In the identi¢cation and characteri

In the identi¢cation and characterisation of a celluloseproducing
or non-cellulose-producing (Cel3) strains of
Acetobacter, the colony morphology aside from pellicle
formation is one of the most important criteria. In our
previous paper [8] we have shown that ITDI 2.1, a thick
cellulose-producing strain consistently exhibits a smooth
colony appearance while PA 2.2, a thin cellulose-producing
strain, a rough, soft colony morphology. Strain ITDI
2.1 produces a smooth colony type signi¢cantly di¡erent
from a typical cellulose colony previously described;
whereas PA 2.2 conforms to the typical colony description
of a cellulose producer. A typical colony produced by a
cellulose-producing Acetobacter is described as initially
smooth and spheroid and becoming rough, crinkled and
£attened after 8 days of incubation [35]. On the other
hand, a cellulose-negative mutant or a non-cellulose producer,
produces a colony that is smooth, £at, spreading,
and the size usually two to three times larger than the
cellulose-synthesising strains [36,37]. Colony morphology
of strain ITz3 was exactly the same as strain ITDI 2.1,
both being circular, smooth, convex, tough in consistency
and remaining smooth despite the build up of cellulose
upon prolonged incubation. The only observed di¡erence
was the blue colour reaction of ITz3 when grown in a
medium containing X-gal, which indicated the presence
and functional expression of a L-galactosidase gene under
the control of an Acetobacter promoter.
The generation of a lactose-utilising Acetobacter strain
with exactly the same colony morphology as the wild-type
strain was unexpected. This result may have been due to a
number of possibilities. It may be due to the small size of
the inserted gene (3.19 kb lacZ), or it may also be due to
the favourable speci¢c transposition of the Tn10:lacZ :kan
cassette in the chromosomal target sequence. In both
cases, the cellulose-synthesising genes were not a¡ected/
altered nor the genes for other phenotypes in the Acetobacter
genome. In the wild-type, transposition of transposon
may promote various kinds of rearrangements of the target DNA such as inversion and deletions [22], but these
types of events do not usually occur with the mini-Tn10
that was used in this study.
When plasmid pKV32, which contains all of the lac
operon genes lacZ, lacY and lacA, was used to generate
Acetobacter lactose mutants, blue-coloured colonies on
X-gal plates were also generated. However, the colonies
were similar to the colony morphology of cellulose-negative
mutants. Most of them either did not show any pellicle
formation or simply produced very thin, soft cellulose
pellicles in PYSL2 broth. Moreover, after the second or
third subculturing of a few selected colonies, fewer blue
colonies appeared or sometimes none at all; an indication
that insertion was unstable.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

งสุ่มหลังจาก 8 วัน 1 [ 3 ] บนมืออื่น ๆ
, เซลลูโลสลบกลายพันธุ์หรือไม่เซลลูโลสโปรดิวเซอร์
สร้างอาณานิคมที่เรียบกว่า , กระจาย ,
และขนาดปกติสองถึงสามครั้งใหญ่กว่า
เซลลูโลสสังเคราะห์สายพันธุ์ [ 36,37 ] ลักษณะของโคโลนี
ของ itz3 สายพันธุ์เดียวกับสายพันธุ์ itdi 2.1
ทั้งคู่เป็นวงกลมเรียบ นูน เหนียวในความสอดคล้อง
ใน identi ¢ไอออนบวกและศึกษาของ celluloseproducing
หรือไม่ใช่เซลลูโลสที่ผลิต ( cel3 ) สายพันธุ์ของ
Acetobacter , ลักษณะของโคโลนีนอกเหนือจากการสร้างเยื่อ
เป็นหนึ่งในเกณฑ์ที่สำคัญที่สุด ในหน้ากระดาษของเรา
[ 8 ] เราได้แสดงให้เห็นว่า itdi 2.1 หนา
เซลลูโลสการผลิตความเครียดอย่างต่อเนื่อง แสดงถึงลักษณะโคโลนีเรียบ
ในขณะที่ป่า 2.2 บางผลิต
เซลลูโลสใน identi ¢ไอออนบวกและศึกษาของ celluloseproducing
หรือไม่ใช่เซลลูโลสที่ผลิต ( cel3 ) สายพันธุ์ของ
Acetobacter , ลักษณะของโคโลนีนอกเหนือจากการสร้างเยื่อ
เป็นหนึ่งในเกณฑ์ที่สำคัญที่สุด ในหน้ากระดาษของเรา
[ 8 ] เราได้แสดงให้เห็นว่า itdi 2.1 หนา
เซลลูโลสการผลิตความเครียดอย่างต่อเนื่อง แสดงถึงลักษณะโคโลนีเรียบ
ในขณะที่ป่า 2.2 บางผลิต
เซลลูโลสความเครียด , หยาบ , นุ่มลักษณะของโคโลนี . สายพันธุ์ itdi
2.1 สร้างอาณานิคมแบบเรียบ signi ¢ลดลงอย่างมีนัยสําคัญเมื่อ ดิ ¡ erent
จากปกติเซลลูโลสอาณานิคมอธิบายก่อนหน้านี้ ;
ส่วน PA 2.2 สอดคล้องกับทั่วไปอาณานิคมรายละเอียด
ของเซลลูโลส โปรดิวเซอร์ โดยทั่วไปกลุ่มที่ผลิตโดย
เซลลูโลสการผลิต Acetobacter อธิบายตอนแรก
เนียนรูปกลมรีและกลายเป็นหยาบ , หงิกและ
งสุ่มหลังจาก 8 วัน 1 [ 3 ] บนมืออื่น ๆ
, เซลลูโลสลบกลายพันธุ์หรือไม่เซลลูโลสโปรดิวเซอร์
สร้างอาณานิคมที่เรียบกว่า , กระจาย ,
และขนาดปกติสองถึงสามครั้งใหญ่กว่า
เซลลูโลสสังเคราะห์สายพันธุ์ [ 36,37 ] ลักษณะของโคโลนี
ของ itz3 สายพันธุ์เดียวกับสายพันธุ์ itdi 2.1
ทั้งคู่เป็นวงกลมเรียบ นูน เหนียวในความสอดคล้อง
และที่เหลือเรียบแม้จะสร้างขึ้นจากเซลลูโลส
เมื่อเวลาการบ่ม เพียงสังเกตดิ ¡ erence
เป็นสีฟ้าสีปฏิกิริยาของ itz3 เมื่อปลูกใน
อาหารที่มี x-gal , ซึ่งแสดงสถานะการทำงานของ l-galactosidase
และการแสดงออกของยีนในการควบคุมของ Acetobacter

รุ่นของโปรโมเตอร์ แลคโตสโดย Acetobacter เมื่อย
กับเหมือนกันลักษณะของโคโลนีเป็นยา
สายพันธุ์ที่ไม่คาดคิด ผลที่ได้นี้อาจได้รับเนื่องจากการ
จำนวนของความเป็นไปได้ มันอาจจะเนื่องจากขนาดที่เล็กของ
แทรกยีน ( 3.19 KB lacz ) หรือมันอาจจะเนื่องจาก
ดีกา¢ C การขนย้ายของ tn10 : lacz : คัน
เทปในลำดับเป้าหมายของ . ทั้ง
กรณีเซลลูโลสสังเคราะห์ยีนไม่¡ประมวล /
เปลี่ยนแปลงหรือยีนฟีโนไทป์ใน Acetobacter
จีโนม . ในยา , การขนย้ายของ ? ? ? ? ?
อาจส่งเสริมชนิดของ rearrangements ของดีเอ็นเอเป้าหมาย เช่น การ และลบ [ 22 ] , แต่เหล่านี้
ประเภทเหตุการณ์ไม่ปกติเกิดขึ้นกับ mini-tn10
ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ pkv32
เมื่อพลาสมิด ,นอกจากนี้ หลังที่สองหรือที่สามของการเลือกน้อย

อาณานิคมอาณานิคมน้อยสีฟ้าปรากฏหรือบางครั้งไม่มีเลย ; ข้อบ่งชี้
ที่แทรก ไม่เสถียรซึ่งประกอบด้วยทั้งหมดของครั่ง
โอเปอรอนยีน lacz เลซี่ และ laca ถูกใช้เพื่อสร้าง
Acetobacter แล็กโตสสายพันธุ์อาณานิคมสีฟ้าบนจานสี
x-gal ยังสร้าง อย่างไรก็ตาม อาณานิคม
คล้ายคลึงกับลักษณะของโคโลนีกลายพันธุ์เซลลูโลสลบ

ส่วนใหญ่ของพวกเขาอาจไม่ได้แสดงเยื่อ
การผลิตบางมากเพียง งูสิง
pellicles น้ำ pysl2 .