2.4. NMRTo analyze the non-volatile

2.4. NMR

To analyze the non-volatile fraction of the cold-pressed lemon oil, 400 μl (∼340 mg) of each sample was evaporated under vacuum at 40°C for 6 h (Genevac HT-4X, Ipswich, UK). CPLORs were dissolved in CDCl3 at a constant concentration of 10 mg/ml and transferred to 5 mm NMR tubes. 1H-NMR spectra were recorded on a Bruker® 500 MHz AVANCE I NMR spectrometer at 500.13MHz (Bruker BioSpin AG, Fällanden, Switzerland) equipped with a BBO probe. For each sample, 64 scans with 64 K data points were collected, using a spectral width of 8,000 Hz with a relaxation delay of 20 s, an acquisition time of 4.09 s and a pulse width of 11 μs (90° pulse). All spectra were recorded at a constant temperature of 298 K. Each spectrum was imported into MestReNova software 7.1 (Mestrelab Research, Santiago, Spain) for data pre-processing. CPLOR 1H NMR fingerprints were aligned to the residual signal of CDCl3 at 7.26 ppm. The Whittaker smoother algorithm, in full auto mode, was applied for baseline correction. The region from 7.25 ppm to 7.28 ppm was removed before data reduction, using a bin width of 0.04 ppm. Spectra were then normalized to total area and exported as .txt files to MS Excel® prior to data analysis.

2.5. UHPLC-TOF-MS

An aliquot of each sample prepared for the NMR spectroscopy was dissolved in methanol at 1mg/ml to obtain UHPLC-PDA-TOF-MS profiles. MS data were acquired on a Micromass-LCT Premier Time of Flight (TOF) mass spectrometer (Waters, MA, USA) with an electrospray interface and coupled with an Acquity UPLC system (Waters, MA, USA). ESI conditions were as follows: capillary voltage 2800 V, cone voltage 40 V, MCP detector voltage 2400 V, source temperature 120 °C, desolvation temperature 300 °C, cone gas flow 20 l/h, desolvation gas flow of 800 l/h. Detection was performed in positive ion mode (PI) with a m/z range 100–1000 Da and a scan time of 0.30 s in W-mode. The MS was calibrated, using sodium formate, and leucine enkephalin was used as an internal reference at 2 μg/ml and infused through the Lock Spray™ probe at a flow rate of 10 μl/min by means of a second LC pump (Shimadzu LC-10ADvp, Duisburg, Germany).

The separation was obtained using a short UPLC BEH Phenyl Acquity column (50 × 1.0 mm i.d., 1.7 μm, Waters, MA, USA). The mobile phase consisted of 0.1% formic acid (FA) in water (phase A) and 0.1% FA in methanol (phase B). The linear gradient programme was as follows: 35% to 95% B over 4.0 minutes, held at 95% B for a further 1.1 min, then returned to initial conditions (35% B) in 0.1 min for 1.1 minutes of equilibration before next analysis. The flow rate was 0.4 ml/min; column temperature was kept at 60°C. The UV spectra were recorded from 200 to 450 nm with a resolution of 1.2 nm.

UHPLC-TOF-MS acquisitions were pre-processed, using MarkerLynx 4.1 software (Waters, MA, USA) for mass signal extraction and alignment from 0 to 5 minutes with m/z values from 100 to 1000 Da with the following parameters: noise elimination level was set at 25.00, minimum peak intensity at 400 counts, a mass window of 0.05 and a retention time window of 0.10 minutes; isotopic peaks were excluded and no internal standard was used.

2.6. Data treatment

Pre-treatment of FT-MIR data (Standard Normal Variate, SNV), multivariate analysis by principal component analysis (PCA) and hierarchical clustering analysis (HCA), as well as orthogonal projection to latent structures discriminant analysis (OPLS-DA), were performed with SIMCA-P+ 12© (Umetrics, Sweden). Data were UV- (unit variance) or Pareto-scaled and a seven-fold procedure, using a default option of the software for cross-validation, was applied. PCA models were evaluated according to the percentage of explained initial variance R2X. OPLS models were evaluated by the goodness of fit R2Y and the prediction ability Q2.

The typical structure of treated data obtained by various methods was transformed into a data table in which the values are the features, peak areas or signal intensities at a given min, m/z, cm-1 or ppm. Multivariate data analyses were performed on each dataset to differentiate samples according to their geographic origin and extraction process. A typical data-mining workflow begins with unsupervised analysis to provide a preliminary overview of the dataset. Principal components analysis (PCA) was initially conducted to select the principal components (PCs) that explained at least 95% of the initial data variance (Jackson, 2003). This step mainly consisted of data reduction because the non-selected PCs corresponded to non-informative systematic variability. HCA was then performed using scores of the samples, i.e., their coordinates in the new subspace spanned by the selected PCs, as described by Boccard et al. (2007). HCA was performed, using Euclidean distances and Ward’s aggregation method (Ward, 1963). This step is useful to assess the samples’ distribution and detect potential outliers. In some cases, this facilitates a first understanding of t

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. NMRการวิเคราะห์เศษระเหยไม่ใช่น้ำมันมะนาวเย็นกด μl 400 (∼340 mg) ของแต่ละอย่างได้หายไปภายใต้สุญญากาศที่ 40° C สำหรับ 6 h (Genevac เอชที 4 X อิปสวิช สหราชอาณาจักร) CPLORs ถูกละลายใน CDCl3 ที่ความเข้มข้นคงที่ของ 10 mg/ml และโอนย้ายไปหลอด 5 มม. NMR 1H NMR แรมสเป็คตราถูกบันทึกไว้ในแบบ Bruker ® 500 MHz AVANCE I NMR สเปกโตรมิเตอร์ที่ 500.13MHz (Bruker BioSpin AG, Fällanden สวิตเซอร์แลนด์) พร้อมโพรบ BBO สำหรับตัวอย่างแต่ละ 64 สแกนกับ 64 K ข้อมูลสถานที่เก็บ กว้างสเปกตรัมของ 8000 Hz ด้วยเลื่อนเป็น 20 s เวลาซื้อของ 4.09 s และมีความกว้างพัลส์ของ μs 11 (พัลส์ 90°) บันทึกอุณหภูมิคงที่ของคุณ 298 แรมสเป็คตราทั้งหมด คลื่นแต่ละถูกนำเข้าซอฟต์แวร์ MestReNova 7.1 (Mestrelab วิจัย Santiago สเปน) สำหรับประมวลผลข้อมูลก่อน CPLOR 1H NMR ลายนิ้วมือได้ชิดสัญญาณส่วนที่เหลือของ CDCl3 ที่ 7.26 ppm อัลกอริธึมเรียบ Whittaker ในโหมดอัตโนมัติเต็มรูปแบบ ถูกใช้สำหรับการแก้ไขพื้นฐาน ภูมิภาคจาก 7.25 ppm 7.28 ppm ถูกลบก่อนที่จะลดข้อมูล การใช้ช่องความกว้างของ 0.04 ppm แรมสเป็คตราได้แล้วตามปกติรวมพื้นที่ และส่งออกเป็นไฟล์.txt ให้ MS Excel ®ก่อนวิเคราะห์ข้อมูล2.5. UHPLC-TOF-MSเป็นส่วนลงตัวของแต่ละอย่างที่เตรียมไว้สำหรับก NMR ถูกละลายในเมทานอลที่ 1mg/ml สามารถโพรไฟล์ UHPLC-PDA-TOF-MS ข้อมูล MS ถูกซื้อมาในเวลาพรีเมียร์ Micromass LCT ของเที่ยวบิน (TOF) โดยรวมสเปกโตรมิเตอร์ (น้ำ MA, USA) ด้วยอินเทอร์เฟซวิธีพ่นละอองไฟฟ้า และควบคู่กับระบบ Acquity UPLC (น้ำ MA สหรัฐอเมริกา) ESI เงื่อนไขมีดังนี้: แรงเส้นเลือดฝอย 2800 V กรวยแรง 40 V แรงดันไฟฟ้าตรวจจับ MCP 2400 V แหล่งอุณหภูมิ 120 ° C, desolvation อุณหภูมิ 300 ° C กรวยแก๊สไหล 20 l/h, desolvation แก๊สไหล 800 l/h. ทำการตรวจสอบในโหมดไอออนบวก (PI) กับ m/z ดา 100-1000 และเวลาการสแกนของ 0.30 s ในโหมด W MS ได้รับการปรับ เทียบ โดยใช้รูปแบบเอกสารโซเดียม และ leucine enkephalin ถูกใช้เป็นการอ้างอิงภายในที่ μg 2 ml และผสมผสานผ่านโพรบ™สเปรย์ล็อคที่อัตราการไหลของ μl 10 นาทีโดยใช้เครื่องสูบ LC สอง (Shimadzu LC 10ADvp วิทยาลัยดุยส์บูร์ก เยอรมนี)แยกกล่าวโดยใช้คอลัมน์ UPLC กลาง Phenyl Acquity สั้น ๆ (50 × 1.0 มม.ประชาชน μm 1.7 น้ำ MA สหรัฐอเมริกา) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 0.1% กรด (FA) ในน้ำ (ระยะ A) และ 0.1% FA ในเมทานอล (เฟส B) โปรแกรมเชิงเส้นไล่ระดับมีดังนี้: 35% ไปยัง 95% B กว่า 4.0 นาที 95% B สำหรับการเติม 1.1 นาที กลับมา (35% B) เงื่อนไขในการเริ่มต้นในนาทีที่ 0.1 นาที 1.1 ของ equilibration ก่อนวิเคราะห์ต่อไป อัตราการไหลได้ 0.4 ml/min อุณหภูมิของคอลัมน์ถูกเก็บไว้ที่ 60 องศาเซลเซียส แรมสเป็คตรา UV ถูกบันทึกจาก 200 450 nm ด้วยความละเอียด 1.2 nmซื้อ UHPLC TOF MS ถูกก่อนประมวลผล ใช้ซอฟต์แวร์ MarkerLynx 4.1 (น้ำ MA, USA) การบีบอัดสัญญาณโดยรวมตำแหน่งจาก 0 เป็น 5 นาที มีค่า m/z 100 1000 ดาด้วยพารามิเตอร์ต่อไปนี้: ระดับตัดออกเสียงถูกตั้งค่าที่สูงสุดต่ำสุดความเข้มที่ 25.00 จำนวน 400 หน้าต่างมวล 0.05 และหน้าต่างคงเวลา 0.10 นาที พีคส์ isotopic ถูกแยกออก และใช้มาตรฐานภายในไม่2.6 รักษาข้อมูลก่อนการรักษาข้อมูลฟุตมีร์ (มาตรฐานปกติ Variate, SNV), การวิเคราะห์ตัวแปรพหุ โดยการวิเคราะห์ส่วนประกอบหลัก (PCA) และวิเคราะห์ระบบคลัสเตอร์แบบลำดับชั้น (HCA), ตลอดจนฉาย orthogonal กับการวิเคราะห์ discriminant โครงสร้างแฝงอยู่ (OPLS-ดา), ดำเนินกับ SIMCA-P + 12 © (Umetrics สวีเดน) ข้อมูลมี UV- (หน่วยต่าง) หรือ Pareto ปรับ และใช้ขั้นตอน seven-fold ใช้ตัวเลือกการเริ่มต้นของซอฟต์แวร์สำหรับการข้ามตรวจสอบ การ มีประเมิน PCA รุ่นตามเปอร์เซ็นต์ของอธิบายเริ่มต้นต่าง R2X รุ่น OPLS ถูกประเมิน โดยความกตัญญู R2Y พอดีและความสามารถในการคาดการณ์ไตรมาสที่ 2โครงสร้างทั่วไปของข้อมูลที่บำบัดได้ โดยวิธีการต่าง ๆ ถูกแปลงไปเป็นตารางข้อมูลซึ่งค่าคุณสมบัติ พื้นที่สูง หรือสัญญาณปลดปล่อยก๊าซที่กำหนดนาที m/z, 1 ซม. หรือ ppm มีดำเนินการวิเคราะห์ข้อมูลตัวแปรพหุในแต่ละชุดข้อมูลเพื่อแบ่งแยกตัวอย่างตามกระบวนการกำเนิดและการสกัดทางภูมิศาสตร์ เวิร์กโฟลว์การทำเหมืองข้อมูลโดยทั่วไปเริ่มต้น ด้วยการวิเคราะห์ unsupervised ให้ภาพรวมเบื้องต้นของชุดข้อมูล วิเคราะห์ส่วนประกอบหลัก (PCA) ได้เริ่มดำเนินการเลือกส่วนประกอบหลัก (PCs) ที่อธิบายน้อย 95% ของผลต่างของข้อมูลเริ่มต้น (Jackson, 2003) ขั้นตอนนี้ส่วนใหญ่ประกอบด้วยข้อมูลลดเนื่องจากชิ้นไม่ได้เลือก corresponded กับความแปรผันระบบข้อมูลไม่ HCA แล้วดำเนินการใช้คะแนนตัวอย่าง เช่น ถานใน subspace ใหม่ที่ขยาย โดยชิ้นที่เลือก ตามที่อธิบายไว้โดย Boccard et al. (2007) HCA ที่ดำเนินการ โดยใช้ระยะทาง Euclidean และวิธีรวมของผู้ป่วย (Ward, 1963) ขั้นตอนนี้ใช้เพื่อประเมินการกระจายของตัวอย่าง และตรวจพบเป็น outliers ในบางกรณี นี้อำนวยความสะดวกความเข้าใจแรกของ t

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 NMR เพื่อวิเคราะห์ส่วนที่ไม่ระเหยของน้ำมันมะนาวเย็นกด 400 ไมโครลิตร (~340 มก.) ของกลุ่มตัวอย่างแต่ละคนถูกระเหยภายใต้สุญญากาศที่ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมง (Genevac HT-4X, อิปสวิสหราชอาณาจักร) CPLORs ถูกกลืนหายไปใน CDCl3 ที่มีความเข้มข้นอย่างต่อเนื่องของ 10 mg / ml และโอนไปยัง 5 มมหลอด NMR สเปกตรัม 1H-NMR ถูกบันทึกไว้ในBruker® 500 MHz สเปกโตรมิเตอร์ AVANCE ฉัน NMR ที่ 500.13MHz (Bruker BIOSPIN แบงก์Fällandenวิตเซอร์แลนด์) พร้อมกับการสอบสวน BBO สำหรับแต่ละตัวอย่าง 64 สแกน 64 K จุดเก็บรวบรวมข้อมูลโดยใช้ความกว้างของราง 8,000 เฮิร์ตซ์ที่มีความล่าช้าผ่อนคลาย 20 วินาที, เวลา 4.09 ซื้อกิจการของ s และความกว้างของคลื่น 11 ไมโครวินาที (90 °พัลส์) สเปกตรัมทั้งหมดถูกบันทึกไว้ที่อุณหภูมิคงที่ 298 เคคลื่นความถี่แต่ละคนได้นำเข้ามาในซอฟแวร์ MestReNova 7.1 (Mestrelab วิจัยซันติอาโกสเปน) สำหรับการประมวลผลข้อมูลก่อน ลายนิ้วมือ CPLOR 1H NMR ถูกจัดชิดกับสัญญาณที่เหลือของ CDCl3 ที่ 7.26 ppm Whittaker ขั้นตอนวิธีการที่นุ่มนวลในโหมดอัตโนมัติเต็มรูปแบบถูกนำมาใช้สำหรับการแก้ไขพื้นฐาน ภูมิภาคจาก 7.25 ppm 7.28 ppm ที่จะถูกลบออกก่อนที่จะลดข้อมูลโดยใช้ถังความกว้าง 0.04 ppm Spectra เป็นปกติแล้วพื้นที่ทั้งหมดและส่งออกเป็นไฟล์ .txt ไปยัง MS Excel? ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ข้อมูล. 2.5 UHPLC-TOF-MS aliquot ของแต่ละตัวอย่างที่เตรียมไว้สำหรับสเปคโทร NMR ถูกละลายในเมทานอลที่ 1 มก / มล. ที่จะได้รับโปรไฟล์ UHPLC-PDA-TOF-MS ข้อมูล MS ได้มาใน Micromass-LCT พรีเมียร์เวลาของเที่ยวบิน (TOF) สเปกโตรมิเตอร์มวล (Waters, MA, USA) มีอินเตอร์เฟซ electrospray และคู่กับระบบ UPLC Acquity (Waters, MA, USA) เงื่อนไข ESI มีดังนี้แรงดันของเส้นเลือดฝอย 2800 V แรงดันกรวย 40 V แรงดันไฟฟ้าเครื่องตรวจจับ MCP 2400 V อุณหภูมิแหล่งที่มา 120 องศาเซลเซียสอุณหภูมิ desolvation 300 องศาเซลเซียสการไหลของก๊าซกรวย 20 ลิตร / ชั่วโมงการไหลของก๊าซ desolvation 800 ลิตร / ชั่วโมง . การตรวจสอบได้ดำเนินการในโหมดไอออนบวก (PI) ที่มีน / ชซี 100-1000 ดาและเวลาสแกน 0.30 วินาทีในโหมด-W นางสาวได้รับการสอบเทียบโดยใช้รูปแบบเอกสารโซเดียมและ enkephalin leucine ถูกนำมาใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงภายใน 2 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและ infused ผ่านล็อคสเปรย์สอบสวน™ที่อัตราการไหล 10 ไมโครลิตร / นาทีโดยใช้วิธีการปั๊ม LC วินาที (Shimadzu LC -10ADvp, สบูร์ก, เยอรมนี). แยกได้โดยใช้คอลัมน์สั้น UPLC BEH Phenyl Acquity (50 × 1.0 มมประจำตัวประชาชน 1.7 ไมโครเมตรน้ำ, MA, USA) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 0.1% กรด (เอฟเอ) ในน้ำ (เฟส A) และ 0.1% ในเอฟเอเมทานอล (เฟส B) โปรแกรมที่ลาดเชิงเส้นได้ดังนี้ 35% ถึง 95% B มากกว่า 4.0 นาทีซึ่งจัดขึ้นที่ 95% B อีก 1.1 นาทีแล้วก็กลับไปสภาพครั้งแรก (35% B) ใน 0.1 นาที 1.1 นาทีของการสมดุลก่อนที่จะวิเคราะห์ต่อไป . อัตราการไหล 0.4 มล. / นาที; อุณหภูมิคอลัมน์ถูกเก็บไว้ที่ 60 องศาเซลเซียส สเปกตรัมรังสียูวีที่ถูกบันทึกไว้ 200-450 นาโนเมตรที่มีความละเอียด 1.2 นาโนเมตร. กิจการ UHPLC-TOF-MS เป็นก่อนการประมวลผลโดยใช้ MarkerLynx 4.1 ซอฟแวร์ (Waters, MA, USA) สำหรับการสกัดสัญญาณมวลและการจัดตำแหน่ง 0-5 นาที กับเมตร / ค่าซี 100-1000 ดากับพารามิเตอร์ต่อไปนี้: ระดับการกำจัดเสียงรบกวนตั้งอยู่ที่ 25.00 จุดสูงสุดต่ำสุดที่ 400 นับหน้าต่างมวล 0.05 และหน้าต่างเวลาเก็บ 0.10 นาที; ยอดไอโซโทปได้รับการยกเว้นและไม่มีมาตรฐานภายในถูกใช้. 2.6 การรักษาข้อมูลการรักษา Pre-ข้อมูล FT-MIR (Standard Normal variate, SNV) การวิเคราะห์หลายตัวแปรโดยการวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก (PCA) และการวิเคราะห์การจัดกลุ่มตามลำดับชั้น (HCA) เช่นเดียวกับการฉายฉากกับโครงสร้างแฝงวิเคราะห์จำแนก (OPLS-DA) ได้รับการดำเนินการกับ SIMCA-P + 12 © (Umetrics, สวีเดน) ข้อมูลคือรังสียูวี (แปรปรวนหน่วย) หรือ Pareto ปรับและขั้นตอนที่เจ็ดเท่าโดยใช้ตัวเลือกเริ่มต้นของซอฟแวร์สำหรับการตรวจสอบข้ามถูกนำมาใช้ รุ่น PCA ได้รับการประเมินตามร้อยละของการอธิบายความแปรปรวนเริ่มต้น R2X รุ่น OPLS ได้รับการประเมินจากความดีของ R2Y พอดีและไตรมาสที่ 2 ของความสามารถในการทำนาย. โครงสร้างโดยทั่วไปของข้อมูลที่ได้รับการรักษาที่ได้รับโดยวิธีการต่างๆก็กลายเป็นตารางข้อมูลที่มีค่าที่มีคุณสมบัติที่บริเวณจุดสูงสุดหรือความเข้มของสัญญาณในนาทีที่กำหนด ม. / z, ซม-1 หรือ ppm หลายตัวแปรการวิเคราะห์ข้อมูลที่ได้ดำเนินการในแต่ละชุดที่แตกต่างตัวอย่างตามแหล่งกำเนิดทางภูมิศาสตร์ของพวกเขาและกระบวนการสกัด เวิร์กโฟลว์การทำเหมืองข้อมูลทั่วไปเริ่มต้นด้วยการวิเคราะห์ใกล้ชิดเพื่อให้ภาพรวมเบื้องต้นของชุดข้อมูล การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก (PCA) ได้ดำเนินการในขั้นต้นเพื่อเลือกส่วนประกอบหลัก (พีซี) ที่อธิบายอย่างน้อย 95% ของความแปรปรวนข้อมูลเบื้องต้น (แจ็คสัน, 2003) ขั้นตอนนี้ส่วนใหญ่ประกอบด้วยการลดข้อมูลเพราะเครื่องคอมพิวเตอร์ที่ไม่ถูกเลือกตรงกับความแปรปรวนของระบบที่ไม่ได้ให้ข้อมูล HCA จากนั้นก็ดำเนินการโดยใช้คะแนนของกลุ่มตัวอย่างคือพิกัดของพวกเขาในสเปซใหม่ทอดเครื่องคอมพิวเตอร์ที่เลือกตามที่อธิบาย Boccard et al, (2007) HCA ได้ดำเนินการโดยใช้ระยะทางแบบยุคลิดและวิธีการในการรวมตัวของวอร์ด (วอร์ด 1963) ขั้นตอนนี้จะเป็นประโยชน์ในการประเมินการกระจายตัวอย่างและตรวจสอบค่าผิดปกติที่อาจเกิดขึ้น ในบางกรณีนี้อำนวยความสะดวกความเข้าใจแรกของเสื้อ