. Because the 2,2'-bipy can chelate the metal, the shape of the peak for the 2,2'-bipy will be distorted (tailed) when metal ions are present on the surface of the silica.[citation needed]..

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

โค Reversed เฟส (RPC) [แก้ไข] chromatogram ของส่วนผสมที่ซับซ้อน (น้ำหอมน้ำ) ที่ได้จากการกลับรายการ HPLC เฟสสำหรับรายละเอียดเพิ่มเติมเกี่ยวกับหัวข้อนี้เห็นรเฟสกลับ. กลับเฟส HPLC (RP-HPLC) มีไม่มีขั้ว เฟสและน้ำเฟสเคลื่อนที่ขั้วโลกปานกลาง หนึ่งเฟสที่พบบ่อยคือซิลิกาซึ่งได้รับการพื้นผิวการแก้ไขด้วย RMe2SiCl ที่ R คือห่วงโซ่กลุ่มอัลคิลตรงเช่น C18H37 หรือ C8H17 ด้วยขั้นตอนนิ่งเช่นเวลาการเก็บรักษามีความยาวโมเลกุลที่มีขั้วน้อยกว่าในขณะที่โมเลกุลขั้วโลกชะมากขึ้นอย่างรวดเร็ว (ต้นในการวิเคราะห์) ผู้ตรวจสอบสามารถเพิ่มเวลาการเก็บรักษาโดยการเพิ่มน้ำมากขึ้นเพื่อเฟสเคลื่อนที่; จึงทำให้ความสัมพันธ์ของสารชอบน้ำสำหรับเฟสชอบน้ำญาติที่แข็งแกร่งเพื่อเฟสเคลื่อนที่ชอบน้ำมากขึ้นในขณะนี้ ในทำนองเดียวกันผู้ตรวจสอบสามารถลดเวลาการเก็บรักษาโดยการเพิ่มตัวทำละลายอินทรีย์มากขึ้นในการชะ RP-HPLC ถูกนำมาใช้เพื่อให้ทั่วไปว่ามันก็มักจะถูกเรียกว่า "HPLC" โดยไม่มีข้อกำหนดเพิ่มเติม อุตสาหกรรมยาอย่างสม่ำเสมอพนักงาน RP-HPLC จะมีคุณสมบัติยาเสพติดก่อนที่จะปล่อยของพวกเขา. RP-HPLC ทำงานบนหลักการของการมีปฏิสัมพันธ์ที่ไม่ชอบน้ำซึ่งมาจากความสมมาตรสูงในโครงสร้างน้ำ dipolar และมีบทบาทที่สำคัญที่สุดในกระบวนการทั้งหมดในด้านวิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต RP-HPLC ช่วยให้การวัดของกองกำลังโต้ตอบเหล่านี้ ผูกพันของการวิเคราะห์เฟสแบบคงที่เป็นสัดส่วนกับพื้นที่ผิวสัมผัสที่อยู่รอบ ๆ ส่วนที่ไม่มีขั้วของโมเลกุลวิเคราะห์เมื่อเชื่อมโยงกับแกนด์ในเฟส นี้มีผล solvophobic ที่ถูกครอบงำด้วยพลังแห่งน้ำสำหรับ "ช่องลด" รอบวิเคราะห์และ C18 โซ่เมื่อเทียบกับความซับซ้อนของทั้งสอง พลังงานที่ปล่อยออกในขั้นตอนนี้เป็นสัดส่วนกับแรงตึงผิวของตัวชะ (น้ำ: 7.3 × 10-6 J / ตารางเซนติเมตร, เมทานอล: 2.2 × 10-6 J / ตารางเซนติเมตร) และพื้นผิวที่ไม่ชอบน้ำของวิเคราะห์และแกนด์ตามลำดับ . การเก็บรักษาสามารถลดลงโดยการเพิ่มขั้วโลกละลายน้อย (เมทานอล, acetonitrile) ลงในเฟสเคลื่อนที่เพื่อลดแรงตึงผิวของน้ำ ชะไล่โทนสีที่ใช้ผลกระทบนี้โดยอัตโนมัติการลดกระแสไฟฟ้าและแรงตึงผิวของเฟสเคลื่อนที่น้ำในช่วงของการวิเคราะห์. คุณสมบัติโครงสร้างของโมเลกุลของสารที่มีบทบาทสำคัญในลักษณะการเก็บรักษา โดยทั่วไปสารที่มีพื้นที่ผิวขนาดใหญ่ที่ไม่ชอบน้ำ (C-H, C-C, และโดยทั่วไปพันธบัตรอะตอมไม่มีขั้วเช่นเอสเอสและอื่น ๆ ) จะถูกเก็บไว้อีกต่อไปเพราะมันเป็นที่ไม่ได้มีปฏิสัมพันธ์กับโครงสร้างน้ำ ในทางตรงกันข้าม, วิเคราะห์ที่มีพื้นที่ผิวขั้วโลกที่สูงขึ้น (การประชุมด้วยการปรากฏตัวของกลุ่มขั้วเช่น -OH, -NH2, COO- หรือ -NH3 + ในโครงสร้างของพวกเขา) จะยังคงน้อยกว่าที่พวกเขาเป็นแบบบูรณาการที่ดีกว่าลงไปในน้ำ ปฏิสัมพันธ์ดังกล่าวอาจมีการ steric ผลในการที่โมเลกุลขนาดใหญ่มากอาจมีการเข้าถึงที่ จำกัด เพียงเพื่อรูขุมขนของเฟสที่มีปฏิสัมพันธ์กับแกนด์พื้นผิว (โซ่อัลคิล) ใช้สถานที่ อุปสรรคพื้นผิวดังกล่าวมักจะส่งผลในการเก็บรักษาน้อย. เพิ่มเวลาการเก็บรักษาที่มีไม่ชอบน้ำ (ไม่มีขั้ว) พื้นที่ผิว แยกสารประกอบโซ่ชะเร็วกว่าไอโซเมอเชิงเส้นที่เกี่ยวข้องของพวกเขาเพราะพื้นที่ผิวโดยรวมจะลดลง ในทำนองเดียวกันสารประกอบอินทรีย์กับพันธบัตร C-C เดียวชะช้ากว่าผู้ที่มี C = C หรือ C-C พันธะสามเป็นพันธะคู่หรือสามจะสั้นกว่าเดียวพันธบัตร C-C. นอกเหนือจากแรงตึงผิวเฟสเคลื่อนที่ (ความแข็งแกร่งขององค์กร ในโครงสร้างชะ), การปรับเปลี่ยนขั้นตอนการมือถืออื่น ๆ จะมีผลต่อการเก็บรักษาวิเคราะห์ ตัวอย่างเช่นการเพิ่มของเกลือนินทรีย์ที่ทำให้เกิดการเพิ่มขึ้นในระดับปานกลางในเชิงเส้นแรงตึงผิวของสารละลาย (แคลิฟอร์เนีย 1.5 × 10-7 J / ตารางเซนติเมตรต่อโมเลกุลสำหรับโซเดียมคลอไรด์ 2.5 × 10-7 J / ตารางเซนติเมตรต่อโมเลกุลสำหรับ (NH4) 2SO4) และเนื่องจากเอนโทรปีของอินเตอร์เฟซวิเคราะห์ตัวทำละลายจะถูกควบคุมโดยแรงตึงผิวที่นอกเหนือจากเกลือมีแนวโน้มที่จะเพิ่มเวลาในการเก็บรักษา เทคนิคนี้จะใช้สำหรับการแยกอ่อนและการฟื้นตัวของโปรตีนและการป้องกันของกิจกรรมทางชีวภาพของพวกเขาในการวิเคราะห์โปรตีน (โคปฏิสัมพันธ์ชอบน้ำ HIC). อีกปัจจัยที่สำคัญคือค่า pH เฟสเคลื่อนที่เพราะมันสามารถเปลี่ยนแปลงตัวละครที่ไม่ชอบน้ำของสาร ด้วยเหตุนี้วิธีการส่วนใหญ่ใช้ตัวแทนบัฟเฟอร์เช่นโซเดียมฟอสเฟตเพื่อควบคุมค่า pH บัฟเฟอร์เพื่อให้บริการหลายควบคุมค่า pH เป็นกลางค่าใช้จ่ายบนพื้นผิวซิลิกาของเฟสและทำหน้าที่เป็นตัวแทนการจับคู่ไอออนเพื่อแก้ค่าใช้จ่ายวิเคราะห์ รูปแบบแอมโมเนียจะถูกเพิ่มโดยทั่วไปในมวลสารในการปรับปรุงการตรวจสอบวิเคราะห์บางโดยการก่อตัวของ adducts วิเคราะห์-แอมโมเนียม กรดอินทรีย์ระเหยเช่นกรดอะซิติกหรือกรดมากที่สุดโดยทั่วไปมักจะเพิ่มเฟสเคลื่อนที่ถ้ามวลสารที่ใช้ในการวิเคราะห์น้ำทิ้งคอลัมน์ กรด Trifluoroacetic ที่ใช้บ่อยในการใช้งานมวลสารเนื่องจากความคงทนในการตรวจจับและระบบการจัดส่งตัวทำละลาย แต่จะมีประสิทธิภาพในการปรับปรุงการเก็บรักษาวิเคราะห์เช่นกรดคาร์บอกซิในการใช้งานการใช้เครื่องตรวจจับอื่น ๆ มันเป็นกรดอินทรีย์ที่ค่อนข้างแข็งแกร่ง ผลกระทบของกรดและบัฟเฟอร์ที่แตกต่างกันโดยการประยุกต์ใช้ แต่โดยทั่วไปในการปรับปรุงความละเอียดโครมา. คอลัมน์เฟสแบบผันกลับจะค่อนข้างยากที่จะเกิดความเสียหายเมื่อเทียบกับคอลัมน์ซิลิกาปกติ; แต่หลายคอลัมน์ขั้นตอนการกลับรายการประกอบด้วยอนุภาคซิลิกา derivatized อัลคิลและไม่ควรนำมาใช้กับฐานน้ำเป็นเหล่านี้จะทำลายอนุภาคซิลิกาพื้นฐาน พวกเขาสามารถใช้กับกรดน้ำ แต่คอลัมน์ไม่ควรสัมผัสกับกรดนานเกินไปที่จะสามารถกัดกร่อนชิ้นส่วนโลหะของอุปกรณ์ HPLC คอลัมน์ RP-HPLC ควรจะล้างด้วยตัวทำละลายทำความสะอาดหลังการใช้งานที่จะเอากรดที่เหลือหรือบัฟเฟอร์และเก็บไว้ในองค์ประกอบที่เหมาะสมของตัวทำละลาย ปริมาณโลหะของคอลัมน์ HPLC จะต้องเก็บไว้ในระดับต่ำถ้าความสามารถที่ดีที่สุดเพื่อแยกสารที่จะถูกเก็บรักษาไว้ การทดสอบที่ดีสำหรับปริมาณโลหะของคอลัมน์คือการฉีดตัวอย่างซึ่งเป็นส่วนผสมของ 2,2'- และ 4,4'- bipyridine เพราะ 2,2'-bipy สามารถคีเลตโลหะรูปร่างของยอดสำหรับ 2,2'-bipy จะถูกบิดเบือน (นก) เมื่อไอออนของโลหะที่มีอยู่บนพื้นผิวของซิลิกา. [อ้างจำเป็น] ..

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

กลับเฟสโครมาโทกราฟี ( RPC ) [ แก้ไข ]

chromatogram ซับซ้อน ( น้ำผสมน้ำหอม ) ได้กลับเฟส HPLC
สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติมในหัวข้อนี้ เห็นเฟสโครมาโทกราฟี . .
เฟส HPLC กลับ ( ๆ ) มีระยะ stationary และชนิดไม่มีขั้ว , ขั้วในเฟสเคลื่อนที่ . ระยะ stationary หนึ่งร่วมกันคือ ซิลิกา ซึ่งได้รับการแก้ไขด้วย rme2sicl พื้นผิว ,ที่ r คือตรงโซ่หมู่แอลคิล เช่น c18h37 หรือ c8h17 . ด้วยเช่นระยะ stationary เวลาเก็บกักนานสำหรับโมเลกุลที่มีขั้วน้อยกว่า ในขณะที่โมเลกุลมีขั้ว elute มากขึ้นอย่างรวดเร็ว ( เร็วในการวิเคราะห์ ) ผู้ตรวจสอบสามารถเพิ่มความคงทนครั้ง โดยการเพิ่มน้ำมากขึ้นในระยะที่มือถือจึงทำให้ความสัมพันธ์ของครู ) สำหรับระยะ stationary ) แข็งแกร่งเมื่อเทียบกับตอนนี้น้ำมากกว่าเฟสเคลื่อนที่ . ในทํานองเดียวกัน เป็นผู้ตรวจสอบสามารถลดเวลาการเพิ่มตัวทำละลายอินทรีย์มากขึ้นในนี้ ๆเพื่อใช้ทั่วไปที่มักถูกเรียกว่า " และ " ไม่มีข้อมูลเพิ่มเติมอุตสาหกรรมเภสัชกรรมเสมอๆจึงใช้ยาก่อนการปลดปล่อย

ๆ ทำงานบนหลักการของปฏิกิริยาไฮโดรโฟบิก ซึ่งมาจากความสมมาตรสูงใน dipolar น้ำโครงสร้างและบทบาทสำคัญในกระบวนการทั้งหมดในวิทยาศาสตร์ชีวิต ๆช่วยให้วัดแรงแบบโต้ตอบเหล่านี้ผูกพันของครูกับ stationary phase คือสัดส่วนของพื้นที่ผิวสัมผัสรอบส่วนที่ไม่มีขั้วของโมเลกุลเมื่อครูร่วมกับลิแกนด์ในเฟสอยู่กับที่ ผล solvophobic เป็น dominated โดยแรงของน้ำ " ในการ " รอบครูและ c18 โซ่และซับซ้อนของทั้งคู่พลังงานที่ปล่อยออกในกระบวนการนี้คือ สัดส่วนของแรงตึงผิวของสารละลาย ( น้ำ : 7.3 × 10 − 6 ไหม J / cm พนักงานขาย เมทานอล : 2.2 × 10 − 6 ไหม J / cm พนักงานขาย ) และพื้นผิว ) ของครูและลิแกนด์ตามลำดับ การคงอยู่ที่สามารถลดลงโดยการเพิ่มขั้วน้อยกว่าตัวทำละลาย ( เมทานอล ไน ) เป็นเฟสเคลื่อนที่เพื่อลดแรงตึงผิวของน้ำการไล่ระดับสี ( ใช้ผลนี้โดยอัตโนมัติลดขั้วและแรงตึงผิวของสารละลายเฟสเคลื่อนที่ในระหว่างการวิเคราะห์ คุณสมบัติของครู

โครงสร้างโมเลกุลเล่นบทบาทสำคัญในการเก็บรักษาคุณลักษณะ ทั่วไป เป็นครูที่มีพื้นที่ผิวขนาดใหญ่ ) ( c ) H , C - C , และโดยทั่วไปไม่มีขั้วอะตอมพันธบัตรเช่น s-s และอื่น ๆ ) เก็บไว้อีกต่อไป เพราะมันไม่กระทบกับโครงสร้างน้ำ บนมืออื่น ๆ , สารที่มีพื้นที่ผิวสูง ( polar ) โดยการแสดงตนของขั้วโลกกลุ่มเช่น - โอ - nh2 กรรมการ ( หรือ - nh3 ในโครงสร้าง ) มีน้อยเก็บไว้เป็นพวกเขาจะรวมอยู่ในน้ำปฏิสัมพันธ์ เช่น เรื่องเอผลในโมเลกุลขนาดใหญ่มาก อาจจะต้อง จำกัด การเข้าถึงไปยังรูของ stationary phase ที่ปฏิสัมพันธ์กับลิแกนด์พื้นผิว ( อัลโซ่ ) เกิดขึ้น เครื่องกีดขวางพื้นผิวดังกล่าวมักจะผลในการเก็บรักษาน้อยกว่า การเพิ่มเวลาด้วย

) ( ไม่มีขั้ว ) พื้นที่ผิวสารประกอบกิ่งโซ่ elute มากขึ้นอย่างรวดเร็วกว่าที่สอดคล้องกันของพวกเขาคือเส้นเพราะพื้นที่ผิวโดยรวมลดลง ซึ่งสารอินทรีย์ด้วยเดียว C และ C พันธบัตร elute ช้ากว่าผู้ที่มี C = C หรือ C - C พันธะสาม เป็นคู่ หรือพันธะสามจะสั้นกว่าเดียว C และ C บอนด์

นอกจากเฟสเคลื่อนที่แรงตึงผิว ( องค์การโครงสร้างความแข็งแรงในตัว )ปรับเปลี่ยนระยะเคลื่อนที่อื่น ๆที่สามารถส่งผลกระทบต่อครูข้อมูล ตัวอย่าง เติมเกลืออนินทรีย์ทำให้เพิ่มเส้นปานกลางในแรงตึงผิวของสารละลาย ( ประมาณ 1.5 × 10 − 7 ไหม J / cm พนักงานขายต่อโมลสำหรับเกลือ 2.5 × 10 − 7 ไหม , J / ซม. พนักงานขายต่อโมล ( NH4 ) 2so4 ) และเพราะเอนโทรปีของครู . อินเตอร์เฟซที่ควบคุมโดยความตึงผิวนอกจากเกลือมีแนวโน้มเพิ่มขึ้นในเวลา เทคนิคนี้จะใช้สำหรับการแยกอ่อนและการกู้คืนของโปรตีนและการคุ้มครองของฤทธิ์ทางชีวภาพในการวิเคราะห์โปรตีน ( hydrophobic ปฏิสัมพันธ์ chromatography , HIC ) .

สำคัญอีกปัจจัยคือ pH เฟสเคลื่อนที่เนื่องจากมันสามารถเปลี่ยนนิสัย ) ของครู .ด้วยเหตุนี้วิธีการส่วนใหญ่ใช้บัฟเฟอร์แทน เช่น โซเดียม ฟอสเฟต เพื่อควบคุมพีเอชบัฟเฟอร์ตามวัตถุประสงค์ต่าง ๆการควบคุม pH เป็นกลางประจุบนพื้นผิวของซิลิกาและระยะ stationary เป็นไอออนคู่ตัวแทนครูเพื่อแก้ค่าแอมโมเนียม รูปแบบโดยทั่วไปเพิ่มในมวลสารเพื่อปรับปรุงการตรวจหาสารบางอย่างจากการก่อตัวของครูแอม adducts . ระเหยกรดอินทรีย์ เช่น กรด กรดฟอร์มิค หรือมากที่สุด มักจะเป็นเฟสเคลื่อนที่ถ้ามวลสารที่ใช้วิเคราะห์คอลัมน์น้ำทิ้งกรดไตรฟลูออโรอะซิติกถูกใช้บ่อยในการใช้งานเนื่องจากการคงอยู่ของมวลสารในเครื่อง และระบบการจัดส่งที่ละลาย แต่จะมีประสิทธิภาพในการปรับปรุงความคงทนของสาร เช่น กรดอินทรีย์ที่ใช้ในการใช้งานเครื่องตรวจจับอื่น ๆ ตามที่มันเป็น ค่อนข้างแข็งแรง กรดอินทรีย์ผลของกรดและบัฟเฟอร์ที่แตกต่างกันไปตามโปรแกรม แต่โดยทั่วไป ความละเอียด และปรับปรุง

กลับคอลัมน์เฟสจะค่อนข้างยากที่จะเกิดความเสียหายเมื่อเทียบกับคอลัมน์ซิลิกาปกติ แต่หลายคนกลับคอลัมน์เฟสประกอบด้วยอัล derivatized อนุภาคซิลิกา และไม่ควรใช้กับน้ำที่ฐานเป็นเหล่านี้จะทำลายต้นแบบชนิดอนุภาคพวกเขาสามารถใช้กับสารละลายกรด แต่คอลัมน์ไม่ควรสัมผัสกับกรดมากเกินไป มันสามารถกัดกร่อนโลหะชิ้นส่วนของเครื่องมือ HPLC . คอลัมน์ๆ ควรล้างทำความสะอาดด้วยตัวทำละลาย หลังใช้เพื่อเอากรดตกค้างหรือบัฟเฟอร์ และเก็บไว้ในองค์ประกอบที่เหมาะสมของตัวทำละลายโลหะ เนื้อหาของคอลัมน์ HPLC ต้องถูกเก็บไว้ต่ำถ้าความสามารถที่ดีที่สุดเพื่อแยกสารที่จะรักษา แบบทดสอบที่ดีสำหรับโลหะ เนื้อหาของคอลัมน์มีฉีดตัวอย่างซึ่งเป็นส่วนผสมของ 2 , 2 ' - 4 ' - ไบไพริดิน เพราะ 2 , 2 ' - bipy สามารถชุบโลหะ รูปร่างของยอดสำหรับ 22 ' - bipy จะบิดเบี้ยว ( หาง ) เมื่อไอออนโลหะมีอยู่บนพื้นผิวของซิลิกา . [ อ้างอิงที่จำเป็น ] . . . . . . .

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.