Nitric oxide determinationRaw264.7

Nitric oxide determination
Raw264.7 cells were plated in 24-well plates (2.5 × 105 cells/mL) and incubated in a 5% CO2 incubator (MCO-15AC, Sanyo, Osaka, Japan) for 20 h. After pre-incubation, LPS (1 μg/mL) and the MMME (0.1, 1, 10, 50, and 100 μg/mL) were added and incubated for 24 h. Then, 100 μL of supernatant was mixed with the same volume of Griess reagent (1% sulfanilamide + 0.1% naphthalenediamine dihydrochloride in 5% phosphoric acid, 1:1) and incubated at room temperature for 10 min. The absorbance was measured at 540 nm using a microplate reader and nitrite concentration was calculated with standard curves of sodium nitrite (NaNO2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดไนตริกออกไซด์เซลล์ Raw264.7 ชุบในดี 24 แผ่น (2.5 × 105 เซลล์/มิลลิลิตร) และได้รับการกกในตู้ 5% CO2 (MCO-15AC ซันโย โอซาก้า ญี่ปุ่น) สำหรับ 20 h หลังจากบ่มก่อน LPS (1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และ MMME (0.1, 1, 10, 50 และ 100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ถูกเพิ่ม และได้รับการกก 24 ชม แล้ว μL 100 ของ supernatant ถูกผสมกับสาร Griess (ซัลฟานิลาไมด์ 1% + dihydrochloride naphthalenediamine 0.1% กรดฟอสฟอริก 5%, 1:1) ระดับเดียวกัน และได้รับการกกที่อุณหภูมิห้อง 10 นาที มีวัด absorbance ที่ 540 nm ใช้อ่านและไนไตรท์ความเข้มข้น microplate คำนวณกับกราฟมาตรฐานของโซเดียมไนไตรท์ (NaNO2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไนตริกออกไซด์มุ่งมั่นเซลล์ Raw264.7 ถูกชุบในแผ่น 24 หลุม (2.5 × 105 เซลล์ / มิลลิลิตร) และบ่มในศูนย์บ่มเพาะ CO2 5% (MCO-15AC ซันโยโอซาก้าประเทศญี่ปุ่น) เป็นเวลา 20 ชั่วโมง
หลังจากที่ก่อนการบ่ม LPS (1 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) และ MMME (0.1, 1, 10, 50, และ 100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) มีการเพิ่มและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้น 100 ไมโครลิตรของสารละลายผสมกับปริมาณเดียวกันของสาร Griess (1% sulfanilamide + 0.1% naphthalenediamine dihydrochloride ในกรดฟอสฟอรัส 5%, 1: 1) และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที การดูดกลืนแสงที่ได้รับการวัดที่ 540 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่าน microplate และความเข้มข้นของไนไตรท์ที่คำนวณได้มาตรฐานที่มีเส้นโค้งของโซเดียมไนไตรท์ (NaNO2)