RNase activity was measured in a re

RNase activity was measured in a reaction mixture
containing 200µl citrate buffer (100mM, pH 3.5), 200µl yeast
RNA (substrate, 5mg/mlin the same buffer) 200µl of suitably
diluted enzyme solution. After incubation at 30°C for 15min,
the reaction was terminated by 200µl of 25% (v/v) perchloric
acid solution containing 0.75% (w/v) phosophotungstic acid
and 0.6% (w/v) bovine serum albumin. The undigested RNA
was precipitated by centrifugation at (10,000rpm for 10min)
and the acid soluble nucleotides were estimated
spectrophotometrically at 260nm (14). The amount of
acid-soluble ribonucleotides was calculated by assuming a
molar absorption coefficient of 10,600 L.mol-1 cm-1(4)
One unit of enzyme activity is defined as the activity to
release acid soluble oligonucleotides per minute to increase
one unit of A260 value in the reaction mixture.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรม RNase ถูกวัดในส่วนผสมของปฏิกิริยายีสต์ที่ประกอบด้วย 200µl ซิเตรตบัฟเฟอร์ (100 มม. ค่า pH 3.5), 200µlอาร์เอ็นเอ (พื้นผิว 5mg/mlin บัฟเฟอร์เดียว) 200µl ของเหมาะสมผสมเอนไซม์โซลูชัน หลังจากบ่มที่ 30° C สำหรับ 15 นาทีปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิก โดย 200µl perchloric 25% (v/v)โซลูชั่นกรดประกอบด้วยกรด phosophotungstic 0.75% (w/v)และ 0.6% (w/v) วัว serum albumin อาร์เอ็นเอ undigestedมีการตกตะกอน โดย centrifugation (10, 000 รอบต่อนาทีใน 10 นาที)และกรดนิวคลีโอไทด์ที่ละลายน้ำได้ประมาณspectrophotometrically ที่ 260nm (14) จำนวนกรดละลาย ribonucleotides ถูกคำนวณ โดยสมมติว่าเป็นสัมประสิทธิ์การดูดซึมสบของ 10,600 L.mol 1 cm-1(4)หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดให้เป็นกิจกรรมการปล่อย oligonucleotides ละลายกรดต่อนาทีเพิ่มขึ้นA260 ค่าส่วนผสมปฏิกิริยาหนึ่งหน่วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรม RNase วัดในผสมปฏิกิริยา
ที่มีบัฟเฟอร์ citrate 200μl (100 มมค่า pH 3.5) ยีสต์200μl
อาร์เอ็นเอ (สารตั้งต้น 5mg / Mlin บัฟเฟอร์เดียวกัน) 200μlเหมาะสมของ
การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์เจือจาง หลังจากการบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที,
ปฏิกิริยาถูกยกเลิกโดย200μl 25% (v / v) perchloric
สารละลายกรดที่มี 0.75% (w / v) กรด phosophotungstic
และ 0.6% (w / v) ซีรั่มอัลบูมิวัว อาร์เอ็นเอไม่ได้แยกแยะ
ถูกตกตะกอนโดยการหมุนเหวี่ยงที่ (10000 สำหรับ 10 นาที)
และนิวคลีโอที่ละลายกรดประมาณ
spectrophotometrically ที่ 260Nm (14) ปริมาณของ
ribonucleotides กรดที่ละลายน้ำได้ที่คำนวณได้จากสมมติว่า
ค่าสัมประสิทธิ์การดูดซึมของกราม 10,600 L.mol-1 ซม-1 (4)
หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดให้เป็นกิจกรรมที่จะ
ปล่อย oligonucleotides ที่ละลายกรดต่อนาทีเพื่อเพิ่ม
หน่วยหนึ่ง ค่า A260 ในผสมปฏิกิริยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมวัดในปฏิกิริยาเลสผสม
ที่มี 200 µ L ซิเตรตบัฟเฟอร์ ( 100 มม. , pH 3.5 ) , 200 µ RNA ยีสต์
L ( ตั้งต้น 5 mg / mlin บัฟเฟอร์เดียวกัน ) 200 µ L พอเหมาะ
เจือจางสารละลายเอนไซม์ . หลังจากบ่มที่ 30 องศา C เป็นเวลา 15 นาที
ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดย 200 µ L 25% ( v / v ) perchloric
สารละลายกรดที่ 0.75 % ( w / v )
phosophotungstic กรดและ 0.6 % ( w / v ) อัลบูมิน .
rna undigested มาตกตะกอนโดยการเหวี่ยงแยก ( 10000rpm สำหรับวันและปริมาณกรดนิวคลีโอไทด์ )

ที่ 260nm ประมาณนี้ ( 14 ) ปริมาณของกรดไรโบนิวคลีโอไทด์ละลาย
ถูกคำนวณโดยสมมติว่า
สัมประสิทธิ์การดูดกลืนโดย 10600 l.mol-1 cm-1 ( 4 )
1 หน่วยของเอนไซม์ หมายถึง กิจกรรม

ปล่อยกรดละลายโอลิโกนิวคลีโอไทด์ต่อนาทีเพื่อเพิ่มมูลค่า a260
หน่วยหนึ่งในปฏิกิริยาผสม