hygiene or contaminated utensils. F

hygiene or contaminated utensils. For this reason, many viruses can be
transmitted to the food (D'Souza et al., 2006; Richards, 2001). Several
studies have reported that viruses could remain infective on different
surfaces for different time periods (Abad, Pinto, & Bosch, 1994; Abad
et al., 2001; Bean et al., 1982; Boone & Gerba, 2007; Brady, Evans, &
Cuartas, 1990; Hall, Douglas, & Geiman, 1980; Mbithi, Springthorpe, &
Sattar, 1991). Although several studies on the survival of HAV on
food-contact surfaces have been carried out, there are still need to
investigate the survival time and pattern of HAV as the main cause of
human nonbacterial gastroenteritis depending on the various types of
food contact surfaces, especially focused on cookware utensils. Therefore,
the present study investigated the survivability of HAV when
stored at room temperature for long term period (28 days) on various
food-contact surfaces: stainless steel, plastic, wood, rubber, glass, and
ceramic.
2. Materials and methods
2.1. Virus and cell line
HAV (strain HM-175) and fetal rhesus monkey kidney (FRhK-4)
cells were kindly provided by Professor M. D. Sobsey (University of
North Carolina, Chapel Hill, NC, USA).
2.2. Cell preparation
FRhK-4 cells were grown in Dulbecco's minimum essential medium
(DMEM; SIGMA, Saint Louis, Missouri, USA; cat. # M0268) supplemented
with 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco, Grand Island, New York,
USA; cat. # 26140-097), 44 mM sodium bicarbonate (SIGMA, Saint
Louis, Missouri, USA; cat. # S5761) and 1% antibiotics–antimycotics
(Penicillin Streptomycin; Gibco, Grand Island, New York, USA; cat. #
15140-122), seeded in 75 cm2 culture flasks, and incubated at 37 °C in
a humidified 5% CO2 incubator. Cells were subcultured every two or
three days.
2.3. Virus preparation
When monolayers of FRhK-4 in 150 cm2 culture flasks were 90%
confluent, the growth medium was removed by aspiration. The monolayers
were washed with phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4). A
1 mL aliquot of virus inoculums was added to the flasks, and the flasks
were incubated at 37 °C in a 5% CO2 atmosphere for 90 min to allow
virus adsorption. The flasks then received 25 mL of maintenance medium
(DMEM + 2% FBS + 44 mM sodium bicarbonate + 1% antibiotic–
antimycotic) and were incubated at 37 °C in a 5% CO2 atmosphere for
7 days. If cytopathic effects (CPE) were observed above 90%, the virusinfected
flasks were frozen and thawed three times. Viruses were
released by cell lysis through this step. The contents were centrifuged
at 1500 ×g for 10 min to remove cell debris and the supernatants harvested.
Viruses were stored at 70 °C until use.
2.4. Plaque assay
FRhK-4 cells were seeded in 12-well plates and incubated at 37 °C in
5% CO2 conditions (seeding volume: 2 mL for each well; 4 × 105 cells)
and incubated for 24 h until 90% cell confluency. Virus suspensions
eluted from the samples were serially diluted in maintenance medium
(DMEM + 2% FBS + 44 mM sodium bicarbonate + 1% antibiotic–
antimycotic). Serially diluted virus suspensions (100–200 μL) were inoculated
onto cells. After shaking the plates for 10 min using a shaker
(FMS2, FINEPCR, Korea), they were incubated at 37 °C in 5% CO2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สุขอนามัยหรือเครื่องใช้ที่ปนเปื้อน ด้วยเหตุนี้ ไวรัสจำนวนมากสามารถส่งอาหาร (D'Souza et al. 2006 ริชาร์ด 2001) หลายวิจัยได้รายงานว่า ไวรัสอาจยังคงกำจัดบนแตกต่างกันพื้นระยะเวลาต่าง ๆ (อาบัด Pinto และ Bosch, 1994 อาบัดet al. 2001 ถั่ว et al. 1982 บอนและ Gerba, 2007 เบรดี้ อีแวนส์ &Cuartas, 1990 ฮอลล์ ดักลาส & Geiman, 1980 Mbithi, Springthorpe, &Sattar, 1991) แม้ว่าการศึกษาหลายการอยู่รอดของ HAV ในพื้นผิวสัมผัสอาหารการดำเนิน ยังคงมีความต้องการตรวจสอบเวลาการอยู่รอดและรูปแบบของ HAV เป็นสาเหตุหลักของกระเพาะมนุษย์ nonbacterial ขึ้นอยู่กับประเภทต่าง ๆ ของพื้นผิวสัมผัสอาหาร โดยเฉพาะอย่างยิ่งเน้นอุปกรณ์เครื่องครัว ดังนั้นการศึกษาการตรวจสอบการอยู่รอดของ HAV เมื่อเก็บที่อุณหภูมิห้องระยะเวลาระยะยาว (28 วัน) หลากหลายพื้นผิวสัมผัสอาหาร: สแตนเลสสตีล พลาสติก ไม้ ยาง แก้ว และเซรามิก2. วัสดุและวิธีการ2.1. ไวรัสและเซลล์HAV (สายพันธุ์ HM-175) และไตทารกลิงลิง (FRhK-4)เซลล์ถูกกรุณาจากศาสตราจารย์ M. D. Sobsey (มหาวิทยาลัยนอร์ทแคโรไลนา ชาเปลฮิลล์ NC, USA)2.2. การเตรียมเซลล์FRhK-4 เซลล์ที่ปลูกใน Dulbecco ของขั้นต่ำปานกลางจำเป็น(DMEM ซิกม่า เซนต์หลุยส์ มิซซูรี สหรัฐอเมริกา แมว เสริม# M0268)กับ 10% ทารกวัวซีรั่ม (FBS Gibco แกรนด์ไอส์แลนด์ นิวยอร์กสหรัฐอเมริกา แมว #26140-097), 44 มม.โซเดียมไบคาร์บอเนต (ซิกม่า เซนต์หลุยส์ มิซซูรี สหรัฐอเมริกา แมว # S5761) และยาปฏิชีวนะ 1% – antimycotics(ยาเพนนิซิลลิน Streptomycin Gibco แกรนด์ไอส์แลนด์ นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา แมว #15140-122), ในขวดวัฒนธรรม cm2 75 และรับการกกที่ 37 ° C ในตู้อบ 5% CO2 ณอุณหภูมิ เซลล์ถูก subcultured ทุกสอง หรือสามวัน2.3. ไวรัสเตรียมเมื่อ monolayers FRhK-4 ใน 150 cm2 วัฒนธรรมขวดได้ 90%confluent ปานกลางเจริญเติบโตถูกเอาออก โดยปณิธาน Monolayers การถูกล้าง ด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS, pH 7.4) A1 มิลลิลิตรส่วนลงตัวของไวรัส inoculums ถูกเบ้า และเบ้าได้รับการกกที่ 37 ° C ในบรรยากาศ 5% CO2 สำหรับ 90 นาทีเพื่อให้ดูดซับไวรัส เบ้ารับ 25 มล.ของกลางบำรุงรักษาแล้ว(DMEM + 2% FBS 44 มม.โซเดียมไบคาร์บอเนต + ยาปฏิชีวนะ 1% –antimycotic) และได้รับการกกที่ 37 ° C ในบรรยากาศ 5% CO2 สำหรับ7 วัน ถ้าผล cytopathic (CPE) ถูกตั้งข้อสังเกตข้างต้น 90%, virusinfected การขวดถูกแช่แข็ง และเตรียมสามครั้ง ไวรัสได้ออก โดยเซลล์ lysis ผ่านขั้นตอนนี้ หาได้จากที่ 1500 × g 10 นาทีเอาเศษเซลล์และ supernatants การเก็บเกี่ยวไวรัสถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 70 ° C จนกว่าจะใช้2.4. คราบทดสอบในแผ่น 12-ดี FRhK-4 เซลล์ และรับการกกที่ 37 ° C ในสภาวะ 5% CO2 (เพาะเสียง: 2 มล.สำหรับแต่ละดี 4 × 105 เซลล์)และรับการกก 24 ชั่วโมงจนถึง 90% เซลล์ confluency ไวรัสสารแขวนลอยeluted จากตัวอย่างถูกเจือจางในการบำรุงรักษากลาง serially(DMEM + 2% FBS 44 มม.โซเดียมไบคาร์บอเนต + ยาปฏิชีวนะ 1% –antimycotic) เจือจางสารแขวนลอย (100-200 μL) ถูก inoculated ไวรัส seriallyเข้าสู่เซลล์ หลังจากเขย่าแผ่น 10 นาทีโดยใช้เครื่องปั่น(FMS2, FINEPCR เกาหลี), พวกเขาได้รับการกกที่ 37 ° C ใน 5% CO2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สุขอนามัยที่ปนเปื้อนหรือช้อนส้อม ด้วยเหตุนี้ไวรัสจำนวนมากสามารถ
ส่งไปยังอาหาร (D'Souza et al, 2006;. ริชาร์ด, 2001) หลาย
การศึกษาได้รายงานว่าไวรัสจะยังคงติดเชื้อในที่แตกต่างกัน
พื้นผิวสำหรับช่วงเวลาที่แตกต่างกัน (Abad ม้าลายและ Bosch 1994; Abad
et al, 2001;. Bean et al, 1982;. เน & Gerba 2007; เบรดี้อีแวนส์ และ
Cuartas, 1990; ฮอลล์ดักลาสและ Geiman 1980; Mbithi, Springthorpe และ
Sattar, 1991) ถึงแม้ว่าการศึกษาหลายความอยู่รอดของ HAV บน
พื้นผิวสัมผัสอาหารได้รับการดำเนินการยังคงมีความจำเป็นต้อง
ตรวจสอบเวลาการอยู่รอดและรูปแบบของการ HAV เป็นสาเหตุหลักของ
กระเพาะและลำไส้อักเสบ nonbacterial มนุษย์ขึ้นอยู่กับประเภทต่างๆของ
พื้นผิวที่สัมผัสกับอาหารโดยเฉพาะอย่างยิ่ง มุ่งเน้นไปที่เครื่องใช้เครื่องครัว ดังนั้น
การศึกษาในปัจจุบันการตรวจสอบความอยู่รอดของ HAV เมื่อ
เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นระยะเวลาระยะยาว (28 วัน) ต่าง ๆ
พื้นผิวสัมผัสอาหาร: สแตนเลส, พลาสติก, ไม้ยาง, แก้ว, และ
. เซรามิก
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 ไวรัสและเซลล์
HAV (สายพันธุ์ HM-175) และทารกในครรภ์ไตลิงวอก (FRhK-4)
เซลล์ที่ถูกให้ความกรุณาโดยศาสตราจารย์นพ Sobsey (มหาวิทยาลัย
North Carolina, Chapel Hill, NC, USA).
2.2 การเตรียมเซลล์
FRhK-4 เซลล์ที่ปลูกในสื่อที่สำคัญ Dulbecco ขั้นต่ำ
(DMEM; SIGMA, Saint Louis, Missouri, USA. แมว # M0268) เสริม
ด้วย 10% ของทารกในครรภ์วัวซีรั่ม (FBS; Gibco, แกรนด์ไอส์แลนด์นิวยอร์ก,
สหรัฐอเมริกา; . แมว # 26140-097) 44 มิลลิโซเดียมไบคาร์บอเนต (SIGMA, Saint
Louis, Missouri, USA. แมว # S5761) และ 1% ยาปฏิชีวนะ antimycotics
(Penicillin นี้ streptomycin; Gibco, แกรนด์ไอส์แลนด์นิวยอร์กสหรัฐอเมริกา;. แมว #
15140-122) เมล็ดใน 75 cm2 ขวดวัฒนธรรมและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน
ความชื้นศูนย์บ่มเพาะ CO2 5% เซลล์ที่ถูกเลี้ยงทุกสองหรือ
สามวัน.
2.3 เตรียม Virus
เมื่อ monolayers ของ FRhK-4 ใน 150 cm2 ขวดวัฒนธรรมเป็น 90%
ไหลมารวมกันกลางการเจริญเติบโตจะถูกลบออกจากความทะเยอทะยาน monolayers
ถูกล้างด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอสพีเอช 7.4)
1 aliquot มลหัวเชื้อแบคทีเรียไวรัสถูกบันทึกอยู่ในขวดและขวด
ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในบรรยากาศ CO2 5% เป็นเวลา 90 นาทีเพื่อช่วยให้
การดูดซับไวรัส ขวดแล้วได้รับ 25 มิลลิลิตรของสื่อการบำรุงรักษา
(DMEM + 2% FBS + 44 มิลลิโซเดียมไบคาร์บอเนต + 1% antibiotic-
ฆ่าเชื้อรา) และได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในบรรยากาศ CO2 5% สำหรับ
7 วัน หากผลกระทบ cytopathic (CPE) ถูกตั้งข้อสังเกตข้างต้น 90% ที่ virusinfected
ขวดถูกแช่แข็งและละลายสามครั้ง ไวรัสที่ถูก
ปล่อยออกมาจากการสลายเซลล์ผ่านขั้นตอนนี้ เนื้อหาถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 1,500 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อขจัดเศษของเซลล์และ supernatants เก็บเกี่ยว.
ไวรัสถูกเก็บไว้ที่ 70 องศาเซลเซียสจนการใช้งาน.
2.4 มอบโล่ประกาศเกียรติคุณทดสอบ
FRhK-4 เซลล์เมล็ดในแผ่น 12 ดีและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน
สภาพ CO2 5% (ปริมาณการเพาะ: 2 มิลลิลิตรสำหรับแต่ละดี; 4 × 105 เซลล์)
และบ่ม confluency เซลล์ 24 ชั่วโมงจนกว่าจะถึง 90% แขวนลอยไวรัส
ชะจากตัวอย่างที่ถูกปรับลดลำดับในสื่อการบำรุงรักษา
(DMEM + 2% FBS + 44 มิลลิโซเดียมไบคาร์บอเนต + 1% antibiotic-
ฆ่าเชื้อรา) ปรับลดลำดับแขวนลอยไวรัส (100-200 ไมโครลิตร) ถูกเชื้อ
เข้าสู่เซลล์ หลังจากเขย่าแผ่นเปลือกโลกเป็นเวลา 10 นาทีโดยใช้เครื่องปั่น
(FMS2, FINEPCR เกาหลี) พวกเขาได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสใน 5% CO2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สุขอนามัย หรือภาชนะที่ปนเปื้อน สำหรับเหตุผลนี้ หลายไวรัสสามารถส่งอาหาร ( d"souza et al . , 2006 ; ริชาร์ด , 2001 ) หลาย ๆการศึกษาได้รายงานว่าไวรัสอาจยังคงไม่มีแตกต่างพื้นผิวสำหรับช่วงเวลาที่แตกต่างกัน ( Abad ปิ่นโต & Bosch , 1994 ; บัดet al . , 2001 ; ถั่ว et al . , 1982 ; Boone & gerba , 2007 ; เบรดี้ อีแวนส์ และcuartas 1990 ; Hall , Douglas & geiman , 1980 ; mbithi springthorpe , และ ,sattar , 1991 ) แม้ว่าหลายการศึกษาการอยู่รอดของมีบนพื้นผิวสัมผัสอาหารได้ดำเนินการยังคงมีต้องศึกษารูปแบบของการรอดชีพและเป็นสาเหตุหลักของ .มนุษย์ nonbacterial และขึ้นอยู่กับชนิดต่าง ๆพื้นผิวสัมผัสอาหาร โดยเฉพาะเน้นเครื่องครัวเครื่องใช้ ดังนั้นการศึกษาครั้งนี้เป็นการศึกษาความสามารถของมีเมื่อเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องนานๆ ( 28 วัน ) ต่าง ๆพื้นผิวสัมผัสอาหาร เหล็ก พลาสติก ไม้ แก้ว ยาง และ สแตนเลสเซรามิค2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . ไวรัสและเซลล์เส้น. . ( เมื่อย hm-175 ) และไต ( frhk-4 ) ของลิงวอกเซลล์ก็กรุณาให้อาจารย์ม. . sobsey ( ม.นอร์ทแคโรไลนา ชาเปล ฮิลล์ , NC , USA )2.2 . การเตรียมเซลล์frhk-4 เซลล์เติบโตในดัลเบโค่เป็นขั้นต่ำที่จำเป็น ขนาดกลาง( dmem ; Sigma , เซนต์ หลุยส์ , มิสซูรี , สหรัฐอเมริกา ; แมว # m0268 ) อาหาร10% เซรั่มของทารกในครรภ์ ( FBS ) ; gibco นิวยอร์กเกาะแกรนด์สหรัฐอเมริกา ; แมว # 26140-097 ) , โซเดียมไบคาร์บอเนต 44 มม. ( Sigma , เซนต์หลุยส์ , มิสซูรี , สหรัฐอเมริกา ; แมว # s5761 ) 1% และสารฆ่าเชื้อรา ยาปฏิชีวนะ( ไวจัง ; gibco เกาะแกรนด์ , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา ; แมว #15140-122 ) เมล็ดในขวด 75 cm2 วัฒนธรรมและบ่มที่ 37 ° C ในเป็น humidified 5% CO2 ตู้ฟักไข่ เซลล์มี subcultured ทุกสองหรือ3 วัน2.3 การเตรียมไวรัสเมื่อ monolayers ของ frhk-4 150 cm2 วัฒนธรรมอาหารถูก 90%กระจู๋กระจี๋ ปานกลางการเจริญเติบโตออกด้วยลมหายใจ การ monolayersถูกล้างด้วยน้ำเกลือ ( พีบีเอสฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4 ) เป็น18 ชั่วโมง 1 มิลลิลิตรส่วนลงตัวของไวรัสเพิ่มขวดและขวดอุณหภูมิ 37 ° C ในบรรยากาศคาร์บอนไดออกไซด์ 5% เป็นเวลา 90 นาทีเพื่อให้การกำจัดไวรัส ขวด 25 ml นั้นได้รับการบำรุงรักษาปานกลาง( dmem + 2% FBS + 44 มม. + 1 % ยาปฏิชีวนะและโซเดียมไบคาร์บอเนตantimycotic ) และบ่มที่ 37 ° C ในบรรยากาศ CO2 5 % สำหรับ7 วัน ถ้าผล cytopathic ( CPE ) พบว่าเกิน 90 เปอร์เซ็นต์ virusinfectedขวดถูกแช่แข็งและละลาย 3 ครั้ง ไวรัสคือเผยแพร่โดยการสลายเซลล์ที่ผ่านขั้นตอนนี้ เนื้อหาถูกไฟฟ้าที่ 1500 ×กรัม 10 นาทีเพื่อเอาเศษเซลล์และ supernatants เก็บเกี่ยว .ไวรัสที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 70 องศา C จนใช้2.4 . จุลินทรีย์ การทดสอบfrhk-4 เซลล์ถูก seeded ในดีแผ่นและบ่มที่ 37 ° C ในภาวะคาร์บอนไดออกไซด์ 5% ( ปริมาณ 2 มิลลิลิตร เพาะแต่ละอย่างดี 4 × 105 เซลล์ )บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่จนกว่า confluency เซลล์ 90% สารแขวนลอยไวรัสตัวอย่างจากตัวอย่างที่เป็นเจือจางในการบํารุงรักษากลาง( dmem + 2% FBS + 44 มม. + 1 % ยาปฏิชีวนะและโซเดียมไบคาร์บอเนตantimycotic ) ซึ่งเป็นไวรัสที่แขวนลอย ( 100 – 200 μ L ) ปลูกเชื้อเข้าสู่เซลล์ หลังจากเอาถาดสำหรับ 10 นาทีที่ใช้เขย่า( fms2 finepcr , เกาหลี ) พวกเขาบ่มที่ 37 ° C ในคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์