in methanol to prepare various solu

in methanol to prepare various solutions at concentrations
of 80, 40, 20, 10, 8, 5 and 2 lg/ml. Each sample solution
(2 ml) was mixed with 1 ml of 0.2 mM DPPH in methanol.
The mixture was shaken vigorously and maintained for
30 min in dark. The absorbance was measured at 517 nm.
The absorbance of the control was obtained by replacing
the sample with methanol. BHA and vitamin E were used
as positive control. The scavenging activity was calculated
using the formula, Scavenging activity (%) = [(A517 of control
A517 of sample)/A517 of control]  100.
2.7.2. Inhibition of microsome lipid peroxidation
Lipid peroxidation of rat microsome was carried out as
reported earlier (Sabu & Kuttan, 2002). Reaction mixture
(0.5 ml) containing 0.1 ml (25%, w/v) of rat liver homogenate
in Tris_HCl buffer (40 mM, pH 7.0), 30 mM KCl
(100 ll), 0.16 mM ferrous iron (100 ll), 0.06 mM ascorbic
acid (100 ll) and the sample solution (100 ll) at various concentrations
were incubated for 1 h at 37 C. The lipid peroxide
formed was measured by thiobarbituric acid reactive
substances (TBARS) values (Ohkawa, Ohishi, & Yagi,
1979). One milliliter of aliquot were added to 2 ml of thiobarbituric
acid reagent (15% trichloroacetic acid, 0.375% thiobarbituric
acid and 0.25 M hydrochloric acid). Then
heated in boiling bath for 15 min. After cooling down to
room temperature, it was centrifuged at 1000g for 10 min.
The absorbance of supernatant at 532 nm was recorded.
The inhibition capacity of lipid peroxidation was determined
by comparing the results of the test compounds with that of
control. The percent antioxidant activity using the following
equation, lipid peroxidation inhibition (%) = [(A532 of control
A532 of sample)/A532 of control]  100. BHA and vitamin
E were used as positive control.
2.8. Statistical analysis
Data were presented as mean ± standard deviation (SD)
of three determinations. Statistical analyses were performed
using a one-way analysis of variance. The IC50 values
were calculated by linear-regression analysis. Results
were calculated by employing the statistical software (SPSS
13.0, SPSS Inc., USA).
3. Results and discussion
3.1. Comparison of phenolic content and antioxidant activity
of four fractions
Phenolic compounds have been proved to be responsible
for the antioxidant activity of emblica fruit (Kumar, Nayaka,
Dharmesh, & Salimath, 2006). The total phenolic
contents of all fractions and their DPPH radical scavenging
activities were shown in Table 1. The ethyl acetate fraction
showed the highest phenolic content (439.9 mg/g) and
DPPH radical scavenging activity (IC50 12.6 lg/ml) as
compared with other three solvent fractions. This fraction
was subjected to preliminary purification on a Sephadex
LH-20 column, giving eight main fractions, which were
tested under the same experimental conditions. In comparison
with the ethyl acetate fraction, fraction IV and VI
were much stronger in the DPPH test (IC50 6.8 and
4.2 lg/ml, respectively) and showed a higher level of total
phenols (513.5 and 639.9 mg/g, respectively), suggesting
that it contained a higher concentration of the active principles
responsible for the observed free-radical scavenging
activity. The activities of these two fractions were higher
than that of vitamin E (IC50 18.3 lg/ml) used as a positive
control.
3.2. Separation of the phenolics from ethyl acetate fraction
With the aim to characterize the phytochemical profile of
emblica, fractions IV and VI were purified by HPLC (Figs. 1
and 2). In this analysis, the chromatographic separation
from the fraction IV yield pure compounds 1 (retention time
(tR) = 21.161 min, 18.0 mg), 2 (tR = 22.450 min, 15.0 mg)
and 3 (tR = 23.850 min, 7.5 mg) (Fig. 1). The chromatographic
separation of fraction VI afforded three major compounds
4 (tR = 12.574 min, 13.0 mg), 5 (tR = 16.402 min,
15.0 mg) and 6 (tR = 21.015 min, 8.5 mg) (Fig. 2).
Thus, these isolated compounds were used for further
identification.
3.3. Identification of compounds 1–6
Compound 1: greenish yellow crystalline powder; UV
kmax (CH3OH) nm: 218, 274; ESI-MS, m/z 953 [M+H]+,
and 975 [M+Na]+; 1H NMR (CD3OD): d 4.36 (m), 4.45
(m), 4.82 (m), 4.98 (m), 5.21 (s), 5.45 (brs), 5.52 (s), 5.55
(s), 5.59 (s), 6.29 (d), 6.58 (s), 6.59 (brs), 6.69 (s), 6.71 (s),
7.10 (s), 7.16 (s), 7.22 (s), 7.24 (s), 7.26 (s) and 7.30 (s);
13C NMR (CD3OD): d 92.6 (C-1), 74.6 (C-5), 63.9 (C-3),
71.7 (C-2), 68.2 (C-4), 65.3 (C-6), 112.1 (C-2, 6), 118.7
(C-1), 141.7 (C-4), 147.4 (C-3, 5), 166.5 (C@O) (A ring);
126.5 (C-2), 125.2 (C-20), 147.1 (C-6), 147.1 (C-60), 118.6
(C-1), 117.2 (C-10), 144.3 (C-40), 147.1 (C-4), 139.7 (C-5),
138.5 (C-50), 109.2 (C-3), 111.4 (C-30), 168.4 (C0@O),
170.9 (C@O) (B and C ring); 116.5 (C-1), 138.5 (C-5),
138.5(C-3), 118.1 (C-2), 146.4 (C-4), 146.2 (C-6), 166.9
(C@O) (D ring); 53.5 (C-1), 96.7 (C-5), 125.9 (C-3), 149.3
(C-2), 196.0 (C-4), 97.4 (C-6), 167.1 (C@O) (E ring). T

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในเมทานอลเพื่อเตรียมโซลูชั่นต่าง ๆ ที่ความเข้มข้นของ 80, 40, 20, 10, 8, 5 และ 2 lg/ml แก้ปัญหาแต่ละอย่าง(2 ml) ถูกผสมกับ 0.2 mM DPPH ในเมทานอล 1 มิลลิลิตรส่วนผสมเขย่าแรง ๆ และรับการรักษา30 นาทีในที่มืด ค่าที่ถูกวัดที่ 517 nmได้รับค่าของตัวควบคุม โดยการเปลี่ยนตัวอย่างกับเมทานอล ใช้ BHA และวิตามินอีเป็นการควบคุมเชิงบวก กิจกรรมการ scavenging ได้คำนวณการใช้สูตร Scavenging กิจกรรม (%) = [(A517 ตัวควบคุมA517 of sample)/A517 ควบคุม] 1002.7.2. การยับยั้ง peroxidation ของไขมัน microsomePeroxidation ของไขมันของหนู microsome ดำเนินการเป็นรายงานก่อนหน้านี้ (สบู่ & Kuttan, 2002) ส่วนผสมของปฏิกิริยา(0.5 มล.) ที่ประกอบด้วย 0.1 มล. (25%, w/v) ของตับหนู homogenateในบัฟเฟอร์ Tris_HCl (40 mM, pH 7.0), 30 mM KCl(100 ll), 0.16 มม.เหล็กเหล็ก (100 ll), แอสคอร์บิค 0.06 มม.กรด (100 ll) และสารละลายตัวอย่าง (100 ll) ที่ความเข้มข้นต่าง ๆได้รับการกก 1 ชั่วโมงที่ 37 c ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ไขมันเกิดขึ้นโดยวัดจากปฏิกิริยากรด thiobarbituricค่าสาร (TBARS) (Ohkawa, Ohishi และยา งิ1979) . 2 มล.ของ thiobarbituric เพิ่มหนึ่งมิลลิเมตรของส่วนลงตัวรีเอเจนต์กรด (กรด trichloroacetic 15%, thiobarbituric 0.375%กรดและ 0.25 M กรดไฮโดรคลอริก) จากนั้นความร้อนในการต้มน้ำ 15 นาที หลังจากเย็นลงไปอุณหภูมิห้อง มันถูกจากที่ 10 นาที 1000gค่าของ supernatant ที่ 532 nm บันทึกกำหนดความจุการยับยั้งของ peroxidation ของไขมันโดยการเปรียบเทียบผลของสารทดสอบกับของการควบคุม กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระเปอร์เซ็นต์ใช้ต่อไปนี้สมการ การยับยั้ง peroxidation ของไขมัน (%) = [(A532 ควบคุมA532 of sample)/A532 ควบคุม] 100 BHA และวิตามินE ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก2.8. สถิติวิเคราะห์ข้อมูลถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD)การวิเคราะห์ปริมาณสาม ดำเนินการวิเคราะห์ทางสถิติใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ค่า IC50มีคำนวณ โดยการวิเคราะห์ถดถอยเชิงเส้น ผลลัพธ์คำนวณ โดยใช้ซอฟต์แวร์ทางสถิติ (SPSS13.0, SPSS Inc., USA)3. ผล และการอภิปราย3.1. การเปรียบเทียบของฟีนอกิจกรรมเนื้อหาและสารต้านอนุมูลอิสระของสี่ประโยคสารประกอบฟีนอได้รับการพิสูจน์แล้วจะรับผิดชอบสำหรับกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระของผลไม้กระชับรูขุมขน (Kumar, NayakaDharmesh, & Salimath, 2006) ฟีนอลรวมเนื้อหาของเศษส่วนทั้งหมดและของ DPPH รุนแรง scavengingกิจกรรมถูกแสดงในตารางที่ 1 เศษส่วนอะแสดงให้เห็นว่าเนื้อหาฟีนอสูง (439.9 mg/g) และDPPH รุนแรง scavenging กิจกรรม (IC50 12.6 lg/มิลลิลิตร) เป็นเมื่อเทียบกับเศษส่วนที่ตัวทำละลายอื่น ๆ สาม เศษส่วนนี้ได้ภายใต้การบำบัดเบื้องต้นบน Sephadex มีLH-20 คอลัมน์ แปดหลักเลขเศษส่วน ซึ่งทำให้ทดสอบภายใต้เงื่อนไขทดลองเดียวกัน ในการเปรียบเทียบกับเศษส่วนเอทิลอะซิเตท เศษส่วน IV และ VIมีความแข็งแกร่งมากในการทดสอบ DPPH (IC50 6.8 และ4.2 lg/ml ตามลำดับ) และพบว่าระดับสูงขึ้นทั้งหมดแอมโมเนียม (639.9 mg/g และ 513.5 ตามลำดับ), ภาษาว่า มันประกอบด้วยความเข้มข้นสูงของหลักการใช้งานรับผิดชอบสำหรับ scavenging ฟรีอนุมูลสังเกตกิจกรรม กิจกรรมของประโยคที่สองเหล่านี้ได้สูงขึ้นวิตามินอี (IC50 18.3 lg/มิลลิลิตร) ที่ใช้เป็นบวกการควบคุม3.2. แยก phenolics ที่จากเศษส่วนอะการกำหนดลักษณะโปรไฟล์ phytochemical ของกระชับรูขุมขน เศษส่วน IV และ VI ได้บริสุทธิ์ โดย HPLC (มะเดื่อ. 1และ 2) ในการวิเคราะห์นี้ การแยกโครมาจากเศษส่วน IV สารประกอบบริสุทธิ์ 1 (เวลาการเก็บรักษาผลผลิต(tR) = 21.161 นาที 18.0 มิลลิกรัม), 2 (tR = 22.450 นาที 15.0 มิลลิกรัม)และ 3 (tR = 23.850 นาที 7.5 mg) (รูปที่ 1) การโครมาการแยกเศษส่วน VI afforded สารประกอบหลักที่สาม4 (tR = 12.574 นาที 13.0 มิลลิกรัม), 5 (tR = 16.402 นาที15.0 มิลลิกรัม) และ 6 (tR = 21.015 นาที 8.5 mg) (2 รูป)ดังนั้น แยกสารเหล่านี้ใช้สำหรับเพิ่มเติมรหัส3.3 รหัสของสาร 1 – 6สารที่ 1: เขียวเหลืองผงผลึก รังสียูวีnm kmax (CH3OH): 218, 274 ESI MS, m/z 953 [M + H] +,และ 975 [M + นา] +; 1H NMR (CD3OD): d (m), 4.36 4.45(m) 4.82 (m), 5.55, 5.45 (brs) 5.21 (s) 5.52 (s) 4.98 (ม)(s) 5.59 (s), 6.29 (d), (s) 6.58, 6.59 (brs), 6.69 (s) 6.71 (s),7.10 (s), 7.16 (s), 7.22 (s), 7.24 (s), 7.26 (s) และ 7.30 (s);NMR 13C (CD3OD): d 92.6 (C-1), 74.6 (C-5), 63.9 (C-3),118.7, 65.3 (C-6) 68.2 (C-4) 112.1 (C-2, 6) 71.7 (C-2)(C-1), 141.7 (C-4) 147.4 (C-3, 5), 166.5 (C@O) (วงแหวน);118.6, 147.1 (C-6) 125.2 (C-20) 147.1 (C-60) 126.5 (C-2)(C-1), 117.2 (C-10), 144.3 (C-40), 147.1 (C-4) 139.7 (C-5),138.5 (C-50), 109.2 (C-3), 111.4 (C-30) 168.4 (C0@O),170.9 (C@O) (แหวน B และ C); 116.5 138.5 (C-1), (C-5),138.5(C-3), 118.1 (C-2), 146.4 (C-4), 146.2 (C-6) 166.9(C@O) (แหวน D); 53.5 (C-1), 96.7 (C-5), 125.9 (C-3) 149.3(C-2), 196.0 (C-4), 97.4 (C-6) 167.1 (C@O) (แหวน E) T

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เมทานอลในการเตรียมความพร้อมแก้ปัญหาต่างๆที่ความเข้มข้น
80, 40, 20, 10, 8, 5 และ 2 LG / ml แต่ละสารละลายตัวอย่าง
(2 มิลลิลิตร) ผสมกับ 1 มิลลิลิตร 0.2 มิลลิ DPPH ในเมทานอล.
ส่วนผสมที่ถูกเขย่าแรง ๆ และเก็บรักษาไว้
เป็นเวลา 30 นาทีในที่มืด ค่าการดูดกลืนวัดที่ 517 นาโนเมตร.
ค่าการดูดกลืนของการควบคุมที่ได้รับโดยการเปลี่ยน
ตัวอย่างด้วยเมทานอล BHA และวิตามินอีถูกนำมาใช้
เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก กิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระที่คำนวณ
โดยใช้สูตร Scavenging กิจกรรม (%) = [(A517 ของการควบคุม
A517 ของกลุ่มตัวอย่าง) / A517 ของการควบคุม]? 100
2.7.2 ยับยั้งการ microsome lipid peroxidation
lipid peroxidation ของหนู microsome ได้ดำเนินการในขณะที่
รายงานก่อนหน้านี้ (Sabu & Kuttan, 2002) ปฏิกิริยาผสม
(0.5 มล.) ที่มี 0.1 มล. (25% w / v) homogenate ตับหนู
ใน Tris_HCl บัฟเฟอร์ (40 มิลลิเมตรมีค่า pH 7.0) 30 มิลลิเมตรโพแทสเซียมคลอไรด์
(100 LL) 0.16 มิลลิเหล็กเหล็ก (100 LL) 0.06 มิลลิซี
กรด (100 LL) และวิธีการแก้ปัญหาของกลุ่มตัวอย่าง (100 LL) ที่ระดับความเข้มข้นต่างๆ
ถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ไขมันเปอร์ออกไซด์
ที่เกิดขึ้นโดยวัดจากปฏิกิริยา thiobarbituric กรด
สาร (TBARS) ค่า (Ohkawa, Ohishi และยากิ,
1979) หนึ่งมิลลิลิตรหารถูกเพิ่มเข้าไปใน 2 มิลลิลิตร thiobarbituric
น้ำยากรด (15% กรดไตรคลอโร, 0.375% thiobarbituric
กรดและ 0.25 M กรดไฮโดรคลอ) จากนั้น
ความร้อนในห้องอาบน้ำเดือดนาน 15 นาที หลังจากที่เย็นลงไปที่
อุณหภูมิห้องมันก็หมุนเหวี่ยงที่ 1000g เป็นเวลา 10 นาที.
ค่าการดูดกลืนของสารละลายที่ 532 นาโนเมตรได้รับการบันทึก.
ความจุการยับยั้งการเกิด lipid peroxidation ถูกกำหนด
โดยการเปรียบเทียบผลของสารทดสอบกับที่ของ
การควบคุม ร้อยละฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระใช้ต่อไปนี้
สมการยับยั้งการเกิด lipid peroxidation (%) = [(A532 ของการควบคุม
A532 ของกลุ่มตัวอย่าง) / A532 ของการควบคุม]? 100 BHA และวิตามิน
E ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวก.
2.8 การวิเคราะห์สถิติ
ข้อมูลที่ถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD)
ของสามพิจารณา การวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการ
โดยใช้วิธีการอย่างใดอย่างหนึ่งความแปรปรวนทางเดียว ค่า IC50
ถูกคำนวณโดยการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น ผลการค้นหา
จะถูกคำนวณโดยการใช้ซอฟแวร์ทางสถิติ (SPSS
13.0, SPSS Inc. , USA).
3 ผลการค้นหาและการอภิปราย
3.1 เปรียบเทียบเนื้อหาฟีนอลและสารต้านอนุมูลอิสระ
สี่เศษส่วน
สารประกอบฟีนอได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเป็นผู้รับผิดชอบ
ในการต้านอนุมูลอิสระของผลไม้มะขามป้อม (มาร์ Nayaka,
Dharmesh และ Salimath 2006) ฟีนอลรวม
เนื้อหาของเศษส่วนและ DPPH ไล่หัวรุนแรงของพวกเขา
กิจกรรมที่แสดงในตารางที่ 1 ส่วนเอทิลอะซิเตท
พบว่าเนื้อหาฟีนอลสูงสุด (439.9 mg / g) และ
DPPH กิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ (IC50 12.6 LG / ml) ขณะที่
เมื่อเทียบกับคนอื่น ๆ สามเศษส่วนตัวทำละลาย ส่วนนี้
ก็จะถูกฟอกเบื้องต้นใน Sephadex
คอลัมน์ LH-20 ให้แปดเศษส่วนหลักซึ่งได้
ผ่านการทดสอบภายใต้เงื่อนไขการทดลองเดียวกัน ในการเปรียบเทียบ
กับเอทิลอะซิเตทส่วน, IV ส่วนและ VI
มีความเข้มแข็งมากขึ้นในการทดสอบ DPPH นี้ (IC50 6.8 และ
4.2 LG / ml ตามลำดับ) และแสดงให้เห็นระดับที่สูงขึ้นจากทั้งหมด
ฟีนอล (513.5 และ 639.9 มิลลิกรัม / กรัมตามลำดับ) บอก
ว่ามันมีความเข้มข้นสูงกว่าของหลักการที่ใช้งาน
รับผิดชอบในการไล่สังเกตอนุมูลอิสระ
กิจกรรม กิจกรรมของทั้งสองเศษส่วนสูง
กว่าวิตามินอี (IC50 18.3 LG / ml) ใช้เป็นบวก
การควบคุม.
3.2 แยกของฟีนอลจากน้ำนมเศษ
โดยมีวัตถุประสงค์ที่จะอธิบายลักษณะรายละเอียดพฤกษเคมีของ
มะขามป้อมเศษส่วน IV VI และถูกทำให้บริสุทธิ์โดยวิธี HPLC (มะเดื่อ. 1
และ 2) ในการวิเคราะห์นี้การแยกสาร
จากอัตราผลตอบแทน IV ส่วนสารบริสุทธิ์ 1 (เวลาการเก็บรักษา
(TR) = 21.161 นาที, 18.0 มก.) 2 (TR = 22.450 นาที, 15.0 มก.)
และ 3 (TR = 23.850 นาที, 7.5 มก.) (รูปที่ 1). โครมา
แยกออกจากส่วนที่หกอึดสามสารประกอบที่สำคัญ
4 (TR = 12.574 นาที, 13.0 มก.), 5 (TR = 16.402 นาที,
15.0 มก.) และ 6 (TR = 21.015 นาที, 8.5 มก.) (รูป. 2).
ดังนั้น แยกสารประกอบเหล่านี้ถูกนำมาใช้สำหรับการต่อ
บัตรประจำตัว.
3.3 บัตรประจำตัวของสารประกอบ 1-6
Compound 1: สีเขียวผงผลึกสีเหลือง UV
kmax (CH3OH) นาโนเมตร: 218, 274; ESI-MS M / Z 953 [M + H] +,
และ 975 [M + นา] +; 1H NMR (CD3OD): D 4.36 (เมตร) 4.45
(เมตร) 4.82 (เมตร) 4.98 (เมตร) 5.21 (s), 5.45 (BRS), 5.52 (s), 5.55
(s), 5.59 (s ) 6.29 (ง), 6.58 (s), 6.59 (BRS), 6.69 (s), 6.71 (s),
7.10 (s), 7.16 (s), 7.22 (s), 7.24 (s), 7.26 (s ) และ 7.30 (s);
13C NMR (CD3OD): D 92.6 (C-1), 74.6 (C-5) 63.9 (C-3),
71.7 (C-2) 68.2 (C-4) 65.3 (C-6) 112.1 (C-2, 6) 118.7
(C-1) 141.7 (C-4) 147.4 (C-3, 5) 166.5 (C @ O) (แหวน);
126.5 (C-2) 125.2 (C-20) 147.1 (C-6) 147.1 (C-60) 118.6
(C-1) 117.2 (C-10) 144.3 (C-40) 147.1 ( C-4) 139.7 (C-5)
138.5 (C-50) 109.2 (C-3) 111.4 (C-30) 168.4 (C0 @ O)
170.9 (C @ O) (B และ C แหวน); 116.5 (C-1) 138.5 (C-5)
138.5 (C-3) 118.1 (C-2) 146.4 (C-4) 146.2 (C-6) 166.9
(C @ O) (D แหวน); 53.5 (C-1), 96.7 (C-5) 125.9 (C-3) 149.3
(C-2) 196.0 (C-4), 97.4 (C-6) 167.1 (C @ O) (E แหวน). T

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เมทานอลเพื่อเตรียมโซลูชั่นต่างๆ ที่เข้มข้น80 , 40 , 20 , 10 , 8 , 5 และ 2 LG / มล. ในแต่ละตัวอย่าง โซลูชั่น( 2 ซีซี ) ผสมกับ 1 มล. 0.2 มม. dpph เมทานอลส่วนผสมที่ถูกเขย่าอย่างแรง และรักษาสำหรับ30 นาที ในที่มืด นเป็นวัดที่ 517 nm .นควบคุมได้โดยการเปลี่ยนของตัวอย่างกับเมทานอล ใช้ bha และวิตามินอีเป็นตัวควบคุมบวก ไล่หากิจกรรมการใช้สูตรการกิจกรรม ( % ) = [ ( a517 ควบคุมa517 ตัวอย่าง ) / a517 การควบคุม ] 1002.7.2 . ยับยั้งการเกิด lipid peroxidation ของไมโครโซมการเกิด lipid peroxidation ของหนูได้ดำเนินการเป็นไมโครโซมรายงานก่อนหน้านี้ ( ซาบุ & kuttan , 2002 ) ผสมปฏิกิริยา( 0.5 มิลลิลิตร ) ผสม 0.1 ml ( 25 % w / v ) แยกจากตับหนูใน tris_hcl บัฟเฟอร์ ( 40 มม. , pH 7.0 ) , 30 mm .( 100 จะ ) , 0.16 มม. เหล็ก ( 100 จะ ) , แอส 0.06 มม.กรด ( 100 ll ) และโซลูชันตัวอย่าง ( 100 ll ) ที่ความเข้มข้นต่าง ๆถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ลิปิด เปอร์ออกไซด์ก่อตั้งวัดโดยปฏิกิริยาเท่ากับกรดสาร ( ปกติ ) ค่า ( ohkawa ohishi & ยากิ , , ,1979 ) หนึ่งมิลลิลิตรของส่วนลงตัวมีเพิ่ม 2 มิลลิลิตรเท่ากับกรดสารเคมี ( 15 % กรดไตรคลอโรอะซิติกเท่ากับ 0.375 % ,กรดและ 0.25 M กรดไฮโดรคลอริก ) จากนั้นอุ่นต้มในนํ้าเป็นเวลา 15 นาที เมื่อเย็นลงอุณหภูมิของห้อง มันเป็นระดับที่ 1000g เป็นเวลา 10 นาทีนนำของที่ 532 นาโนเมตรจะถูกบันทึกการยับยั้ง lipid peroxidation คือกำหนดความจุของโดยการเปรียบเทียบผลการทดสอบกับสารนั้นควบคุม ส่วนฤทธิ์ต้านการใช้ดังต่อไปนี้สมการการยับยั้ง lipid peroxidation ( % ) = [ ( a532 ควบคุมa532 ตัวอย่าง ) / a532 การควบคุม ] 100 บีเ เอ และวิตามินและถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก2.8 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลข้อมูลที่ถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย ค่าความเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD ) ±3 ใช้ . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์คือแสดงโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว การ ic50 ค่าคำนวณโดยการวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น ผลลัพธ์คำนวณโดยใช้โปรแกรมสำเร็จรูปทางสถิติ SPSS3.2 SPSS Inc . , USA )3 . ผลและการอภิปราย3.1 . การเปรียบเทียบปริมาณสารต้านออกซิเดชันและสี่ เศษส่วนสารประกอบฟีนอลได้ถูกพิสูจน์แล้วว่าเป็นผู้รับผิดชอบสำหรับสารต้านอนุมูลอิสระของ emblica ผลไม้ ( nayaka คูมาร์ ,dharmesh & salimath , 2006 ) รวมฟีโนลิกเนื้อหาทั้งหมดของ dpph เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาและเศษส่วนกิจกรรมที่แสดงในตารางที่ 1 เอทิลอะซิเตต เศษส่วนแสดงเนื้อหาฟีนอลสูงสุด ( มก. / 439.9 กรัม ) และกิจกรรม dpph เป็นตัวเร่งปฏิกิริยา ( ic50 12.6 LG / ml ) เป็นเมื่อเทียบกับอื่น ๆ 3 . เศษส่วน ส่วนนี้ถูกยัดเยียดให้บริสุทธิ์เบื้องต้นบนนี้คอลัมน์ lh-20 ให้แปดส่วนหลัก ซึ่งได้แก่ทดสอบภายใต้เงื่อนไขการทดลองเดียวกัน ในการเปรียบเทียบด้วยเอทิลอะซิเตท เศษส่วน , เศษส่วนและ 6 .ได้แข็งแกร่งมากใน dpph ทดสอบ ( ic50 6.8 และLG / 4.2 มิลลิลิตร ตามลำดับ ) และพบว่าระดับที่สูงขึ้นของทั้งหมดฟีนอล ( 513.5 และ 639.9 มิลลิกรัม / กรัม ตามลำดับ ) แนะนำว่ามันมีความเข้มข้นสูงของหลักการที่ใช้งานรับผิดชอบการตรวจสอบฟรีหัวรุนแรงกิจกรรม กิจกรรมของเหล่านี้สองเศษส่วนสูงขึ้นกว่าที่ของวิตามินอี ( ic50 18.3 LG / ml ) ใช้เป็นบวกควบคุม3.2 . การแยกของโพลีฟีนอลจากเอทิลอะซิเตท เศษส่วนมีวัตถุประสงค์เพื่อวิเคราะห์ข้อมูลทางพฤกษเคมีของemblica เศษส่วนที่ 4 และ 6 ที่ได้ทำให้บริสุทธิ์โดยวิธี HPLC ( Figs 1และ 2 ) ในการวิเคราะห์ และแยกจากส่วนที่ 4 ต่อ 1 ( เวลาเก็บกักสารบริสุทธิ์( TR ) = 21.161 มิน , 18.0 มิลลิกรัม ) , 2 ( TR = 22.450 มิน , 15.0 มิลลิกรัม )และ 3 ( TR = 23.850 มิน , 7.5 mg ) ( รูปที่ 1 ) และการแยกสารประกอบหลักสามส่วนที่ 6 ช่วย4 ( TR = 12.574 มิน 3.2 มิลลิกรัม ) , 5 ( TR = 16.402 มินเป็นมิลลิกรัม ) และ 6 ( TR = 21.015 มิน 8.5 มก. ) ( รูปที่ 2 )ดังนั้นสารประกอบเหล่านี้ได้ถูกใช้เพื่อเพิ่มเติมรหัส3.3 . การจำแนกสารประกอบ 1 – 6สารประกอบ 1 : สีเหลืองสีเขียวผลึกผง ยูวีkmax ( ch3oh ) nm : 218 , 274 ; esi-ms , M / Z 953 [ M + H ] + ,และ 975 [ M + na ] + ; 1H NMR ( cd3od ) : D 4.36 ( M ) 4.45( M ) , 4.82 ( M ) 4.98 ( M ) , 5.21 ( s ) 5.45 ( Brs ) 5.52 ( s ) , ชั้น( s ) , 5.59 ( s ) , 6.29 ( D ) 6.58 ( s ) , และ ( Brs ) 6.69 ( s ) , 6.71 ( s )7.10 ( s ) , 7.16 ( s ) 7.22 ( s ) , 7.24 ( s ) , เซลล์ ( s ) และ 7.30 ( s )13C NMR ( cd3od ) : D 92.6 ( c-1 ) , รายได้ ( C - ) 63.9 ( c-3 )ริ ( C-2 ) 68.2 ( ซี 4 ) การดำเนินงาน ( c-6 ) 112.1 ( C-2 , 6 ) , 118.7( c-1 ) 141.7 ( C-4 ) 147.4 ( c-3 , 5 ) , 166.5 ( C @ O ) ( แหวน )126.5 ( C-2 ) 125.2 ( c-20 ) 147.1 ( c-6 ) 147.1 ( c-60 ) 118.6( c-1 ) 117.2 ( c-10 ) 144.3 ( c-40 ) 147.1 ( C-4 ) 139.7 ( C - )138.5 ( c-50 ) 109.2 ( c-3 ) 111.4 ( c-30 ) 168.4 ( C0 @ O )170.9 ( C ( @ O ) B และ C แหวน ) ; 116.5 ( c-1 ) 138.5 ( C - )138.5 ( c-3 ) 118.1 ( C-2 ) 146.4 ( C-4 ) 146.2 ( c-6 ) 166.9( C ( @ O ) D แหวน 53.5 ( ) ; c-1 ) 20 ( C - ) , 125.9 ( c-3 ) 149.3( C-2 ) 196.0 ( C-4 ) , เมื่อ ( c-6 ) 167.1 ( C @ O ) ( ริง ) ที