Total (viable and dead) bacteria we

Total (viable and dead) bacteria were quantified with the
LightCycler 1.1 system (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim,
Germany). The uidA beta-D-glucuronidase gene from E. coli and the
slo streptolysin O gene from S. pyogenes were amplified with the
primers listed in Table 1. The uidA-F (forward) and uidA-R (reverse)
primers were designed previously.9 The other primers were designed using Primer-BLAST software.10 SYBR Premix Ex Taq
(Takara Bio Inc., Otsu, Japan) was used for real-time PCR. In each
glass capillary tube, 2 mL extracted DNA were added to 23 mL PCR
mixture containing 12.5 mL SYBR Premix Ex Taq (2 concentration;
containing Takara Ex Taq HS, dNTP mixture, Mg2þ, and
SYBR Green I), 1 mL primer mixture (5 mM each primer), and 9.5 mL
H2O (PCR grade). The following PCR conditions were used: an initial
denaturation step of 2 min at 95 C, followed by 36 cycles of 95 C
denaturation for 10 s and 65 C annealing and extension for 45 s.
The amplification reactions and data acquisition were performed
using a LightCycler 1.1 (Roche Diagnostics). To avoid crosscontamination,
pre-PCR sample processing was performed in a
separate room. To check for the amplification of human DNA, K562
DNA (Promega Corporation, Madison, WI) was used as a template
for real-time PCR.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แบคทีเรียทั้งหมด (ทำงานได้ และตาย) ได้ quantified ด้วยการLightCycler 1.1 ระบบ (GmbH วินิจฉัยโร มาเยอรมนี) ยีนเบต้า-D-glucuronidase uidA จาก E. coli และยีน streptolysin O slo จาก S. pyogenes ถูกขยายด้วยการไพรเมอร์ที่แสดงในตารางที่ 1 UidA-F (ข้างหน้า) และ uidA-R (ย้อนกลับ)ไพรเมอร์ได้ previously.9 ออกแบบไพรเมอร์อื่น ๆ ที่ถูกออกแบบใช้พื้นระเบิด software.10 Premix SYBR Ex Taq(Takara ชีวภาพ Inc. โอสึ ญี่ปุ่น) ใช้สำหรับ PCR แบบเรียลไทม์ ในแต่ละหลอดแก้วรูพรุน ดีเอ็นเอที่แยกได้เพิ่ม 23 mL PCR 2 mLประกอบด้วย 12.5 mL ผสม Premix SYBR อดีต Taq (ความเข้มข้น 2ประกอบด้วย Takara อดีต Taq HS, dNTP ผสม Mg2þ และSYBR เขียวฉัน), 1 mL ผสมรองพื้น (5 มม.รองพื้นแต่ละ), และ 9.5 mLH2O (PCR เกรด) ใช้ PCR เงื่อนไขต่อไปนี้: การเริ่มต้นขั้นตอน denaturation 2 นาทีที่ 95 C ตามรอบ 36 ของ 95 Cdenaturation 10 s 65 C การอบเหนียว และส่วนขยายสำหรับ 45 sทำปฏิกิริยาขยายและข้อมูลการใช้ 1.1 LightCycler (โรชวินิจฉัย) เพื่อหลีกเลี่ยงการ crosscontaminationทำการประมวลผล PCR พื้นฐานตัวอย่างในการแยกห้อง การตรวจสอบขยายของมนุษย์ DNA, K562ดีเอ็นเอ (Promega Corporation เมดิสัน WI) ถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับ PCR แบบเรียลไทม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวม (ทำงานได้และตาย) ปริมาณแบคทีเรียที่มี
LightCycler? 1.1 ระบบ (Roche Diagnostics GmbH, ไฮม์,
เยอรมนี) ยีนเบต้า-D-glucuronidase uidA จากเชื้อ E. coli
และยีนSLO Streptolysin O จาก pyogenes
เอสถูกขยายด้วยไพรเมอร์ที่ระบุไว้ในตารางที่1 uidA-F (ไปข้างหน้า) และ uidA-R (ย้อนกลับ)
ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบมาก่อนหน้านี้ 0.9 ไพรเมอร์อื่น ๆ ที่ได้รับการออกแบบโดยใช้ไพรเมอร์-ระเบิด software.10 SYBR? พรีมิกซ์ Ex Taq?
(Takara Bio อิงค์ Otsu, ญี่ปุ่น) ที่ใช้สำหรับ PCR แบบ real-time ในแต่ละหลอดเส้นเลือดฝอยแก้ว 2 มิลลิลิตรสกัดดีเอ็นเอถูกเพิ่มเข้าไปใน 23 มิลลิลิตร PCR ส่วนผสมที่มี 12.5 มิลลิลิตร SYBR? พรีมิกซ์ Ex Taq? (2 ความเข้มข้น?? มี Takara Ex Taq HS ผสม dNTP, Mg2þและ? SYBR สีเขียว I) ส่วนผสมไพรเมอร์ 1 มิลลิลิตร (5 มิลลิแต่ละไพรเมอร์) และ 9.5 มิลลิลิตร H2O (เกรด PCR) ต่อไปนี้เงื่อนไข PCR ถูกนำมาใช้: เริ่มต้นขั้นตอนdenaturation 2 นาทีที่ 95 C ตามด้วย 36 รอบ 95 C? denaturation 10 และ 65 หลอมซีและส่วนขยายสำหรับ 45 หรือไม่?. ปฏิกิริยาการขยายและการเก็บข้อมูลได้ดำเนินการใช้ LightCycler หรือไม่? 1.1 (Roche Diagnostics) เพื่อหลีกเลี่ยงการ crosscontamination, การประมวลผลตัวอย่างก่อน-PCR ได้ดำเนินการในห้องแยกต่างหาก เพื่อตรวจสอบการขยายของดีเอ็นเอมนุษย์ K562 ดีเอ็นเอ (Promega คอร์ปอเรชั่น Madison, WI) ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบสำหรับPCR แบบ real-time

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Today the island covered with fog everywhere.Today the island covered with fog everywhere.Today the island covered with fog everywhere.Today the island covered with fog everywhere.