another 2 ml polypropylene micro-ce

another 2 ml polypropylene micro-centrifuge tube and transferred
to the ﬂuorescence derivatization step as described in Section 2.6.

2.6. Fluorescence derivatization procedures
An accurately measured 1 mL of 50 mg mLÀ1 of SnCl2 solution
in hydrochloric acid–ethanol (1:1; v/v) solution was added to the
supernatant ﬂuid obtained from SALLE extraction step. The mixed
solution was vortexed for 1 min and was left for 10 min at room
temperature. Samples were ﬁltered through a 0.25 μm membrane
ﬁlter (Millipore) then 20 mL was injected directly into the HPLC–FL
system.

2.7. Method validation

The validation was performed according to US-FDA guidance
for industry on bioanalytical method validation [33]. The valida-
tion studies were carried out using pooled plasma sample pre-
analyzed for vitamin K content before spiking of standard vitamin
K homologues. Three days of calibration curves with eight re-
plicates of plasma samples spiked with a mixture of standard vi-
tamin K homologues (MK-4, PK and MK-7) over concentration
range of 0.3-100 ng mLÀ1 and I.S. (5 ng mLÀ1) were performed to
assess linearity of the developed HPLC-FL method. The limit of
quantitation (LOQ) was established as the lowest concentration of
the calibration curve that can be quantiﬁed with acceptable ac-
curacy and precision. Moreover, the analyte response at this con-
centration must be at least 10 times the baseline noise (S/N¼10).
The limit of detection (LOD) was established as the lowest con-
centration of an analyte that can be detected but not necessarily
quantiﬁed and the analyte response at this concentration must be
at least 3 times the baseline noise (S/N¼3).
To evaluate intra-day and inter-day precision and accuracy,
three sets of plasma samples spiked with three different con-
centration levels of vitamin K homologues (MK-4, PK and MK-7);
low (1 ng mLÀ1), middle (10 ng mLÀ1) and high (100 ng mLÀ1)
with 5 ng mLÀ1 I.S. The assay was performed with ﬁve replicates
at three successive days.
The recovery was determined by using pooled plasma samples
spiked with standard mixture of vitamin K homologues (MK-4, PK
and MK-7) in triplicate at the three concentration levels 1, 10 and
100 ng mLÀ1. The obtained results were subtracted from the ex-
isted amount in pooled plasma then compared with true con-
centrations of the standard.
The robustness of an analytical procedure is a measure of its
ability to withstand small, deliberate variations in method vari-
ables. A number of variables such as SnCl2 concentration, reaction
temperature, reaction time, emission wavelength, amounts of
MgCl2 and acetonitrile% were varied within 75%. The quantitative
inﬂuences of the variables were determined as recovery %.

2.8. Sample collections from healthy volunteers

Samples were collected from healthy volunteers at Taibah
University Clinics (36–60 years) for assessment of their circulating
level of vitamin K homologues. Blood samples were collected from
a convenient forearm vein into heparinized tubes. The samples
were centrifuged at 3000g for 10 min at room temperature then
the plasma was separated and stored at –30 °C in dark until ana-
lysis. The present experiments were approved by the Ethics
Committee of Taibah University, and performed in accordance
with the established guidelines.

3. Results and discussion
3.1. Optimization of ﬂuorescence derivatization reaction
In order to determine the studied vitamin K homologues levels
in plasma with high sensitivity, HPLC with ﬂuorescence detection
was proposed. However, vitamin K homologues have no ﬂuores-
cence characteristics. Hence, a pre-column ﬂuorescence reduction
to the ﬂuorescent naphthohydroquinone derivatives was neces-
sary. Several reduction methods were reported for the FL deriva-
tization of vitamin K including; chemical reduction, electro-
chemical or photochemical reduction [35]. In addition, chemical
reduction using zinc reactor, platinum reactor and sodium bor-
ohydride were employed for the FL derivatization of vitamin K
[36]. However, these reduction methods resulted in incomplete
reduction or suffered from irregular reduction results. Therefore, it
is necessary to use more efﬁcient and reliable reduction method.
Stannous chloride was reported as one of the most efﬁcient deri-
vatization methods for quinones [37]. In this work, we study the
effect of different pre-column reduction methods on the ﬂuores-
cence intensity of using ethanolic solution of SnCl2, sodium bor-
ohydride, and Zinc powder/acetic acid. Results were shown in
Fig. 2. It was found that ethanolic solution of SnCl2 gave the
highest ﬂuorescence intensities (peak areas) with good reprodu-
cibility for the studied compounds as compared to other reduction
methods. Therefore, ethanolic solution of SnCl2 was selected for
the ﬂuorescence induction of the analytes in the present study.
SnCl2 is prone to hydrolysis and decomposition to the basic
chloride Sn(OH)Cl plus HCl thus; it has to be prepared in HCl so-
lution [37]. In order to obtain clear and stable solutions without
affecting solubility of vitamins K, it was recommended to prepare
SnCl2 solution in a mixture ethanol and HCl (1;1, v/v).
Also, the effect of different concentrations of ethanolic SnCl2
(1–100 mg mLÀ1) solutions was studied. It was found that the
maximum ﬂuorescence intensity (peak area) was obtained when
using ethanolic SnCl2 solution of more than 50 mg mLÀ1. Hence, a
concentration of 50 mg mLÀ1 of ethanolic SnCl2 solution was used
for the subsequent work. Furthermore, the effects of reaction time
on the ﬂuorescence intensities were investigated. It was found that
10 min was sufﬁcient for complete reduction of vitamin K homo-
logues at room temperature and the ﬂuorescence remained stable
for at least 30 min. In addition, the inﬂuence of the temperature on
the ﬂuorescence intensities in the derivatization method was
studied using different temperatures (25–100 °C). It was found
that the ﬂuorescence intensities decreased when the temperature
was increased. This effect can be explained by a higher internal
conversion with the increase in temperature that facilitated non-

another 2 ml polypropylene micro-centrifuge tube and transferred
to the ﬂuorescence derivatization step as described in Section 2.6.

2.6. Fluorescence derivatization procedures
An accurately measured 1 mL of 50 mg mLÀ1 of SnCl2 solution
in hydrochloric acid–ethanol (1:1; v/v) solution was added to the
supernatant ﬂuid obtained from SALLE extraction step. The mixed
solution was vortexed for 1 min and was left for 10 min at room
temperature. Samples were ﬁltered through a 0.25 μm membrane
ﬁlter (Millipore) then 20 mL was injected directly into the HPLC–FL
system.

2.7. Method validation

The validation was performed according to US-FDA guidance
for industry on bioanalytical method validation [33]. The valida-
tion studies were carried out using pooled plasma sample pre-
analyzed for vitamin K content before spiking of standard vitamin
K homologues. Three days of calibration curves with eight re-
plicates of plasma samples spiked with a mixture of standard vi-
tamin K homologues (MK-4, PK and MK-7) over concentration
range of 0.3-100 ng mLÀ1 and I.S. (5 ng mLÀ1) were performed to
assess linearity of the developed HPLC-FL method. The limit of
quantitation (LOQ) was established as the lowest concentration of
the calibration curve that can be quantiﬁed with acceptable ac-
curacy and precision. Moreover, the analyte response at this con-
centration must be at least 10 times the baseline noise (S/N¼10).
The limit of detection (LOD) was established as the lowest con-
centration of an analyte that can be detected but not necessarily
quantiﬁed and the analyte response at this concentration must be
at least 3 times the baseline noise (S/N¼3).
To evaluate intra-day and inter-day precision and accuracy,
three sets of plasma samples spiked with three different con-
centration levels of vitamin K homologues (MK-4, PK and MK-7);
low (1 ng mLÀ1), middle (10 ng mLÀ1) and high (100 ng mLÀ1)
with 5 ng mLÀ1 I.S. The assay was performed with ﬁve replicates
at three successive days.
The recovery was determined by using pooled plasma samples
spiked with standard mixture of vitamin K homologues (MK-4, PK
and MK-7) in triplicate at the three concentration levels 1, 10 and
100 ng mLÀ1. The obtained results were subtracted from the ex-
isted amount in pooled plasma then compared with true con-
centrations of the standard.
The robustness of an analytical procedure is a measure of its
ability to withstand small, deliberate variations in method vari-
ables. A number of variables such as SnCl2 concentration, reaction
temperature, reaction time, emission wavelength, amounts of
MgCl2 and acetonitrile% were varied within 75%. The quantitative
inﬂuences of the variables were determined as recovery %.

2.8. Sample collections from healthy volunteers

Samples were collected from healthy volunteers at Taibah
University Clinics (36–60 years) for assessment of their circulating
level of vitamin K homologues. Blood samples were collected from
a convenient forearm vein into heparinized tubes. The samples
were centrifuged at 3000g for 10 min at room temperature then
the plasma was separated and stored at –30 °C in dark until ana-
lysis. The present experiments were approved by the Ethics
Committee of Taibah University, and performed in accordance
with the established guidelines.
 
3. Results and discussion
3.1. Optimization of ﬂuorescence derivatization reaction
In order to determine the studied vitamin K homologues levels
in plasma with high sensitivity, HPLC with ﬂuorescence detection
was proposed. However, vitamin K homologues have no ﬂuores-
cence characteristics. Hence, a pre-column ﬂuorescence reduction
to the ﬂuorescent naphthohydroquinone derivatives was neces-
sary. Several reduction methods were reported for the FL deriva-
tization of vitamin K including; chemical reduction, electro-
chemical or photochemical reduction [35]. In addition, chemical
reduction using zinc reactor, platinum reactor and sodium bor-
ohydride were employed for the FL derivatization of vitamin K
[36]. However, these reduction methods resulted in incomplete
reduction or suffered from irregular reduction results. Therefore, it
is necessary to use more efﬁcient and reliable reduction method.
Stannous chloride was reported as one of the most efﬁcient deri-
vatization methods for quinones [37]. In this work, we study the
effect of different pre-column reduction methods on the ﬂuores-
cence intensity of using ethanolic solution of SnCl2, sodium bor-
ohydride, and Zinc powder/acetic acid. Results were shown in
Fig. 2. It was found that ethanolic solution of SnCl2 gave the
highest ﬂuorescence intensities (peak areas) with good reprodu-
cibility for the studied compounds as compared to other reduction
methods. Therefore, ethanolic solution of SnCl2 was selected for
the ﬂuorescence induction of the analytes in the present study.
SnCl2 is prone to hydrolysis and decomposition to the basic
chloride Sn(OH)Cl plus HCl thus; it has to be prepared in HCl so-
lution [37]. In order to obtain clear and stable solutions without
affecting solubility of vitamins K, it was recommended to prepare
SnCl2 solution in a mixture ethanol and HCl (1;1, v/v).
Also, the effect of different concentrations of ethanolic SnCl2
(1–100 mg mLÀ1) solutions was studied. It was found that the
maximum ﬂuorescence intensity (peak area) was obtained when
using ethanolic SnCl2 solution of more than 50 mg mLÀ1. Hence, a
concentration of 50 mg mLÀ1 of ethanolic SnCl2 solution was used
for the subsequent work. Furthermore, the effects of reaction time
on the ﬂuorescence intensities were investigated. It was found that
10 min was sufﬁcient for complete reduction of vitamin K homo-
logues at room temperature and the ﬂuorescence remained stable
for at least 30 min. In addition, the inﬂuence of the temperature on
the ﬂuorescence intensities in the derivatization method was
studied using different temperatures (25–100 °C). It was found
that the ﬂuorescence intensities decreased when the temperature
was increased. This effect can be explained by a higher internal
conversion with the increase in temperature that facilitated non-

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

อีก 2 ml polypropylene ไมโครเครื่องหมุนเหวี่ยงท่อ และโอนย้ายﬂuorescence derivatization ขั้นตอนอธิบายไว้ในส่วน 2.62.6 การ fluorescence derivatization ขั้นตอนML 1 การวัดถูกต้องของ mLÀ1 50 mg ของโซลูชัน SnCl2ในกรดไฮโดรคลอริก – เอทานอล (1:1; v/v) โซลูชั่นเพิ่มเข้าไปﬂuid supernatant ที่ได้จากขั้นตอนการสกัด SALLE การผสมโซลูชันที่ถูก vortexed ใน 1 นาที และที่เหลือสำหรับ 10 นาทีห้องอุณหภูมิ ตัวอย่าง ﬁltered ผ่านเยื่อ 0.25 μmﬁlter (มาก) แล้ว 20 mL ถูกฉีดลง HPLC-FLระบบ2.7. วิธีตรวจสอบดำเนินการตรวจสอบตามคำแนะนำขององค์การอาหารและยาสหรัฐอเมริกาสำหรับอุตสาหกรรมใน bioanalytical วิธีตรวจสอบ [33] Valida-สเตรชันศึกษาได้ดำเนินการโดยใช้ตัวอย่างพลาสมารวมก่อนวิเคราะห์เนื้อหาวิตามิน K ก่อน spiking ของวิตามินมาตรฐานK homologues วันที่สามของเส้นโค้งเทียบกับแปด re-plicates ตัวอย่างพลาสม่า spiked ด้วยมาตรฐาน vi-tamin homologues K (เค-4, PK และเอ็ม 7) มากกว่าความเข้มข้นช่วง 100 0.3 ng mLÀ1 และ I.S. (5 ng mLÀ1) ดำเนินการประเมินแบบดอกไม้วิธี HPLC FL พัฒนา ข้อจำกัดของการวิเคราะห์หาปริมาณ (LOQ) ก่อตั้งขึ้นเป็นความเข้มข้นต่ำสุดของเส้นโค้งการปรับเทียบที่สามารถ quantiﬁed กับยอมรับ ac-curacy และความแม่นยำ นอกจากนี้ การตอบสนองของ analyte ที่คอนนี้ -centration ต้องน้อยกว่า 10 ครั้งพื้นฐานเสียงรบกวน (S/N¼10)ขีดจำกัดของการตรวจสอบ (ลอด) ก่อตั้งขึ้นเป็นสุดคอน-centration ของ analyte ที่สามารถตรวจพบได้ แต่ไม่จำเป็นquantiﬁed และการตอบสนองของ analyte ที่ความเข้มข้นนี้ต้องน้อย 3 ครั้งในหลักเสียงรบกวน (S/N¼3)การประเมินภายในวัน และระหว่างวันความแม่นยำและความถูกต้องชุดสามตัวอย่างพลาสม่า spiked กับ 3 แตกต่างกันคอน-ระดับ centration homologues วิตามิน K (เค-4, PK และเค-7);ต่ำ (1 ng mLÀ1), กลาง (10 ng mLÀ1) และสูง (100 ng mLÀ1)มี 5 ng mLÀ1 I.S. ทำการทดสอบ ด้วยเหมือนกับ ﬁveในสามวันต่อเนื่องการกู้คืนถูกกำหนดโดยตัวอย่างพลาสมารวมspiked กับส่วนผสมมาตรฐานของ homologues วิตามิน K (เค-4, PKและเอ็ม 7) ใน triplicate ที่ความเข้มข้น 3 ระดับ 1, 10 และ100 ng mLÀ1 ผลได้รับถูกหักออกจากอดีต-ยอดเงิน isted ในพลาสมารวมแล้ว เทียบกับทรูคอน-centrations มาตรฐานเสถียรภาพของกระบวนการวิเคราะห์เป็นการวัดความสามารถทนต่อขนาดเล็ก ใช้เวลาในการปรับวิธีการ-ables จำนวนตัวแปรเช่น SnCl2 สมาธิ ปฏิกิริยาอุณหภูมิ เวลาตอบสนอง ความยาวคลื่นเล็ดรอด จำนวนMgCl2 และ acetonitrile %แตกต่างกันภายใน 75% การเชิงปริมาณinﬂuences ของตัวแปรถูกกำหนดเป็น%กู้คืน2.8 คอลเลกชันตัวอย่างจากอาสาสมัครสุขภาพดีตัวอย่างที่เก็บจากอาสาสมัครสุขภาพที่ Taibahมหาวิทยาลัยคลินิก (36 – 60 ปี) สำหรับการประเมินการไหลเวียนระดับของวิตามิน K homologues ตัวอย่างเลือดที่เก็บจากหลอดเลือดดำปลายแขนสะดวกใน heparinized หลอด ตัวอย่างมี centrifuged ที่ 3000g สำหรับ 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องแล้วพลาสมาถูกแยก และเก็บไว้ที่ –30 ° C ในที่มืดจนอานา-lysis ทดลองนำเสนอได้รับการอนุมัติ โดยมารยาทในคณะกรรมการของมหาวิทยาลัย Taibah สามัคคีดำเนินการในกับแนวทางที่กำหนดขึ้น 3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1 การเพิ่มประสิทธิภาพของปฏิกิริยา derivatization ﬂuorescenceเพื่อกำหนดระดับศึกษาวิตามิน K homologuesในพลาสมามีความไวสูง HPLC กับตรวจสอบ ﬂuorescenceมีการนำเสนอ อย่างไรก็ตาม วิตามิน K homologues มี ﬂuores ไม่มี-ลักษณะ cence ดังนั้น ลด ﬂuorescence คอลัมน์ก่อนการอนุพันธ์ naphthohydroquinone ﬂuorescent เป็น neces-รี มีรายงานวิธีลดหลายวิธีสำหรับการ FL derivatization ของวิตามิน K รวมถึง สารเคมีลด electro-สารเคมี หรือ photochemical ลด [35] นอกจากนี้ เคมีลดการใช้เครื่องปฏิกรณ์สังกะสี แพลตตินั่มเครื่องปฏิกรณ์ และบ่อโซเดียม-ohydride ได้รับการว่าจ้างสำหรับ derivatization FL ของวิตามิน K[36] . อย่างไรก็ตาม วิธีการลดส่งผลให้สมบูรณ์ลด หรือรับความเดือดร้อนจากผลลดผิดปกติ ดังนั้น มันจำเป็นต้องใช้ efﬁcient และวิธีการลดความน่าเชื่อถือเพิ่มมากขึ้นรายงาน stannous คลอไรด์เป็นหนึ่งในสุด efﬁcient deri-วิธี vatization สำหรับ quinones [37] ในงานนี้ เราเรียนผลของวิธีการลดคอลัมน์ก่อนอื่น ﬂuores-cence ความเข้มของการใช้โซลูชั่น ethanolic ของ SnCl2 บ่อโซเดียม-ohydride และสังกะสีกรดผง/อะซิติก มีแสดงผลในFig. 2 พบโซลูชันของ SnCl2 ethanolic ให้การสูงสุด ﬂuorescence ปลดปล่อยก๊าซ (พื้นที่สูงสุด) กับดี reprodu-cibility สำหรับสาร studied เมื่อเทียบกับอื่น ๆ ลดลงวิธี ดังนั้น เลือกโซลูชัน ethanolic ของ SnCl2 สำหรับเหนี่ยวนำ ﬂuorescence ของ analytes ในการศึกษาปัจจุบันSnCl2 มีแนวโน้มที่จะไฮโตรไลซ์และแยกส่วนประกอบกับพื้นฐานคลอไรด์ Sn (OH) Cl บวก HCl ดัง มีการเตรียมใน HCl เพื่อ-lution [37] เพื่อแก้ไขปัญหาที่ชัดเจน และมั่นคงโดยได้รับมีผลต่อการละลายของวิตามิน K มันถูกแนะนำให้เตรียมโซลูชั่น SnCl2 ผสมเอทานอลและ HCl (1; 1, v/v)ยัง ผลของความเข้มข้นแตกต่างกันของ ethanolic SnCl2โซลูชั่น (1-100 มิลลิกรัม mLÀ1) ได้ศึกษา พบว่าการความเข้ม ﬂuorescence สูงสุด (peak area) ได้รับเมื่อใช้โซลูชัน SnCl2 ethanolic กว่า mLÀ1 50 mg ดังนั้น การใช้ความเข้มข้นของ mLÀ1 50 mg ethanolic SnCl2 โซลูชันสำหรับการทำงานต่อไป นอกจากนี้ ผลกระทบของเวลาตอบสนองใน ﬂuorescence การ ปลดปล่อยก๊าซถูกสอบสวน จะพบว่า10 นาทีถูก sufﬁcient สำหรับสมบูรณ์ลดโฮโมวิตามิน K-โลกูส์ที่อุณหภูมิห้องและ ﬂuorescence ที่ยังคงมีเสถียรภาพสำหรับอย่างน้อย 30 นาที นอกจากนี้ inﬂuence อุณหภูมิในปลดปล่อยก๊าซ ﬂuorescence วิธี derivatization ได้ศึกษาโดยใช้อุณหภูมิที่แตกต่างกัน (25 – 100 ° C) พบที่ปลดปล่อยก๊าซ ﬂuorescence ลดลงเมื่ออุณหภูมิเพิ่มขึ้น ผลนี้สามารถจะอธิบาย โดยความสูงภายในแปลง ด้วยการเพิ่มขึ้นของอุณหภูมิที่อำนวยความสะดวกไม่

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

อีก 2 มล. โพรพิลีนหลอดไมโคร centrifuge
และโอนไปยังชั้นuorescence อนุพันธ์ขั้นตอนที่ระบุไว้ในมาตรา 2.6. 2.6 ขั้นตอนการอนุพันธ์เรืองแสงวัดอย่างถูกต้อง 1 มิลลิลิตร 50 มิลลิกรัมmLÀ1ของการแก้ปัญหา SnCl2 ในกรดไฮโดรคลอริกเอทานอล (1: 1; v / v) การแก้ปัญหาถูกเพิ่มลงในสารละลายชั้นUID ที่ได้จากขั้นตอนการสกัด SALLE ผสมการแก้ปัญหาได้รับการ vortex เวลา 1 นาทีและถูกทิ้งไว้เป็นเวลา 10 นาทีในห้องอุณหภูมิ ตัวอย่างสาย ltered ผ่าน 0.25 ไมโครเมตรเยื่อกรองไฟ(ค) แล้ว 20 มลถูกฉีดโดยตรงลงในฟลอริด้า HPLC-ระบบ. 2.7 การตรวจสอบวิธีการตรวจสอบได้ดำเนินการตามคำแนะนำของ US-FDA สำหรับอุตสาหกรรมในการตรวจสอบวิธีการ Bioanalytical [33] valida- การศึกษาการได้รับการดำเนินการโดยใช้ตัวอย่างพลาสม่าสำรองล่วงหน้าวิเคราะห์หาปริมาณวิตามิน K ก่อน spiking มาตรฐานของวิตามิน K homologues วันที่สามของเส้นโค้งการสอบเทียบกับแปดอีกplicates ของตัวอย่างพลาสมาถูกแทงที่มีส่วนผสมของ vi- มาตรฐานTamin K homologues (MK-4, PK และ MK-7) ความเข้มข้นมากกว่าช่วง0.3-100 นาโนmLÀ1และ IS (5 งะmLÀ1 ) ได้รับการดำเนินการเพื่อประเมินความเป็นเชิงเส้นของการพัฒนาวิธีHPLC-ฟลอริด้า ขีด จำกัด ของปริมาณ(LOQ) ก่อตั้งขึ้นในขณะที่ความเข้มข้นต่ำสุดของเส้นโค้งการสอบเทียบที่สามารถเอ็ดสายquanti กับทํายอมรับcuracy และความแม่นยำ นอกจากนี้การตอบสนองวิเคราะห์ที่ทํานี้centration ต้องมีอย่างน้อย 10 ครั้งเสียงพื้นฐาน (S / N¼10). ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) ก่อตั้งขึ้นในขณะที่ทําต่ำสุดcentration ของวิเคราะห์ที่สามารถตรวจพบได้ แต่ไม่จำเป็นต้องquanti เอ็ด fi และการตอบสนองวิเคราะห์ที่มีความเข้มข้นนี้จะต้องเป็นอย่างน้อย3 ครั้งเสียงพื้นฐาน (S / N¼3). เพื่อประเมินภายในวันและความแม่นยำระหว่างวันและความถูกต้องสามชุดตัวอย่างพลาสมาถูกแทงสามที่แตกต่างกันอย่างต่อระดับcentration ของ วิตามินเค homologues (MK-4, PK และ MK-7) ต่ำ (1 นาโนกรัมmLÀ1) กลาง (10 นาโนกรัมmLÀ1) และสูง (100 นาโนกรัมmLÀ1) 5 งะmLÀ1 IS ทดสอบที่ได้รับการดำเนินการกับสายได้ลอกเลียนแบบที่สามต่อเนื่องวัน. การฟื้นตัวถูกกำหนดโดยใช้ pooled ตัวอย่างพลาสมาถูกแทงที่มีส่วนผสมของมาตรฐานhomologues วิตามินเค (MK-4, PK และ MK-7) ในเพิ่มขึ้นสามเท่าที่สามระดับความเข้มข้น 1, 10 และ100 นาโนกรัมmLÀ1 ผลที่ได้ถูกหักออกจากอดีตจำนวน isted ในพลาสมารวบรวมแล้วเมื่อเทียบกับดจริง centrations มาตรฐาน. ความทนทานของขั้นตอนการวิเคราะห์ที่เป็นตัวชี้วัดของความสามารถในการทนต่อขนาดเล็กรูปแบบวิธีการในการพิจารณาตัวแปรAbles จำนวนของตัวแปรเช่นความเข้มข้น SnCl2 ปฏิกิริยาอุณหภูมิเวลาความยาวคลื่นปล่อยก๊าซเรือนกระจกปริมาณของMgCl2 และ acetonitrile% มีความแตกต่างกันภายใน 75% ปริมาณใน uences ชั้นของตัวแปรที่ถูกกำหนดเป็น% recovery. 2.8 คอลเลกชันตัวอย่างจากอาสาสมัครสุขภาพดีโดยเก็บตัวอย่างจากอาสาสมัครสุขภาพดีที่ Taibah คลินิกมหาวิทยาลัย (36-60 ปี) สำหรับการประเมินของการไหลเวียนของพวกเขาระดับของวิตามินเคhomologues เก็บตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดดำที่แขนสะดวกเข้าไปในท่อ heparinized กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 3000G เป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องแล้วพลาสมาถูกแยกออกและเก็บไว้ที่-30 องศาเซลเซียสในที่มืดจนแบบตั้งสลาย การทดลองในปัจจุบันได้รับการอนุมัติโดยจริยธรรมคณะกรรมการ Taibah มหาวิทยาลัยและดำเนินการตามที่มีแนวทางที่กำหนด. 3 และการอภิปรายผล3.1 การเพิ่มประสิทธิภาพของชั้น uorescence ปฏิกิริยาอนุพันธ์เพื่อที่จะตรวจสอบhomologues ศึกษาระดับวิตามินเคในพลาสม่าที่มีความไวสูงHPLC มีการตรวจสอบชั้น uorescence เสนอ อย่างไรก็ตาม homologues วิตามินเคมีชั้น uores- ไม่มีลักษณะcence ดังนั้นการลดชั้นคอลัมน์ก่อน uorescence สัญญาซื้อขายล่วงหน้า uorescent naphthohydroquinone ชั้นเป็น neces- สาหัส วิธีการลดหลายคนรายงานสำหรับฟลอริด้า deriva- tization ของวิตามินเครวมทั้ง; ลดสารเคมีทางไฟฟ้ารายเคมีหรือลดแสง [35] นอกจากนี้สารเคมีลดการใช้เครื่องปฏิกรณ์สังกะสีปฏิกรณ์แพลทินัมและโซเดียม bor- ohydride ถูกว่าจ้างสำหรับฟลอริด้าอนุพันธ์ของวิตามิน K [36] อย่างไรก็ตามวิธีการเหล่านี้ลดลงส่งผลให้ไม่สมบูรณ์ลดลงหรือได้รับความเดือดร้อนจากผลการลดลงผิดปกติ ดังนั้นจึงมีความจำเป็นต้องใช้ไฟเพียงพอ EF มากขึ้นและวิธีการลดความน่าเชื่อถือ. คลอไรด์ Stannous ถูกรายงานว่าเป็นหนึ่งในสาย EF มากที่สุดเพียงพอ deri- วิธี vatization สำหรับ Quinones [37] ในงานนี้เราศึกษาผลของวิธีการลดก่อนคอลัมน์แตกต่างกันในชั้น uores- cence ความเข้มของการใช้วิธีของเอทานอล SnCl2 โซเดียม bor- ohydride และผงสังกะสี / กรดอะซิติก ผลลัพธ์ที่ได้แสดงในรูปที่ 2. ผลการศึกษาพบว่าการแก้ปัญหาเอทานอลของ SnCl2 ให้ชั้นสูงสุดเข้มuorescence (พื้นที่ peak) มี reprodu- ดีcibility สำหรับสารประกอบศึกษาเมื่อเทียบกับการลดลงอื่น ๆวิธี ดังนั้นวิธีการแก้ปัญหาเอทานอลของ SnCl2 ได้รับเลือกให้. เหนี่ยวนำ uorescence ชั้นของการวิเคราะห์ในการศึกษาปัจจุบันSnCl2 มีแนวโน้มที่จะย่อยสลายและการสลายตัวไปที่พื้นฐานคลอไรด์Sn (OH) Cl บวก HCl จึง; มันจะต้องมีการจัดทำขึ้นทีเรา HCl lution [37] เพื่อให้ได้การแก้ปัญหาที่ชัดเจนและมีเสถียรภาพโดยไม่ต้องมีผลกระทบต่อการละลายของวิตามิน K มันก็แนะนำให้เตรียมความพร้อมแก้ปัญหาSnCl2 เอทานอลเป็นส่วนผสมและ HCl. (1; 1, v / v) นอกจากนี้ผลของความเข้มข้นแตกต่างกันของเอทานอล SnCl2 (1 -100 มิลลิกรัมmLÀ1) โซลูชั่นศึกษา ผลการศึกษาพบว่าชั้นเข้ม uorescence สูงสุด (พื้นที่ peak) ที่ได้รับเมื่อใช้วิธีSnCl2 เอทานอลกว่า 50 มก. mLÀ1 ดังนั้นความเข้มข้น 50 มิลลิกรัมmLÀ1ของการแก้ปัญหาเอทานอล SnCl2 ถูกนำมาใช้สำหรับการทำงานที่ตามมา นอกจากนี้ผลกระทบจากการเกิดปฏิกิริยาเวลาที่ความเข้ม uorescence ชั้นถูกตรวจสอบ การศึกษาพบว่า10 นาทีก็เพียงพอไฟพอเพียงสำหรับการลดสมบูรณ์ของวิตามินเค homo- Logues ที่อุณหภูมิห้องและ uorescence ชั้นยังคงมีเสถียรภาพเป็นเวลาอย่างน้อย30 นาที นอกจากนี้อิทธิพลของอุณหภูมิที่ความเข้ม uorescence ชั้นในวิธีการอนุพันธ์ได้รับการศึกษาโดยใช้อุณหภูมิที่แตกต่างกัน(25-100 ° C) ผลการศึกษาพบว่าชั้น uorescence ความเข้มลดลงเมื่ออุณหภูมิเพิ่มขึ้น ผลกระทบนี้สามารถอธิบายได้โดยภายในสูงกว่าแปลงที่มีการเพิ่มขึ้นของอุณหภูมิที่ไม่อำนวยความสะดวก

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

อีก 2 ml หลอด centrifuge โพลีไมโครและโอน
ไปﬂ uorescence กับขั้นตอนที่อธิบายไว้ในมาตราที่ 2.6 .

2.6 ขั้นตอนกับการ
เป็นวัดได้อย่างถูกต้อง 1 มิลลิลิตร 50 มิลลิกรัม ml À 1 sncl2 โซลูชั่น
ในสารละลายกรด–เอทานอล ( 1 : 1 ; v / v ) ในสารละลายเพิ่ม
ﬂอิ๊ดที่ได้จากขั้นตอนการสกัดนำเสนอ . ผสม
สารละลายที่ vortexed นาน 1 นาที และทิ้งไว้ 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง

จำนวน ltered ถ่ายทอดผ่านเยื่อμ 0.25 M
จึง lter ( มิลลิ ) 20 ml ฉีดโดยตรงลงในระบบ HPLC – FL

2.7 . วิธีการตรวจสอบ

ตรวจสอบได้ปฏิบัติตามคำแนะนำ
สำหรับอุตสาหกรรมใน bioanalytical สหรัฐ - FDA วิธีการไตเตรท [ 33 ] การ valida -
tion ศึกษาโดยใช้ Pooled Plasma ตัวอย่าง Pre -
วิเคราะห์วิตามิน K ก่อนขึ้นเนื้อหาของมาตรฐานวิตามิน
K ใน . สามวันของเส้นโค้งสอบเทียบกับแปด Re -
plicates พลาสมาตัวอย่างถูกแทงด้วยส่วนผสมของมาตรฐานที่ 6 K -
ทมิฬใน ( และ mk-4 , PK mk-7 ) มากกว่าช่วง 0.3-100 ng มล. ความเข้มข้น
บัณฑิต สาขาวิชาÀ 1 และ 5 ของมลได้

À 1 )ประเมินกระแสของการพัฒนา hplc-fl วิธี ขีด จำกัด ของ
เซลล์ ( loq ) ก่อตั้งขึ้นเมื่อค่าความเข้มข้นของ
รูปโค้งที่สามารถการไฟฟ้าจึงยอมรับเอ็ดกับ AC -
ตำแหน่งผู้ดูแลพิพิธภัณฑ์และมีความแม่นยำ นอกจากนี้ ครูการตอบสนองที่ con -
centration ต้องมีอย่างน้อย 10 ครั้ง ก่อนเสียง ( S / N ¼ 10 ) .
ขีด จำกัด ของการตรวจหา ( LOD ) ก่อตั้งเป็นคอนสุด
centration ของครูที่สามารถตรวจพบได้ แต่ไม่จำเป็นต้อง
การไฟฟ้าจึงเอ็ดและครูการตอบสนองที่ความเข้มข้นนี้ต้อง
อย่างน้อย 3 ครั้ง ( เสียง ( S / N ¼ 3 ) เพื่อประเมินภายใน และระหว่างวัน

วันและความถูกต้องแม่นยำ , สามชุดของตัวอย่างพลาสมาที่แตกต่างกันสามคอน - C
centration ระดับของวิตามิน K ใน ( mk-4 , pk และ mk-7 ) ;
ต่ำ ( 1 นาโนกรัมÀ 1 มิลลิลิตร )กลาง ( 10 กรัมมิลลิลิตรÀ 1 ) และสูง ( 100 มล. À 1 ng ng )
5 ml À 1 i.s. ( แสดงด้วยจึงได้ซ้ำ

ที่ 3 วันต่อเนื่อง กู้ถูกกำหนดโดยใช้ pooled ตัวอย่างพลาสมา
ถูกแทง ด้วยส่วนผสมของวิตามิน K ในมาตรฐาน ( mk-4 , pk
และ mk-7 ) ทั้งสามใบที่ 3 ระดับความเข้มข้น 1 , 10
100 ng ml À 1 ได้หักออกจากอดีต -
isted จำนวนรวมพลาสมาแล้วเทียบกับทรูคอน -

centrations ของมาตรฐาน ความทนทานของขั้นตอนการวิเคราะห์เป็นวัดของความสามารถในการทนต่อการเปลี่ยนแปลง
เล็กสุขุมในวิธีวารี -
Ables . หมายเลขของตัวแปร เช่น sncl2 ปฏิกิริยา
ความเข้มข้น อุณหภูมิ เวลา ปฏิกิริยาการปล่อยคลื่น ปริมาณและร้อยละ
ชุดไนหลากหลายภายใน 75 %

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.