Materials and MethodsProtein purifi

Materials and Methods
Protein purification and crystallization
The 3Dpol proteins all contained the solubility-enhancing
L446D/R455D mutations on the thumb domain [10] and
were expressed, purified, and crystallized as previously
described [13]. Crystals were transferred to 4 °C in
Hampton micro-bridges and slowly equilibrated into a
final solution containing 250 mM sodium acetate, 30% (w/
v) polyethylene glycol 400, 0.1 M cacodylic acid (pH 7.0),
and 2 mM DTT. NTP soaks were carried out using this
same solution supplemented with 10 mM NTP and 10 mM
MgCl2 for ~ 1 h, and crystals were flash frozen with liquid
nitrogen.
Structure determination
Diffraction data were collected on the MBC beamline
4.2.2 at the Advanced Light Source (Berkeley, CA) and on
a home-source R-AXIS IV++ detector with CuKα radiation.
Reflections were integrated, scaled, and merged using the
d*TREK suite of programs, and the reciprocal space lattice
was reindexed to the orientation observed for the wild-type
protein (PDB code 1RA6) using the program dtcell [40].
The mutant structures were solved by molecular replacement
with CNS [41] using PDB entry 1RA6 with the loop
deleted to minimize any model bias, and the new Rfree data
selections were uncoupled from the remainder of the data
using a 1500K simulated-annealing step. The structures were
refined using CNS with the MLI target, manual model building
was performed using O [42], and figures were generated with
the PyMOL Molecular Graphics System[43].
Biochemical assays
Polymerase elongation activity assays on oligo-dT/
poly(A) substrates were carried out by measuring
32P-uracil incorporation in quenched reaction time points
from 10 to 30 min, as previously described [13]. Data from
the mutants were always normalized to a wild-type control
reaction done in parallel. RNA-binding affinity was
assessed with a fluorescence polarization assay utilizing
a fluorescein 5′-end-labeled self-priming RNA hairpin
substrate with a 6-nt single-stranded templating sequence:
5′-UUUGACGGCCGGCCGAAAGGCCGGCC-3′ (stem
sequence underlined) [16]. Final reaction conditions for
the RNA-binding experiments were 10 nM RNA with 3Dpol
concentrations ranging from 200 nM to 30 μM in 50 mM
NaCl, 50 mM Hepes (pH 7.0), 4 mM DTT, 1.5 mM
magnesium acetate, 60 μM ZnCl2, and 0.1% NP40.
The single nucleotide incorporation assays were carried
out using an identical RNA hairpin sequence that was 5′ 32P end labeled instead of fluorescein labeled. Reaction
samples contained 2.5 μM 3Dpol, 150 nM RNA, 5.5 mM
NaCl, 50 mM Hepes (pH 7.5), 1.5 mM MgCl2, 60 μM
Table 2. Comparison of loop sequences in viral RdRPs
Structural motif a
Virus PDB Middle Loop B-helix
285- GMP S G CSG T SIF N S M -299
286- GMP S G CSG T SIF N S M -300
286- GMP S G CSG T SIF N S M -300
284- GMP S G CSG T SIF N S M -298
284- GVP S G CSG T SIF N T M -298
295- GMP S G CSA T SII N T I -309
305- GLP S G MPF T SVI N S I -319
297- GLP S G VPC T SQW N S I -311
597- QRG S G QVG T YGL N T F -611
601- QRG S G QVV T YAL N T F -615
402- QRG S G QPD T SAG N S M -416
Poliovirus 1RA6
Coxsackievirus 3DDK
Enterovirus 71 3N6L
HRV14 1XR5
HRV16 1XR7
FMDV 1U09
RHDV 1KHV
Norwalk 1SH0
Dengue 2J7U
JEV NS5 4K6M
BVDV 1S48
Hepatitis C 1C2P 279- CRA S G VLT T SCG N T L -293
a middle, middle finger; loop, SGXXXT; helix, Motif B helix that
is a core feature of the of palm domain.
Poliovirus 3D 1417 pol RdRP Translocation LoopZnCl2, 0.1% NP40, 4 mM DTT, and the appropriate NTPs
at a concentration of 25 μM each. The samples were
assembled and pre-incubated on ice for 30 min and then
transferred to a room temperature water bath for 30 min
prior to quenching the reactions with ethylenediaminetetraacetic
acid and running products on a denaturing 20%
acrylamide gel containing 7 M urea and 1× TBE buffer. An
analysis of the single nucleotide incorporation assays as a
function of reaction time showed essentially identical
results for incubation times from 20 to 45 min.
Accession numbers
The coordinates and structure factors have been deposited
in the Protein Data Bank with accession numbers as
listed in Table 1 (4NLO, 4NLP, 4NLQ, 4NLR, 4NLS, 4NLT,
4NLU, 4NLV, 4NLW, 4NLX, and 4NLY)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนและการตกผลึกโปรตีน 3Dpol ทั้งหมดประกอบด้วยการละลายเพิ่มL446D/R455D การกลายพันธุ์บนโดเมนของนิ้วหัวแม่มือ [10] และไม่เคย บริสุทธิ์ และตกผลึกเป็นอธิบาย [13] ผลึกมีการถ่ายโอนถึง 4 ° C ในตั้นไมโครสะพาน และ equilibrated ช้าลงในการประกอบด้วย 250 mM โซเดียม acetate, 30% (พร้อมโซลูชั่นสุดท้ายv) polyethylene glycol 400, 0.1 M cacodylic กรด (ค่า pH 7.0),และ 2 มม. DTT NTP เต็มผ้าอนามัยขนาดถูกนำออกใช้โซลูชันเดียวเสริม ด้วย NTP 10 มม.และ 10 มม.MgCl2 สำหรับ ~ 1 h และผลึกแฟลชแช่แข็งกับของเหลวไนโตรเจนกำหนดโครงสร้างมีการรวบรวมข้อมูลการเลี้ยวเบนบน beamline ช่อง MBC4.2.2 ขั้นสูงสว่าง (เบิร์กลีย์ CA) และในที่บ้านต้น IV แกน R ++ เครื่องตรวจจับ ด้วยรังสี CuKαได้รวม ปรับ และผสานโดยใช้การd * ชุดเดินป่า โปรแกรมและโครงตาข่ายประกอบพื้นที่ซึ่งกันและกันมีดัชนีการวางแนวที่พบชนิดป่าโปรตีน (PDB รหัส 1RA6) โดยใช้โปรแกรม dtcell [40]โครงสร้างกลายพันธุ์ได้แก้ไข โดยเปลี่ยนโมเลกุลกับ CNS [41] ด้วย PDB รายการ 1RA6 ลูปลบอคติแบบจำลองใด ๆ และข้อมูล Rfree ใหม่เลือกที่ uncoupled จากส่วนเหลือของข้อมูลใช้ขั้นตอนจำลองการอบเหนียว 1500K โครงสร้างถูกกลั่น CNS ด้วยเป้าหมาย MLI สร้างแบบจำลองด้วยตนเองทำใช้ O [42], และตัวเลขที่สร้างขึ้นด้วยPyMOL โมเลกุลกราฟิกระบบ [43]Assays ชีวเคมีพอลิเมอเรส elongation กิจกรรม assays บน oligo dT /poly(A) ได้ถูกดำเนินการ โดยวัด32P uracil ประสานในจุดเวลาปฏิกิริยา quenchedจาก 10 ถึง 30 นาที เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย [13] ข้อมูลจากสายพันธุ์ได้ตามปกติเสมอเพื่อควบคุมชนิดของป่าปฏิกิริยาที่ทำควบคู่กัน มีความสัมพันธ์ผูกอาร์เอ็นเอประเมิน ด้วยการ fluorescence โพลาไรซ์วิเคราะห์ใช้เป็น fluorescein 5′ สิ้นสุดมีป้ายชื่อว่า priming เองอาร์เอ็นเอกิ๊บพื้นผิว ด้วยลำดับ 6 nt ควั่นเดียว templating:5′-UUUGACGGCCGGCCGAAAGGCCGGCC-3′ (ก้านลำดับการขีดเส้นใต้) [16] เงื่อนไขของปฏิกิริยาขั้นสุดท้ายทดลองรวมอาร์เอ็นเออาร์เอ็นเอ nM 10 กับ 3Dpol ได้ความเข้มข้นตั้งแต่ 200 nM เพื่อ μM 30 ใน 50 มม.NaCl, Hepes (pH 7.0), 4 mM DTT, 1.5 มม. 50 มม.แมกนีเซียม acetate, 60 μM ZnCl2 และ 0.1% NP40ได้ดำเนินการ assays ประสานนิวคลีโอไทด์หนึ่งออกใช้การเหมือนอาร์เอ็นเอกิ๊บลำดับที่สิ้นสุด 32P 5′ ป้ายแทน fluorescein ป้าย ปฏิกิริยาประกอบด้วย 3Dpol 2.5 μM การ 150 nM อาร์เอ็นเอ 5.5 mMNaCl, 50 มม. Hepes (pH 7.5), 1.5 มม. MgCl2, 60 μMตารางที่ 2 เปรียบเทียบลำดับวนในไวรัส RdRPsแปลนโครงสร้างการไวรัส PDB วนกลาง B-เกลียว285-GMP S G CSG T SIF N S M-299286-GMP S G CSG T SIF N S M-300286-GMP S G CSG T SIF N S M-300284-GMP S G CSG T SIF N S M-298284 - GVP S G CSG T SIF N T M-298295-GMP S G CSA T SII N T ฉัน-309305 - GLP S G MPF T SVI N S ฉัน-319297 - GLP S G VPC T ตารางวา N S ฉัน-311597 - QRG S G QVG T YGL N T F-611601 - QRG S G QVV T YAL N T F-615402 - QRG S G QPD T SAG N S M-416Poliovirus 1RA6Coxsackievirus 3DDKเอนเทอโรไวรัส 71 3N6LHRV14 1XR5HRV16 1XR7FMDV 1U09RHDV 1KHVNorwalk 1SH02J7U ไข้เลือดออกJEV NS5 4K6MBVDV 1S48โรค 1C2P 279-CRA S G VLT T SCG N T L-293นิ้วกลางมือกลาง วน SGXXXT เกลียว เกลียว B แปลนที่เป็นคุณลักษณะหลักของการของปาล์มโดเมนPol poliovirus 3D 1417 RdRP การสับเปลี่ยน LoopZnCl2, 0.1% NP40, 4 มม. DTT และ NTPs ที่เหมาะสมที่ความเข้มข้นของ 25 μM ตัวอย่างดีรวบรวม และ incubated ในน้ำแข็ง 30 นาทีก่อนแล้วโอนย้ายไปห้องน้ำอาบน้ำ 30 นาทีก่อนที่จะชุบด้วยปฏิกิริยากับ ethylenediaminetetraaceticผลิตภัณฑ์กรด และทำงานบน denaturing 20%อะคริลาไมด์เจลที่ประกอบด้วยยูเรีย 7 M และบัฟเฟอร์ TBE 1 × มีวิเคราะห์ assays ประสานเดียวนิวคลีโอไทด์เป็นการฟังก์ชันของเวลาปฏิกิริยาที่แสดงให้เห็นว่าเป็นเหมือนกันผลลัพธ์สำหรับเวลาบ่ม 20 45 นาทีหมายเลขทะเบียนพิกัดและปัจจัยโครงสร้างมีการฝากในโปรตีนข้อมูลธนาคารกับหมายเลขทะเบียนเป็นแสดงในตารางที่ 1 (4NLO, 4NLP, 4NLQ, 4NLR, 4NLS, 4NLT4NLU, 4NLV, 4NLW, 4NLX และ 4NLY)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
ฟอกโปรตีนและการตกผลึก
โปรตีน 3Dpol ทั้งหมดที่มีการละลายเพิ่ม
L446D / การกลายพันธุ์ R455D บนโดเมนหัวแม่มือ [10] และ
ได้รับการแสดงความบริสุทธิ์และตกผลึกเป็นก่อนหน้านี้
อธิบายได้ [13] คริสตัลถูกโอนไปยัง 4 ° C ใน
สะพานไมโครแฮมป์ตันและ equilibrated ช้าลง
ทางออกสุดท้ายที่มีโซเดียมอะซิเตทมิลลิ 250, 30% (w /
v) และเอทิลีนไกลคอล 400, 0.1 M กรด cacodylic พบว่า (pH 7.0),
และ 2 มิลลิ DTT soaks NTP ได้ดำเนินการโดยใช้
วิธีการแก้ปัญหาเดียวกันเสริมด้วย 10 มม NTP และ 10 มิลลิ
MgCl2 สำหรับ ~ 1 ชั่วโมงและผลึกถูกแฟลชแช่แข็งด้วยของเหลว
ไนโตรเจน.
การกำหนดโครงสร้าง
ข้อมูลเลี้ยวเบนถูกรวบรวมไว้ในรายการ MBC ระบบลำเลียงแสง
4.2.2 ที่แหล่งกำเนิดแสงขั้นสูง (Berkeley, CA) และ
บ้านแหล่ง R-AXIS IV ++ ตรวจจับด้วยการฉายรังสีCuKα.
สะท้อนถูกบูรณาการปรับขนาดและกลมกลืนโดยใช้
D * TREK ชุดของโปรแกรมและตาข่ายพื้นที่ซึ่งกันและกัน
ถูก reindexed เพื่อวางแนวทางการปฏิบัติสำหรับ ป่าประเภท
โปรตีน (รหัส PDB 1RA6) โดยใช้โปรแกรม dtcell [40].
โครงสร้างกลายพันธุ์ได้รับการแก้ไขได้โดยการเปลี่ยนโมเลกุล
กับระบบประสาทส่วนกลาง [41] ใช้รายการ PDB 1RA6 กับห่วง
ลบเพื่อลดอคติรูปแบบใด ๆ และข้อมูล Rfree ใหม่
เลือก ถูกแยกออกจากส่วนที่เหลือของข้อมูล
โดยใช้ขั้นตอน 1500K จำลองการหลอม โครงสร้างถูก
กลั่นโดยใช้ระบบประสาทส่วนกลางที่มีเป้าหมาย MLI อาคารรูปแบบคู่มือการ
ได้รับการดำเนินการโดยใช้ O [42] และตัวเลขถูกสร้างขึ้นด้วย
PyMOL โมเลกุลระบบกราฟิก [43].
การวิเคราะห์ทางชีวเคมี
การวิเคราะห์กิจกรรมการยืดตัวโพลิเมอร์ใน Oligo-dT /
โพลี ( ) พื้นผิวที่ได้ดำเนินการโดยการวัด
การรวม 32P-uracil ในจุดเวลาปฏิกิริยาดับ
10-30 นาทีตามที่กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ [13] ข้อมูลจาก
การกลายพันธุ์ได้เสมอปกติควบคุมชนิดป่า
ปฏิกิริยาทำในแบบคู่ขนาน ความสัมพันธ์ของอาร์เอ็นเอผูกพันได้รับการ
ประเมินที่มีการทดสอบขั้วเรืองแสงใช้
fluorescein กิ๊บ RNA self-priming 5'-สิ้นการติดฉลาก
สารตั้งต้นที่มี 6-NT ลำดับ templating เดียวควั่น:
5'-UUUGACGGCCGGCCGAAAGGCCGGCC-3 '(STEM
ลำดับขีดเส้นใต้) [ 16] เงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยาสุดท้ายสำหรับ
RNA ผูกพันการทดลองเป็น 10 นาโนเมตร RNA กับ 3Dpol
ความเข้มข้นตั้งแต่ 200 นาโนเมตรถึง 30 ไมโครเมตร 50 มิลลิเมตร
โซเดียมคลอไรด์ 50 มิลลิ HEPES (pH 7.0), 4 มม DTT, 1.5 มม
อะซิเตทแมกนีเซียม 60 ไมครอน ZnCl2 และ 0.1% NP40.
จัดตั้งขึ้นในการตรวจเดี่ยวเบื่อหน่ายได้ดำเนิน
การโดยใช้ลำดับกิ๊บ RNA ที่เหมือนกันนั่นก็คือปลาย 5 '32P ติดป้ายแทน fluorescein labeled ปฏิกิริยา
ตัวอย่างที่มีอยู่ 2.5 ไมครอน 3Dpol 150 นาโนเมตร RNA, 5.5 มม
โซเดียมคลอไรด์ 50 มิลลิ HEPES (pH 7.5), 1.5 มิลลิ MgCl2 60 ไมครอน
ตารางที่ 2 การเปรียบเทียบลำดับวงในไวรัส RdRPs
โครงสร้างแรงจูงใจ
ไวรัส PDB กลางห่วง B-เกลียว
285 - GMP SG CSG T SIF NSM -299
286- GMP SG CSG T SIF NSM -300
286- GMP SG CSG T SIF NSM -300
284- GMP SG CSG T SIF NSM -298
284- GVP SG CSG T SIF NTM -298
295 - GMP SG CSA T SII NTI -309
305- GLP SG MPF T SVI NSI -319
297- GLP SG VPC T ตารางวา NSI -311
597- QRG SG QVG T YGL NTF -611
601- QRG SG QVV T YAL NTF -615
402 - QRG SG QPD T SAG NSM -416
โปลิโอ 1RA6
coxsackievirus 3DDK
Enterovirus 71 3N6L
HRV14 1XR5
HRV16 1XR7
FMDV 1U09
RHDV 1KHV
วอล์ค 1SH0
ไข้เลือดออก 2J7U
JEV NS5 4K6M
BVDV 1S48
ไวรัสตับอักเสบซี 1C2P 279- CRA SG VLT ทีเอสซีจี NTL -293
กลางกลาง นิ้ว; ห่วง SGXXXT; เกลียวเกลียว Motif บีที่
เป็นคุณสมบัติหลักของโดเมนปาล์ม.
โปลิโอ 3D 1417 POL RdRP โยกย้าย LoopZnCl2, 0.1% NP40, 4 มม DTT และ NTPs เหมาะสม
ที่ความเข้มข้น 25 ไมโครโมแต่ละ ตัวอย่าง
ประกอบและก่อนบ่มบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาทีและจากนั้น
โอนไปที่อุณหภูมิห้องอาบน้ำเป็นเวลา 30 นาที
ก่อนที่จะดับปฏิกิริยากับ ethylenediaminetetraacetic
กรดและทำงานบนผลิตภัณฑ์ denaturing 20%
เจลริลาไมด์ที่มี 7 M ยูเรียและ 1 × บัฟเฟอร์ TBE
การวิเคราะห์การตรวจการรวมตัวกันเบื่อหน่ายเดียวเป็น
หน้าที่ของเวลาปฏิกิริยาแสดงให้เห็นเหมือนกันเป็นหลัก
ผลสำหรับเวลาฟักตัว 20-45 นาที.
หมายเลขภาคยานุวัติ
พิกัดและปัจจัยโครงสร้างได้รับการฝากเงิน
ในธนาคารข้อมูลโปรตีนที่มีตัวเลขการเข้าเป็น
บริษัท จดทะเบียนในตารางที่ 1 (4NLO, 4NLP, 4NLQ, 4NLR, 4NLS, 4NLT,
4NLU, 4NLV, 4NLW, 4NLX และ 4NLY)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการผลิตโปรตีนและการตกผลึก

3dpol โปรตีนทั้งหมดที่มีอยู่ในการละลายเพิ่ม
l446d / r455d การกลายพันธุ์ในง่ายๆโดเมน [ 10 ] และ
มีความบริสุทธิ์ และตกผลึกเป็นก่อนหน้านี้
อธิบาย [ 13 ] ผลึกที่ถูกโอนไปยัง 4 ° C
Hampton ไมโครสะพานและค่อยๆ equilibrated
สุดท้ายในสารละลายที่มีโซเดียมอะซีเตท 250 มม. 30 % ( w /
5 ) polyethylene glycol 400 , 0.1 M แคโคดิลิกแอซิด ( pH 7.0 ) ,
ส่วน 2 มิลลิเมตร NTP soaks ทดลองใช้โซลูชั่นเดียวกันนี้
4-D 10 มม. และ 10 มม. ชุด NTP
~ 1 H , และคริสตัลถูกแฟลชแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลว
.

โดยการหาโครงสร้างการเก็บข้อมูลในรูปบีมไลน์
4.2.2 ที่แหล่งกำเนิดแสงขั้นสูง ( Berkeley , CA ) และบน
แหล่งบ้าน r-axis IV ด้วยเครื่องตรวจจับรังสี cuk α .
สะท้อนเป็นแบบปรับขนาด และผสานการใช้
d * Trek ชุดของโปรแกรม และส่วนพื้นที่การวางแนวเป็น reindexed ขัดแตะ

) ของโปรตีน ( รหัส PDB 1ra6 ) โดยใช้โปรแกรม dtcell [ 40 ] .
โครงสร้างกลายพันธุ์ ถูกแก้ไขโดย
เปลี่ยนโมเลกุลกับคมช. [ 41 ] ใช้ GAS กับห่วง
1ra6 รายการลบเพื่อลดแบบอคติและการเลือกข้อมูล rfree
ใหม่เปิ้ลจากส่วนที่เหลือของข้อมูล
ใช้ 1500K การดำรงอยู่ขั้นตอน โครงสร้างที่ถูกใช้กับ MK
กลั่นหรือเป้าหมาย สร้างแบบจำลองโดยใช้คู่มือ
o [ 42 ] และตัวเลขที่ถูกสร้างขึ้นด้วยระบบกราฟิก pymol โมเลกุล
[ 43 ] .

~ )โดยกิจกรรมในการใช้โอลิโก DT /
poly ( A ) เมื่อทดลองวัด
32p Name ประสานในดับเวลาจุด
จาก 10 ถึง 30 นาที , ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 13 ] ข้อมูลจาก
มนุษย์กลายพันธุ์เสมอเพื่อควบคุมมาตรฐานของปฏิกิริยา
ทำคู่ขนานกัน ซึ่งผูกติดอยู่กับการโพลาไรซ์ในการประเมิน

ใช้ี่ 5 นั้นเป็นปลายป้ายรองพื้นตนเอง RNA กิ๊บ
พื้นผิวด้วย 6-nt เดียวติด templating ลำดับ :
5 ’ - ’ ( ต้น
uuugacggccggccgaaaggccggcc-3 ลำดับขีดเส้นใต้ ) [ 16 ] ปฏิกิริยาสุดท้ายเงื่อนไขผูกพัน
rna การทดลอง 10 nm ซึ่งมี 3dpol
ความเข้มข้นตั้งแต่ 200 nm 30 μ m ในขนาด 50 mm
, 50 มิลฮีเปส ( pH 7.0 ) , DTT 4 มม. 1.5 มม.
แมกนีเซียมแอซีเทต , 60 μ zncl2 M ,และ 0.1% np40 .

เดี่ยวเบส ) ศึกษาการใช้ที่เหมือนกันซึ่งกิ๊บลำดับที่ 5 นั้น 32p จบป้ายแทนี่ป้าย ตัวอย่างปฏิกิริยา
ที่มีอยู่ 2.5 μ M 3dpol 150 nm RNA , 5.5 mm
NaCl , 50 มิลฮีเปส ( pH 7.5 ) , 1.5 mm ชุดโต๊ะ 60 μ m
2 การเปรียบเทียบลำดับในวงไวรัส rdrps
โครงสร้างแม่ลายเป็นไวรัส PDB กลางวง b-helix

285 - GMP S G CSG T ซิฟ N S M - 299 - GMP S G
0 n M - T เพื่อบริการลูกค้า 300
286 - GMP S G CSG T ซิฟ N S M - 300
284 - GMP S G CSG T ซิฟ N S M - 298
284 - encyclopedia S G CSG T ซิฟ N T M - 295 - GMP S G 298
t n t i - CSA SII 309
305 - GK S G MPF T SVI n S i - 319
297 - GK S G VPC T ตารางวา N S ฉัน - 311 - qrg S G
597 qvg T
T F - n YGL 601 - 620 qrg S G T T F - n qvv เยล 615
402 - qrg S G qpd T เหี่ยว N S M -

1ra6 โปลิโอไวรัส ,คอกซากี่ไวรัสเอนเทอโรไวรัส 71 3n6l 3ddk

hrv14 1xr5

hrv16 1xr7 fmdv 1u09
rhdv 1khv


jev Norwalk 1sh0 ไข้เลือดออก 2j7u NS5 4k6m

bvdv 1s48 ไวรัสตับอักเสบ ซี 1c2p 279 - Cra S G T T L - N VLT เอสซีจี 293
ตรงกลาง นิ้วกลาง ; ห่วง sgxxxt ; เกลียว รูปแบบ B เกลียว
เป็นหลักว่าคุณลักษณะของ ปาล์ม โดเมน .
ไอโซบาร์ 3D 1080 พล rdrp โยกย้าย loopzncl2 0.1 % np40 DTT , 4 มิลลิเมตร และ ntps เหมาะสม
ที่ความเข้มข้น 25 μ M แต่ละ จำนวน
ประกอบและก่อนบ่มแข็งเป็นเวลา 30 นาทีจากนั้น
ย้ายห้องอุณหภูมิน้ำประมาณ 30 นาที ก่อนอาบน้ำ
ดับปฏิกิริยากับกรดบอน
และวิ่งผลิตภัณฑ์บนี่ 20 %
7 M ยูเรียอะคริลาไมด์เจลที่มีบัฟเฟอร์ทีบี 1 × . มีการวิเคราะห์ยีนเดียวกัน

) เป็นฟังก์ชั่นของเวลาปฏิกิริยา พบเป็นหลักเหมือนกัน
ผลการบ่มครั้งจาก 20 ถึง 45 นาที

บัตรตัวเลขพิกัดและปัจจัยโครงสร้างที่ได้รับฝากไว้
ในธนาคารข้อมูลโปรตีนที่มีตัวเลขเพิ่มขึ้นเป็น
ที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 ( 4nlo 4nlp 4nlq , , 4nlr 4nls 4nlt , , , , 4nlu 4nlv 4nlw
, , , 4nlx และ 4nly )