We previously cloned a cDNA for sor

We previously cloned a cDNA for sorbitol dehydrogenase (SDH1) from Bombyx mori. In the present study
we cloned two additional cDNAs encoding SDHs (designated as SDH2a and SDH2b). The amino acid
sequences of SDH2ab were almost the same and had higher similarity to the SDHs of other organisms
than to B. mori SDH1. The SDH2ab and SDH1genes were located in tandem within about 40 kbp on
chromosome 21. SDH2ab mRNAs increased after exposing diapause eggs to 5
C for 40 days, beginning at
2 days post-oviposition, to break diapause. However, they were at very low levels in diapausing eggs
incubated at 25
C continuously from oviposition. These changes in expression pattern of SDH2ab mRNA
were almost the same as that of SDH1 mRNA. To understand whether SDH1 and SDH2 were responsible
for the SDH activity seen in diapause eggs exposed to 5
C for more than 60 days, we expressed a Histagged
SDH2a fusion protein in Escherichia coli and examined its enzymatic parameters. The maximum
activity of SDH2a observed at pH 8.4w9.0, and the Km value for sorbitol was 12.6 mM, similar to the
kinetic properties of other SDHs. Due to the significantly higher similarity between SDH2a and b, they
were thought to have similar kinetic properties. Therefore, we purified SDH from B. mori diapauseterminated
eggs exposed to 5
C for 300 days which showed higher SDH activity using two-step affinity
chromatography. The highly purified SDH showed a higher Kmvalue (125 mM) for sorbitol, being similar
to the value (136 mM) determined previously from Eadie-Hofstee plots using egg crude extract as an
enzyme source; additionally, the plots showed one slope indicating one Km value. Moreover, in silico
analysis indicated that no SDH genes other than SDH1 and 2ab are present in B. mori genomic DNA. These
results suggest that SDH1 activity may be responsible for the majority of the increased SDH activity seen
in diapause eggs after acclimation to 5
C rather than SDH2ab. Further, the relative sequence divergence
among these genes is consistent with the idea/hypothesis that the original SDH gene was first duplicated
into SDH1 and SDH2, and then SDH2 was duplicated into the SDH2a and SDH2b genes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ก่อนหน้านี้เรา cloned cDNA สำหรับ dehydrogenase ซอร์บิทอล (SDH1) จากไหม ในปัจจุบันศึกษาเราโคลน cDNAs เพิ่มเติม 2 รหัส SDHs (กำหนดเป็น SDH2a และ SDH2b) กรดอะมิโนลำดับของ SDH2ab ได้เกือบเหมือนกัน และมีความคล้ายคลึงกันสูงถึง SDHs ของสิ่งมีชีวิตอื่น ๆกว่าจะเกิดโมริ SDH1 SDH2ab และ SDH1genes มีอยู่ในตัวตามกันไปภายในประมาณ 40 kbpโครโมโซม 21 SDH2ab mRNAs เพิ่มหลังจากเปิดเผยไข่ diapause ถึง 5 C 40 วัน เริ่มต้นที่2 วันหลัง oviposition, diapause แบ่ง อย่างไรก็ตาม พวกเขาได้ในระดับที่ต่ำมากในไข่ diapausingincubated ที่ 25 C อย่างต่อเนื่องจาก oviposition การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ในรูปแบบนิพจน์ของ SDH2ab mRNAได้เกือบเหมือนของ SDH1 mRNA เข้าใจว่า SDH1 และ SDH2 รับผิดชอบสำหรับกิจกรรม SDH ในไข่ diapause สัมผัสถึง 5 C มากกว่า 60 วัน เราแสดงเป็น Histaggedโปรตีนอาหาร SDH2a Escherichia coli และพารามิเตอร์ของเอนไซม์ในระบบการตรวจสอบ สูงสุดกิจกรรมของ SDH2a สังเกตที่ค่า pH 8.4w9.0 และค่า Km สำหรับซอร์บิทอลเป็น 12.6 mM คล้ายกับการคุณสมบัติเดิม ๆ ของอื่น ๆ SDHs เนื่องจากการความคล้ายกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง SDH2a และ b พวกเขาไม่คิดว่า จะมีคุณสมบัติเหมือนเดิม ๆ ดังนั้น เราบริสุทธิ์ SDH จากโมริเกิด diapauseterminatedไข่ที่ถูกถึง 5 C 300 วันซึ่งแสดงให้เห็นกิจกรรม SDH สูงโดยใช้ความสัมพันธ์สองขั้นตอนchromatography SDH บริสุทธิ์สูงแสดงให้เห็นว่าความสูง Kmvalue (125 มิลลิเมตร) สำหรับซอร์บิทอล กำลังที่คล้ายกันค่า (136 mM) ที่กำหนดไว้ก่อนหน้านี้จาก Eadie Hofstee ลงจุดใช้สารสกัดหยาบไข่เป็นการแหล่งเอนไซม์ นอกจากนี้ โครงการแสดงให้เห็นความชันหนึ่งที่บ่งชี้หนึ่ง Km ค่า นอกจากนี้ ใน silicoวิเคราะห์ระบุว่า อยู่ในโมริเกิด genomic DNA ยีน SDH ไม่ SDH1 และ 2ab เหล่านี้ผลแนะนำว่า กิจกรรม SDH1 อาจชอบกิจกรรม SDH เพิ่มขึ้นที่เห็นส่วนใหญ่ในไข่ diapause หลัง acclimation ไป 5 C แทนที่เป็น SDH2ab เพิ่มเติม divergence ลำดับญาติระหว่างยีนเหล่านี้จะสอดคล้องกับแนวคิด/ทฤษฏีที่ยีน SDH เดิมถูกทำซ้ำครั้งแรกSDH1 และ SDH2 และ SDH2 ถูกทำซ้ำในยีน SDH2a และ SDH2b แล้ว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ก่อนหน้านี้เราโคลน cDNA สำหรับ dehydrogenase ซอร์บิทอ (SDH1) จากไหม ในการศึกษาปัจจุบัน
เราโคลนสอง cDNAs เพิ่มเติมเข้ารหัสบ้านเดี่ยว (กำหนดให้เป็น SDH2a และ SDH2b) กรดอะมิโน
ลำดับของ SDH2ab เกือบเดียวกันและมีความคล้ายคลึงกันที่สูงขึ้นเพื่อบ้านเดี่ยวของสิ่งมีชีวิตอื่น ๆ
มากกว่าที่จะ B. Mori SDH1 SDH2ab และ SDH1genes ตั้งอยู่ในตีคู่ภายในเวลาประมาณ 40 KBP บน
โครโมโซม 21. SDH2ab mRNAs เพิ่มขึ้นหลังจากการเปิดเผยไข่ diapause ถึง 5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 วันเริ่มต้นที่
2 วันที่โพสต์วางไข่เพื่อทำลาย diapause แต่พวกเขาอยู่ในระดับที่ต่ำมากในไข่ diapausing
บ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสต่อเนื่องจากการวางไข่ การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ในรูปแบบการแสดงออกของ mRNA SDH2ab
เกือบเช่นเดียวกับที่ SDH1 mRNA เพื่อให้เข้าใจว่า SDH1 SDH2 และมีความรับผิดชอบ
สำหรับกิจกรรม SDH ที่เห็นในไข่ diapause สัมผัสกับ 5? C เป็นเวลากว่า 60 วันเราแสดง Histagged
โปรตีนฟิวชั่น SDH2a ใน Escherichia coli และตรวจสอบพารามิเตอร์ของเอนไซม์ สูงสุด
ของกิจกรรม SDH2a สังเกตที่ 8.4w9.0 ค่า pH และค่ากมซอร์บิทอเป็น 12.6 มิลลิคล้ายกับ
คุณสมบัติการเคลื่อนไหวของบ้านเดี่ยวอื่น ๆ เนื่องจากความคล้ายคลึงกันสูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง SDH2a และ b พวกเขา
กำลังคิดว่าจะมีคุณสมบัติในการเคลื่อนไหวที่คล้ายกัน ดังนั้นเราจึงบริสุทธิ์ SDH จาก B. Mori diapauseterminated
ไข่สัมผัสกับ 5? C เป็นเวลา 300 วันซึ่งแสดงให้เห็นกิจกรรมบ้านเดี่ยวที่สูงขึ้นโดยใช้ความสัมพันธ์ของสองขั้นตอน
โค บ้านเดี่ยวบริสุทธิ์สูงแสดงให้เห็นว่าสูงกว่า Kmvalue (125 มิลลิเมตร) สำหรับซอร์บิทอเป็นคล้าย
กับค่า (136 มิลลิเมตร) ในการพิจารณาก่อนหน้านี้จากแปลง Eadie-Hofstee โดยใช้สารสกัดไข่เป็น
แหล่งที่มาของเอนไซม์ นอกจากนี้แปลงพบว่าหนึ่งความลาดชันที่ระบุค่า Km หนึ่ง นอกจากนี้ใน silico
วิเคราะห์ชี้ให้เห็นว่าไม่มียีน SDH อื่น ๆ กว่า SDH1 และ 2ab ที่มีอยู่ในบีดีเอ็นเอ Mori เหล่านี้
ผลการชี้ให้เห็นว่ากิจกรรม SDH1 อาจต้องรับผิดชอบสำหรับส่วนใหญ่ของกิจกรรมบ้านเดี่ยวเพิ่มขึ้นเห็น
ในไข่ diapause หลังจาก acclimation ถึง 5 องศาเซลเซียสมากกว่า SDH2ab นอกจากนี้ความแตกต่างลำดับญาติ
ในหมู่ยีนเหล่านี้มีความสอดคล้องกับความคิด / สมมติฐานที่ว่ายีน SDH เดิมซ้ำครั้งแรก
เป็น SDH1 และ SDH2 แล้ว SDH2 ถูกซ้ำเป็น SDH2a และยีน SDH2b

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราเคยโคลนนิ่งสายพันธุ์สำหรับซอร์บิทอล dehydrogenase ( sdh1 ) จากแบด . ในการศึกษาครั้งนี้เราโคลน
อีก 2 บริษัท cdnas การเข้ารหัส ( เขตและ sdh2a sdh2b ) ลำดับของกรดอะมิโน
sdh2ab เป็นเกือบเดียวกันและมีความคล้ายคลึงกับการเพิ่มสูงขึ้นของสิ่งมีชีวิตอื่น ๆนอกจาก บี โมริ sdh1
. และที่ sdh2ab sdh1genes อยู่ควบคู่ภายในประมาณ 40 kbp บน
โครโมโซม 21sdh2ab รหัสเพิ่มขึ้นหลังการเปิดเผย diapause ไข่ 5
เป็นเวลา 40 วัน เริ่มต้นที่
2 วันวางไข่โพสต์แบ่ง diapause . อย่างไรก็ตาม พวกเขาอยู่ในระดับต่ำมากใน diapausing ไข่
อุณหภูมิ 25 C
อย่างต่อเนื่องจากการวางไข่ . การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ในรูปแบบของการแสดงออกของยีน sdh2ab
เป็นเกือบเดียวกันกับของ sdh1 mRNA . เข้าใจและว่า sdh1 sdh2 ต้องรับผิดชอบ
สำหรับการมีกิจกรรมที่เห็นใน diapause ไข่ตาก 5
C มากกว่า 60 วัน เราแสดง histagged
sdh2a ของโปรตีนในแบคทีเรีย Escherichia coli และตรวจสอบของเอนไซม์ พารามิเตอร์ สูงสุด
กิจกรรม sdh2a สังเกตที่ pH 8.4w9.0 และค่ากม. ซอร์บิทอลเป็น 12.6 มิลลิเมตร คล้ายกับ
คุณสมบัติจลนศาสตร์ของบริษัทอื่น ๆ เนื่องจากการเพิ่มขึ้น sdh2a ความเหมือนระหว่างสองพวกเขากำลังคิดที่จะมีการเคลื่อนไหว
คุณสมบัติคล้ายกัน ดังนั้นเราจึงสามารถพัฒนาจากบี โมริ diapauseterminated
ไข่ตาก 5
C 300 วัน ซึ่งแสดงให้เห็นว่าสามารถใช้กิจกรรมสูงกว่า 2 พี่น้องกัน
โครมาโทกราฟี บริสุทธิ์สูงและสามารถแสดง kmvalue สูงกว่า ( 125 มม. ) เพื่อแสดงว่าเป็นเหมือนกัน
ค่า ( 135 มม. ) กำหนดไว้ก่อนหน้านี้จากเอดี้ hofstee แปลงใช้ไข่เป็นแหล่งเอนไซม์สกัด
; นอกจากนี้ แปลงหนึ่งซึ่งมีความลาดชันค่าหนึ่งกิโลเมตร นอกจากนี้ ในการวิเคราะห์โครงข่าย SDH
ที่ระบุว่าไม่มียีนมากกว่าคนอื่น ๆและอยู่ใน sdh1 2ab พ. โมริจีโนมดีเอ็นเอ เหล่านี้
พบว่ากิจกรรม sdh1 อาจรับผิดชอบส่วนใหญ่ของบริษัทที่เพิ่มขึ้นในกิจกรรมเห็น
diapause ไข่หลังจาก acclimation 5
C มากกว่า sdh2ab เพิ่มเติม ญาติลำดับความแตกต่างของยีน
เหล่านี้สอดคล้องกับความคิด / สมมติฐานที่ยีน SDH ดั้งเดิมเป็นครั้งแรกและเป็น sdh1 ๆ
sdh2 แล้ว sdh2 ถูกคัดลอกลง sdh2a และ sdh2b ยีน