The purification process consists of

The purification process consists of three main steps:
extraction, addition of precipitant, and cooling crystallization.
After each step, any solid and liquid phases are separated by
centrifugation and characterized. For all experiments centrifugation was carried out with an acceleration of 20 000 g for
10 min and at a temperature set to that of the preceding step in
the separation process in order to avoid any additional
temperature effects.
Extraction was carried out in a temperature controlled
100 mL beaker. 10 g of JBM were suspended in 50 mL of solvent.
The solvents employed were (1) 32% (v/v) acetone in deionised
water as used bySumner and Hand (1928), (2) 32% (v/v) acetone
in 0.1 M phosphate buffer at pH 7, (3) deionised water, and (4)
0.1 M phosphate buffer at pH 7. The protein solution was
stirred for up to 7 min using a motorised overhead stirrer
operating at 800 rpm equipped with a paddle type radial
impeller. After the extraction the suspension was separated by
centrifugation. A total of three successive extractions steps,
each with a fresh aliquot of solvent, were carried out for each
JBM sample. In those experiments using solvents (3) and (4),
acetone was added later to the first extract after separation of
the solid and liquid fractions and to a final concentration of
32% (v/v). In order to avoid local supersaturation and a
potential degradation of urease, 1 mL of acetone was added
every 5 s under constant stirring until the required concentration was reached.
Cooling crystallization was carried out in a cold room. The
solutions were allowed to cool naturally from the extraction
temperature (28 8C except for experiments to optimise the
extraction procedure described elsewhere; Weber et al., 2005)
to the temperature of the cold room (4 8C). The cooling rate was
not monitored. The crystallization temperature of 4 8C was
reached after a short period of time and was maintained for
the remainder of the experiment. Seeding techniques were not
employed and the solutions were not agitated during the
crystallization process. Irrespective of the initial protein
concentration as determined by the extraction procedure, a
residence time of 2 days was allowed before sampling for
crystals in all cases. During this time the protein solution was
periodically checked for precipitate by optical microscopy.
After formation of a precipitate, this was separated from the
solution and both liquid and solid phases were characterized.
Extraction and crystallization experiments were also
carried out in the presence of three additives, 2-mercaptoethanol, nickel sulfate and ethylenediamine tetraacetate. The procedure employed was identical to that described
above. The concentrations of 2-mercaptoethanol ranged from
0.05 to 0.3 M, for NiSO4 the concentration was 0.5 M and for
EDTA a concentration of 0.1 M was used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กระบวนการ purification ประกอบด้วยขั้นตอนหลักสาม:สกัด เพิ่ม precipitant และเย็นตกผลึกหลังจากแต่ละขั้นตอน เฟสของแข็ง และของเหลวใด ๆ จะถูกคั่นด้วยcentrifugation และลักษณะการ สำหรับการทดลองทั้งหมด centrifugation ถูกดำเนินการ ด้วยความเร่ง g 20 000 สำหรับ10 นาทีและ ที่อุณหภูมิที่กำหนดที่ก่อนหน้านี้ในการแยกเพื่อหลีกเลี่ยงการใด ๆ เพิ่มเติมผลกระทบของอุณหภูมิสกัดได้ดำเนินการในการควบคุมอุณหภูมิบีกเกอร์ 100 mL 10 กรัมของ JBM ถูกหยุดชั่วคราวใน 50 mL ของตัวทำละลายหรือสารทำละลายลูกจ้างได้ (1) 32% (v/v) อะซีโตนใน deionisedน้ำ bySumner ใช้และมือ (1928), อะซิโตน 32% (v/v) (2)ใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 7 น้ำ deionised (3) และ (4)0.1 บัฟเฟอร์ฟอสเฟต M ที่ pH 7 โซลูชั่นโปรตีนกวนการถึง 7 นาทีใช้ช้อนคนจ่ายเป็นแบบการทำงานที่ 800 rpm พร้อมชนิดพายรัศมีผลักกัน หลังจากสกัด การระงับถูกคั่นด้วยcentrifugation ทั้งสามขั้นตอนสกัดต่อเนื่องแต่ละส่วนลงตัวสดของตัวทำละลาย ถูกดำเนินการสำหรับแต่ละตัวอย่าง JBM ในการทดลองที่ใช้หรือสารทำละลาย (3) และ (4),อะซีโตนถูกเพิ่มในภายหลังให้สารสกัด first หลังจากแบ่งแยกเศษของแข็ง และของเหลว และความเข้มข้น final32% (v/v) เพื่อหลีกเลี่ยง supersaturation ท้องถิ่นและเพิ่มศักยภาพการย่อยสลายของยู 1 mL ของอะซิโตนevery 5 s under constant stirring until the required concentration was reached.Cooling crystallization was carried out in a cold room. Thesolutions were allowed to cool naturally from the extractiontemperature (28 8C except for experiments to optimise theextraction procedure described elsewhere; Weber et al., 2005)to the temperature of the cold room (4 8C). The cooling rate wasnot monitored. The crystallization temperature of 4 8C wasreached after a short period of time and was maintained forthe remainder of the experiment. Seeding techniques were notemployed and the solutions were not agitated during thecrystallization process. Irrespective of the initial proteinconcentration as determined by the extraction procedure, aresidence time of 2 days was allowed before sampling forcrystals in all cases. During this time the protein solution wasperiodically checked for precipitate by optical microscopy.After formation of a precipitate, this was separated from thesolution and both liquid and solid phases were characterized.Extraction and crystallization experiments were alsocarried out in the presence of three additives, 2-mercaptoethanol, nickel sulfate and ethylenediamine tetraacetate. The procedure employed was identical to that describedabove. The concentrations of 2-mercaptoethanol ranged from0.05 to 0.3 M, for NiSO4 the concentration was 0.5 M and forEDTA a concentration of 0.1 M was used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กระบวนการไอออนบวกไฟ Puri ประกอบด้วยสามขั้นตอนหลัก:
. สกัดการเพิ่มขึ้นของตะกอนและการระบายความร้อนเป็นรูปธรรม
หลังจากที่แต่ละขั้นตอนใดขั้นตอนของแข็งและของเหลวจะถูกแยกออกโดย
การหมุนเหวี่ยงและโดดเด่น สำหรับทุกการทดลองปั่นได้ดำเนินการกับการเร่งความเร็วของ 20 000 กรัมสำหรับ
10 นาทีและที่อุณหภูมิตั้งกับที่ของขั้นตอนก่อนหน้าใน
กระบวนการแยกเพื่อหลีกเลี่ยงการเพิ่มเติมใด ๆ ที่
มีผลกระทบอุณหภูมิ.
สกัดได้ดำเนินการในการควบคุมอุณหภูมิ
100 บีกเกอร์มิลลิลิตร 10 กรัม JBM ถูกระงับใน 50 มลตัวทำละลาย.
ที่ใช้เป็นตัวทำละลาย (1) 32% (v / v) อะซีโตนใน deionised
น้ำที่ใช้ bySumner และมือ (1928), (2) 32% (v / v) อะซีโตน
ใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 7 (3) น้ำ deionised และ (4)
0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 7 วิธีการแก้ปัญหาของโปรตีนที่ถูก
กวนนานถึง 7 นาทีโดยใช้ค่าใช้จ่ายกวนกล
การดำเนินงานที่ 800 รอบต่อนาทีพร้อมกับการพายเรือ ประเภทรัศมี
ใบพัด หลังจากการสกัดระงับถูกแยกจากกันโดย
การหมุนเหวี่ยง รวมเป็นสามขั้นตอนการสกัดสารที่ต่อเนื่อง,
แต่ละคนมี aliquot ใหม่ของตัวทำละลายได้ดำเนินการในแต่ละ
ตัวอย่าง JBM ในการทดลองกับผู้ที่ใช้ตัวทำละลาย (3) และ (4),
อะซีโตนถูกเพิ่มเข้ามาในภายหลังเพื่อสกัดจากสายแรกหลังจากแยก
เศษของแข็งและของเหลวและความเข้มข้น NAL สายของ
32% (v / v) เพื่อหลีกเลี่ยงความเข้มข้นเกินจุดอิ่มตัวท้องถิ่นและ
การย่อยสลายศักยภาพของยูรีเอส 1 มิลลิลิตรของอะซิโตนถูกเพิ่มเข้ามา
ทุก 5 ภายใต้ตื่นเต้นอย่างต่อเนื่องจนกว่าจะมีความเข้มข้นที่ต้องการก็มาถึง.
ตกผลึกความเย็นได้ดำเนินการในห้องเย็น
การแก้ปัญหาที่ได้รับอนุญาตให้เย็นตามธรรมชาติจากการสกัด
อุณหภูมิ (28 8C ยกเว้นสำหรับการทดลองเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ
ขั้นตอนการสกัดที่อธิบายไว้ในที่อื่น. เวเบอร์, et al, 2005)
ที่อุณหภูมิห้องเย็น (4 8C) อัตราการเย็นตัวก็
ไม่ได้ตรวจสอบ อุณหภูมิการตกผลึกของ 4 8C ถูก
ถึงหลังจากระยะเวลาสั้น ๆ และได้รับการรักษา
ที่เหลือของการทดลอง เทคนิคการเพาะไม่ได้รับ
การจ้างงานและการแก้ปัญหาที่ไม่ได้ตื่นเต้นในระหว่าง
ขั้นตอนการตกผลึก โดยไม่คำนึงถึงโปรตีนเริ่มต้น
ความเข้มข้นตามที่กำหนดโดยขั้นตอนการสกัด
ที่อยู่อาศัยของเวลา 2 วันก่อนที่จะได้รับอนุญาตให้เก็บตัวอย่างสำหรับ
ผลึกในทุกกรณี ในช่วงเวลานี้การแก้ปัญหาของโปรตีนที่ถูก
ตรวจสอบเป็นระยะสำหรับตะกอนโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แสง.
หลังจากการก่อตัวของตะกอนนี้ถูกแยกออกจาก
การแก้ปัญหาและทั้งสองขั้นตอนของเหลวและของแข็งมีลักษณะ.
การสกัดและการทดลองการตกผลึกก็ยัง
ดำเนินการในการปรากฏตัวของสามสารเติมแต่ง 2-mercaptoethanol ซัลเฟตนิกเกิลและ tetraacetate ethylenediamine ขั้นตอนการจ้างงานก็เหมือนกับที่อธิบายไว้
ข้างต้น ความเข้มข้นของ 2-mercaptoethanol ตั้งแต่
0.05 0.3 M สำหรับ NiSO4 ความเข้มข้น 0.5 M และ
EDTA ความเข้มข้น 0.1 M ถูกนำมาใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ Puri ในกระบวนการจึงประกอบด้วยสามขั้นตอนหลัก :
การสกัด และหุนหันพลันแล่น และการระบายความร้อน
หลังจากแต่ละขั้นตอนใดขั้นตอนที่เป็นของแข็งและของเหลวจะถูกแยกออกโดย
ปั่นเพียง สำหรับการทดลองทำการปั่นด้วยการเร่งความเร็วของ 20 000 g
10 นาทีและที่อุณหภูมิตั้งไว้ที่ของขั้นตอนก่อนหน้านี้ใน
การแยกกระบวนการเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบของอุณหภูมิเพิ่มเติม
.
สกัดออกมาควบคุมอุณหภูมิ
บีกเกอร์ 100 ml . 10 กรัม jbm หยุดชั่วคราวใน 50 มิลลิลิตร สารละลายที่ใช้เป็นตัวทำละลาย
( 1 ) 32 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) อะซิโตนใน deionised
น้ำที่ใช้ bysumner และมือ ( 2471 ) , ( 2 ) 32 เปอร์เซ็นต์ ( v / v )
) 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7 3 deionised น้ำ ) และ ( 4 )
01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7 โปรตีนในสารละลาย
กวนนานถึง 7 นาที โดยใช้มอเตอร์ ค่าใช้จ่าย 800 รอบต่อนาทีหมุน
ปฏิบัติการที่ติดตั้งใบพัดแบบเรเดียล
ใบพัด . หลังจากการสกัดการแยกโดย
3 . ทั้งหมดสามต่อเนื่องสกัดขั้นตอน
แต่ละกับส่วนลงตัวสดของตัวทำละลาย พบว่าในแต่ละ
jbm ตัวอย่างในการทดลองที่ใช้ตัวทำละลาย ( 3 ) และ ( 4 ) ,
) ถูกเพิ่มเข้ามาในภายหลังเพื่อสกัดจึงตัดสินใจเดินทางหลังจากแยก
เศษส่วนที่เป็นของแข็งและของเหลวและการถ่ายทอด นาล ความเข้มข้นของ
32 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เพื่อหลีกเลี่ยงต่ำท้องถิ่นและการย่อยสลายของที่มีศักยภาพ
,
1 มิลลิลิตร สำหรับเพิ่มทุก 5 s ภายใต้การควบคุมที่กวนจนต้องใช้สมาธิมงคล
เย็นทำให้เป็นรูปธรรมได้ออกมาพักให้เย็น
โซลูชั่นได้รับอนุญาตให้เย็นตามธรรมชาติจากอุณหภูมิในการสกัด
( 28 8C ยกเว้นการทดลองเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ
ขั้นตอนการสกัดอธิบายที่อื่น ; เวเบอร์ et al . , 2005 )
ให้อุณหภูมิในห้องเย็น ( 8B ) อัตราความเย็นคือ
ไม่ตรวจสอบ การตกผลึกที่อุณหภูมิ 4 8C คือ
ถึงหลังจากช่วงเวลาสั้นของเวลาและมีการรักษาสำหรับ
ส่วนที่เหลือของการทดลอง การใช้เทคนิคไม่ได้
และโซลูชั่นไม่ปั่นป่วนในระหว่าง
กระบวนการการตกผลึก โดยไม่คำนึงถึงการโปรตีน
ความเข้มข้นตามที่กําหนด โดยขั้นตอนการสกัด ,
ระยะเวลา 2 วันได้รับอนุญาตก่อนที่คน
ผลึกในทุกกรณีในช่วงเวลานี้ โปรตีนในสารละลายเป็นระยะๆการตรวจสอบและโดยแสง

ใช้หลังจากการก่อตัวของตะกอนนี้ถูกแยกออกจาก
โซลูชั่นและทั้งของเหลวและของแข็งขั้นตอนการสกัดและการตกผลึกเป็นลักษณะ .

ซึ่งยังดำเนินการต่อหน้าสามสาร , อย่างเดียว , ซัลเฟตนิกเกิลลลีนไดแอม tetraacetate .ขั้นตอนการใช้ก็เหมือนกับที่อธิบาย
ข้างบน ความเข้มข้นของอย่างเดียวค่า
0.05 0.3 เมตร สำหรับ niso4 ความเข้มข้น 0.5 m และ EDTA ความเข้มข้น 0.1 M
ถูกใช้