Spore strains and spore preparation

Spore strains and spore preparation
Using a method described elsewhere for (Paidhungat et al., 2002)
B. amyloliquefaciens (Technische Mikrobilogie Weihenstephan, 2.479,
Fad 82), sporulation was induced at 37 °C on solid 2× SG medium
agar plates without antibiotics.
The spore suspension was cleaned by repeated centrifugation (3-fold
at 5000g), washed with cold distilled water (4 °C), and was treated
occasionally with sonication for 1 min.
The cleaned spore suspensions contained ≥95% phase bright spores
and nearly no spore agglomerates, as was verified by a particle analysis
system (FPIA 3000, Malvern Instruments, Worcestershire, U.K.).
R. Sevenich et al. / Innovative Food Science and Emerging Technologies 20 (2013) 42–50 43
The spore suspensions were stored in the dark at 4 °C. The spores of
G. stearothermophilus (Sterikon with bioindicator) were purchased from
Merck (Darmstadt, Deutschland) with a certified D121.1 °C = 1.5–2 min
and also stored at 4 °C in the dark.
2.2. Sample preparation
Untreated unretorted fish cans (tuna in brine, tuna in sunflower
oil and sardines in olive oil) were obtained through Nouvelle Vague
(Boulogne-sur-Mer, France). The tuna in sunflower oil and the sardines
in olive oil in the cans had been precooked and only the tuna in brine
was raw. Before the HP treatment the fish samples were minced in a
blender and pressed through a sieve afterwards to gain a homogenous
matrix.
As a model system ACES-buffer (N-(2-Acetamido)-2-aminoethanesulfonic
acid) (Merck KGaA, Darmstadt, Germany, 0.05 mol,
pH 7) a relatively pH stable HP buffer was used.
The pressurization media (fish matrices and buffer) were inoculated
with spores of B. amyloliquefaciens or G. stearothermophilus to a spore
count of 105 to 107 per g and mixed with a Stomacher (Seward Medical,
London, UK).
For the analyses of furan and MCPD/MCPD-esters, portions of the
mixed un-inoculated matrix (1.5 g) were placed in a container (Nunc
Cryo Tubes Nr. 375299, Nunc A/S, Roskilde, DK) and put on ice. All the
trials were conducted in duplicates.
2.3. HPTS-treatment
The high pressure unit U 111 (Unipress, Warsaw, PL), a lab scale system,
was used to conduct the inactivation and formation of FPCs studies.
With this unit pressures up to 700 MPa and temperatures up to 130 °C
can be reached. The high pressure transmitting medium is silicone oil.
The unit consists of five chambers, with a volume of 4 ml, immersed
in an oil bath which can be separately used for the high pressure trials.
Pressure build-up rate was 25 MPa/s. The temperatures selected for the
treatment were 90, 105, 110, 115 and 121 °C at 600 MPa. The oil bath
was set on the selected process temperature and the start temperatures
for each food system were obtained in pretrials (Table 1).
To monitor the temperature during the treatment a control sample
filled with the same fish as used for microbial analysis was put in one
of the chambers and equipped with thermocouple (Unipress, Warsaw,
PL) and the temperature was measured in the geometrical center of
the sample (Fig. 1).
In the fish industry the F0-value for conventional retorting of fish
cans is 7 min, this represents the treatment conditions of 28 min at
115 °C. Therefore the formation of FPCs was monitored under HPTS
conditions, equal to F0 = 7 min, which were 115 °C, 28 min and
121 °C, 7 min at 600 MPa. For the temperatures 90 to 110 °C the holding
times applied were not equal to F0 = 7 min. Five to seven kinetic
points were obtained during these holding times.
Since the inactivation of spores under thermal and high pressure
conditions differs in mechanism and speed, the holding times for the
HPTS were between 1 s and 30 min depending on the temperature.
Five to seven kinetic points were obtained during these holding times.
After the treatment the samples were put on ice and the samples for
the FPCs analysis were later on frozen at −80 °C.
2.4. Analysis of FPCs
Furan: The analysis of furan was conducted by automated headspace
gas chromatography–mass spectrometry (HS-GC–MS). Since furan is
very volatile (BPt 31 °C) the use of a headspace sampling is the obvious
method for furan. The samples were incubated at low temperature
(40 °C) to equilibrate furan into the headspace, which was sampled by
an injection loop. Furan was quantified by comparison of the peak
area of the furan response with that of deuterium labeled furan added
at low level to the sample. The method used is described in detail elsewhere
(Crews & Castle, 2007).
MCPD/MCPD-esters: The method to analyze free MCPD was described
elsewhere (Hamlet et al., 2002; Zelinková et al., 2008). For
the MCPD-esters determination two approaches are possible. One
involves the conversion of the MCPD-esters to free MCPD by either
a base-catalyzed transmethylation (bct), where a loss of MCPD
can occur, or an acid-catalyzed transmethylation (act), where the
formation of additional MCPD is possible; the other approach is the
direct analysis as esters by LC–MS (liquid chromatography–mass
spectrometry) or DART-MS (direct analysis in real time-mass
spectrometry) described elsewhere (Cajka, Hajslova, & Mastovska,
2008; Hajslova, Cajka, & Vaclavik, 2011; Moravcova et al., 2012),
which was used in this case.
2.5. Analysis of the spore inactivation and regression analyses
After the pressure treatment the portions (1.5 g) were mixed with
6 ml of Ringer-solutions and homogenized with glass beads. Afterwards
a serial dilution with Ringer-solution down to 10−6 was performed and
survivors after pressurization were measured by plate count using nutrient
agar. Colonies of B. amyloliquefaciens were incubated at 37 °C
and the G. stearothermophilus at 55 °C. Both were counted after 2 days.
In numerous papers describing the influence of high pressure on the
inactivation of spores it is mentioned that the inactivation of spores is
better described with an nth-order (Eq. (1)) than with a linear approach,
since for longer holding times a tailing can occur, but no shouldering
was observed (Ananta, Heinz, & Schlüter, 2001; Margosch et al.,
2006; Mathys, 2008; Reineke, 2012b).
for n ¼ 1 log10
N
N0

¼ log10 e
−kt   ð1Þ
for n N 1 log10
N
N0

¼ log10 ð1 þ k Nn−1
0 t ð Þ n−1
  1
1−n

ð2Þ
Table 1
Temperature set up for the HPTS trials at 600 MPa.
Treatment
T [°C]
Oil
bath T [°C]
ACES T
start
[°C]
Tuna in brine
T start [°C]
Tuna
sunflower
oil T start [°C]
Sardines in olive
oil T start [°C]
90 95 50 50 45 45
105 110 65 65 60 60
110 115 70 70 75 75
115 120 75 75 80 80
121 125 80 80 85 85 Fig. 1. Pressure temperature profile (121 °C, 600 MPa; PATS) measured inside the vessels
of the U 111.
44 R. Sevenich et al. / Innovative Food Science and Emerging Technologies 20 (2013) 42–50
Two parameters can be derived from the model approach, which is
unique for every inactivation kinetic and a means by which they can
be compared: reaction order and the rate constant. The constant k, the
inactivation rate constant, represents the spore-inactivating effect of
each pT-combination. N is the shape factor, if n = 1 it is a first order reaction
else if n N 1 is nth-order, the shape is up concave and represents
the tailing.
For this study the data obtained from plate count was log10 N
N0
  and
plotted over the time. Isokinetic lines for the temperature–time diagrams,
to obtain a 3, 5 and extrapolated 12 log10 inactivation, were derived from
kinetic analysis of the experimental inactivation data. To obtain the reaction
order all temperature–pressure kinetics were fit over a range of reaction
orders (n = 1.0–1.7) (TableCurve2D SPSS Inc., Chicago, IL, USA). The
minimal sum of the standard error identified the optimal reaction order.
All inactivation-kinetics were refitted with the optimal n to obtain k. To
get a functional dependency of k(T), k and T were fitted with all equation
set of TableCurve2D (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). The equation with the
minimal sum of square errors for k(T) was then used in (1) for k. The
isorate lines were calculated with MathCAD 2001i professional (Mathsoft
Engineering & Education, Inc., USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สายพันธุ์สปอร์และสปอร์เตรียมใช้วิธีการอธิบายอื่น ๆ สำหรับ (Paidhungat et al., 2002)เกิด amyloliquefaciens (Technische Mikrobilogie Weihenstephan, 2.479แฟชั่น 82), sporulation ถูกทำให้เกิดที่ 37 ° C บนสื่อกลางซื้อ SG 2 ทึบแผ่น agar โดยยาปฏิชีวนะการระงับสปอร์ถูกกำจัด โดย centrifugation ซ้ำ (3-foldที่ 5000 g), ล้าง ด้วยน้ำกลั่นเย็น (4 ° C), และได้รับการรักษาบางครั้งกับ sonication ใน 1 นาทีบริการทำความสะอาดสปอร์อยู่ ≥95% ระยะสว่างเพาะเฟิร์นและเกือบไม่มีสปอร์ agglomerates ถูกตรวจสอบ โดยการวิเคราะห์อนุภาคระบบ (FPIA 3000 เครื่องมือมัลเวิร์น วูสเตอร์เชอร์ สหราชอาณาจักร)R. Sevenich et al. / นวัตกรรมวิทยาศาสตร์การอาหารและเทคโนโลยี 20 (2013) 43 42 – 50บริการสปอร์ถูกเก็บไว้ในมืดที่ 4 องศาเซลเซียส เพาะเฟิร์นของกรัม stearothermophilus (Sterikon กับ bioindicator) ซื้อจากเมอร์ค (ดาร์มส ผู้) กับการ° D121.1 รับรอง C = 1.5-2 นาทีและยังเก็บที่ 4 ° C ในมืด2.2. ตัวอย่างไม่ถูกรักษา unretorted ปลากระป๋อง (ปลาทูน่าบรรจุกระป๋อง ปลาทูน่าในทานตะวันปลาซาร์ดีนในน้ำมันมะกอกและน้ำมัน) ที่ได้รับผ่านแรมนูเวล Vague(Boulogne-sur-Mer ฝรั่งเศส) ปลาทูน่าในน้ำมันดอกทานตะวันและปลาในน้ำมันมะกอกในกระป๋องมีการ precooked และปลาทูน่าบรรจุกระป๋องมีวัตถุดิบ ก่อนการรักษา HP ตัวอย่างปลาที่สับในการเบลนเดอร์ และกดผ่านตะแกรงภายหลังได้รับการให้เมตริกซ์การเป็นแบบจำลองระบบแต้มบัฟเฟอร์ (N-(2-Acetamido)-2-aminoethanesulfonicกรด) (ผล ดาร์มส เยอรมนี 0.05 โมลpH 7) ค่อนข้างใช้บัฟเฟอร์ pH ที่ HP มีเสถียรภาพสื่อ pressurization (ปลาเมทริกซ์และบัฟเฟอร์) ได้ inoculatedมีเพาะเฟิร์นเกิด amyloliquefaciens หรือ stearothermophilus กรัมจะเป็นสปอร์นับจำนวน 105 ถึง 107 ต่อกรัม และผสมกับเป็นแผงประดับหน้าอกให้ (เวิร์ดแพทย์ลอนดอน สหราชอาณาจักร)สำหรับวิเคราะห์ furan และ MCPD/MCPD-esters ส่วนของการไว้ในภาชนะ (Nunc ผสมไม่ inoculated เมตริกซ์ (1.5 กรัม)หลอด Cryo Nr. 375299, a/s Nunc, Roskilde, DK) และใส่ในน้ำแข็ง ทั้งหมดนี้มีดำเนินการทดลองในสำเนา2.3 การรักษา HPTSความดันสูงหน่วย 111 ยู (Unipress วอร์ซอ PL), ระบบเครื่องชั่งห้องปฏิบัติการถูกใช้เพื่อดำเนินการยกเลิกการเรียกและการก่อตัวของการศึกษา FPCsแรงถึง 700 กับหน่วยนี้ดัน และอุณหภูมิสูงถึง 130 ° Cสามารถเข้าถึง สื่อส่งแรงดันสูงเป็นน้ำมันซิลิโคนหน่วยประกอบด้วยห้าแชมเบอร์ส 4 ml ไปด้วยในอ่างน้ำมันซึ่งสามารถแยกใช้สำหรับทดลองแรงดันสูงอัตราการเกิดแรงดันมีแรง s 25 อุณหภูมิสำหรับการรักษาได้ 90, 105, 110, 115 และ 121 ° C ที่แรง 600 น้ำน้ำมันถูกตั้งค่าในกระบวนการเลือกอุณหภูมิและอุณหภูมิเริ่มต้นสำหรับแต่ละระบบได้รับใน pretrials (ตารางที่ 1)การตรวจสอบอุณหภูมิในระหว่างการรักษาตัวอย่างควบคุมเต็มไป ด้วยปลาเดียวกันใช้สำหรับย้ายวิเคราะห์จุลินทรีย์ในของหอกับ thermocouple (Unipress วอร์ซอPL) และมีวัดอุณหภูมิใน geometricalตัวอย่าง (Fig. 1)ในอุตสาหกรรมปลาค่า F0 ใน retorting ทั่วไปของปลากระป๋องเป็นต่ำสุด 7 นี้หมายถึงเงื่อนไขการรักษานาที 28 ที่115 องศาเซลเซียส จึง มีการตรวจสอบการก่อตัวของ FPCs ภายใต้ HPTSเงื่อนไข เท่ากับ F0 = 7 นาที ซึ่ง 115 ° C นาที 28 และ121 ° C, 7 นาทีที่แรง 600 สำหรับอุณหภูมิ 90-110 ° C การจัดใช้เวลาไม่เท่ากับ F0 = 7 นาทีห้ากับเจ็ดเดิม ๆคะแนนที่ได้ในช่วงเวลาเหล่านี้ถือตั้งแต่การยกเลิกการเรียกเพาะเฟิร์นภายใต้ความดันสูง และความร้อนเงื่อนไขที่แตกต่างในกลไกและความเร็ว เวลาถือสำหรับการHPTS ระหว่าง s 1 และ 30 นาทีขึ้นอยู่กับอุณหภูมิได้ห้า-เจ็ดจุดเดิม ๆ ได้รับในช่วงเวลาเหล่านี้ถือหลังจากการรักษา ใส่ตัวอย่างน้ำแข็งและตัวอย่างสำหรับวิเคราะห์ FPCs ถูกแช่แข็งในภายหลังที่ −80 องศาเซลเซียส2.4 การวิเคราะห์ของ FPCsFuran: วิเคราะห์ furan ถูกดำเนินการ โดยอัตโนมัติ headspacechromatography ก๊าซ – มวล spectrometry (HS-GC – MS) เนื่องจาก furanตลอดเวลา (BPt 31 ° C) การใช้สุ่ม headspace เป็นชัดเจนวิธี furan ตัวอย่างที่ incubated ที่อุณหภูมิต่ำ(40 ° C) การ equilibrate furan เป็น headspace ซึ่งมีความโดยวนการฉีด Furan ถูก quantified โดยเปรียบเทียบการพื้นที่ของการตอบสนอง furan กับดิวเทอเรียมป้าย furan เพิ่มในระดับต่ำอย่างนี้ วิธีใช้จะอธิบายในรายละเอียดอื่น ๆ(หน้าที่และปราสาท 2007)MCPD/MCPD-esters: วิธีการที่จะวิเคราะห์ฟรี MCPD ได้อธิบายไว้อื่น ๆ (แฮมเลตและ al., 2002 Zelinková et al., 2008) สำหรับกำหนด MCPD esters สองวิธีเป็นไปได้ หนึ่งเกี่ยวข้องกับการแปลง esters MCPD ฟรี MCPD โดยอย่างใดอย่างหนึ่งtransmethylation ฐานกระบวน (bct), ซึ่งสูญเสีย MCPDสามารถเกิดขึ้นได้ transmethylation กรดกระบวนการ (การกระทำ), หรือที่ก่อตัวของ MCPD เพิ่มเติมเป็นไปได้ เป็นวิธีการวิเคราะห์โดยตรงเป็น esters โดย LC – MS (เหลว chromatography – มวลspectrometry) หรือโผ-MS (ตรงวิเคราะห์ในเวลาจริงโดยรวมspectrometry) อธิบายอื่น ๆ (Cajka, Hajslova, & Mastovska2008 Hajslova, Cajka, & Vaclavik, 2011 Moravcova et al., 2012),ซึ่งถูกใช้ในกรณีนี้2.5 การวิเคราะห์สปอร์ยกเลิกการเรียกและถดถอยวิเคราะห์หลังจากการรักษาความดัน บางส่วน (1.5 g) ถูกผสมกับml 6 โซลูชั่น Ringer และ homogenized เป็นกลุ่มกับลูกปัดแก้ว หลังจากนั้นทำการเจือจางประจำ ด้วยโซลูชั่น Ringer ลง 10−6 และผู้รอดชีวิตหลังจาก pressurization ได้วัดตามจำนวนแผ่นที่ใช้ธาตุอาหารagar อาณานิคมของ B. amyloliquefaciens ได้ incubated ที่ 37 ° Cและ stearothermophilus กรัมที่ 55 องศาเซลเซียส ทั้งนับได้หลังจาก 2 วันในเอกสารมากมายที่อธิบายอิทธิพลของความดันสูงในการยกเลิกการเรียกเพาะเฟิร์นกล่าวถึงการยกเลิกการเรียกเพาะเฟิร์นว่าอธิบายดี ด้วยการสั่ง (Eq. (1)) มากกว่าวิธีเชิงเส้นตั้งแต่การถือยาวเวลา tailing ที่สามารถเกิดขึ้นได้ แต่ไม่ shoulderingถูกสังเกต (อนันต Heinz, & Schlüter, 2001 Margosch et al.,ปี 2006 Mathys, 2008 Reineke, 2012b)สำหรับ log10 n ¼ 1NN0อี¼ log10−kt ð1Þสำหรับ log10 N 1 nNN0¼ log10 ð1 þ k Nn−10 t ðÞ n−1  11−nð2Þตารางที่ 1อุณหภูมิที่ตั้งค่าไว้สำหรับทดลอง HPTS ที่แรง 600รักษาT [° C]น้ำมันห้อง T [° C]แต้มทีเริ่มต้น[° C]ปลาทูน่าในน้ำเกลือเริ่มต้น T [° C]ปลาทูน่าซันฟลาวเวอร์น้ำมันเริ่ม T [° C]ทูน่ามะกอกน้ำมันเริ่ม T [° C]90 95 50 50 45 45105 110 65 65 60 60110 115 70 70 75 75115 120 75 75 80 80121 125 80 80 85 85 fig. 1 ความดันอุณหภูมิโพรไฟล์ (121 ° C, 600 แรง วัด PATS) ภายในเรือของ U 11144 R. Sevenich et al. / นวัตกรรมวิทยาศาสตร์การอาหารและเทคโนโลยี 20 (2013) 42-50พารามิเตอร์ที่สองสามารถได้มาจากการจำลองวิธีการ ซึ่งเป็นเฉพาะทุกยกเลิกการเรียกเดิม ๆ และวิธีที่พวกเขาสามารถเปรียบเทียบ: สั่งปฏิกิริยาและค่าคงอัตราการ K คง การยกเลิกการเรียกอัตราค่าคงที่ แสดงผลยกสปอร์ของแต่ละ pT-ชุด N คือ สัดส่วนของรูปร่าง ถ้า n = 1 เป็นปฏิกิริยาเป็นลำดับแรกอื่นถ้าสั่งที่ n n N 1 รูปร่างเป็นค่าอาหารคอนเคฟ และแสดงถึงtailingสำหรับการศึกษานี้ได้รับข้อมูลจากจาน นับเป็น log10 NN0และลงจุดช่วงเวลา บรรทัด Isokinetic สำหรับไดอะแกรมอุณหภูมิเวลารับเป็น 3, 5 และ extrapolated log10 12 ยกเลิกการเรียก ที่มาการวิเคราะห์ข้อมูลการยกเลิกการทดลองเรียกเดิม ๆ รับปฏิกิริยาสั่งจลนพลศาสตร์อุณหภูมิความดันทั้งหมดได้พอดีกับช่วงของปฏิกิริยาใบสั่ง (n = 1.0-1.7) (TableCurve2D โปรแกรม Inc. ชิคาโก IL สหรัฐอเมริกา) ที่ผลรวมที่น้อยที่สุดของข้อผิดพลาดมาตรฐานระบุสั่งปฏิกิริยาที่เหมาะสมยกเลิกการเรียกจลนพลศาสตร์ทั้งหมดถูก refitted กับ n ดีที่สุดเพื่อคุณจะได้รับได้รับการอ้างอิงการทำงานของ k(T), k และ T ได้อาบทุกสมการชุดของ TableCurve2D (โปรแกรม Inc. ชิคาโก IL สหรัฐอเมริกา) สมการซึ่งมีการจำนวน k(T) ตารางข้อผิดพลาดน้อยที่สุดแล้วใช้ใน (1) สำหรับคุณคำนวณบรรทัด isorate ได้ ด้วย MathCAD 2001i มืออาชีพ (Mathsoftวิศวกรรมและศึกษา Inc., USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สายพันธุ์สปอร์และการจัดทำสปอร์โดยใช้วิธีการอธิบายที่อื่น ๆ สำหรับ (Paidhungat et al., 2002) บี amyloliquefaciens (Technische Mikrobilogie Weihenstephan, 2.479, แฟชั่น 82) สร้างสปอร์ได้รับการเหนี่ยวนำที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในของแข็ง 2 ×กลาง SG แผ่นวุ้นโดยไม่ต้องใช้ยาปฏิชีวนะ. สปอร์แขวนลอยที่ได้รับการทำความสะอาดโดยการหมุนเหวี่ยงซ้ำ (3 เท่าที่5000g) ล้างด้วยกลั่นเย็น น้ำ (4 ° C) และได้รับการรักษาเป็นครั้งคราวด้วยsonication เวลา 1 นาที. แขวนลอยสปอร์ที่มีการทำความสะอาดขั้นตอน≥95% สปอร์ที่สดใสและเกือบไม่มีagglomerates สปอร์ในขณะที่ได้รับการตรวจสอบโดยการวิเคราะห์อนุภาคระบบ (FPIA 3000, เครื่องมือเวิร์นวูสเตอร์ สหราชอาณาจักร). อาร์ Sevenich et al, / วิทยาศาสตร์การอาหารนวัตกรรมและเทคโนโลยีใหม่ 20 (2013) 42-50 43 แขวนลอยสปอร์ที่ถูกเก็บไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส สปอร์ของจี stearothermophilus (Sterikon กับดัชนีทางชีวภาพ) ที่ซื้อมาจากเมอร์ค(ดาร์มสตัด, Deutschland) โดยได้รับการรับรอง D121.1 ° C = 1.5-2 นาทีและเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสในที่มืด. 2.2 เตรียมตัวรับการรักษาปลากระป๋อง unretorted (ปลาทูน่าในน้ำเกลือ, ปลาทูน่าในน้ำมันดอกทานตะวันน้ำมันและปลาซาร์ดีนในน้ำมันมะกอก) ที่ได้รับผ่าน Nouvelle Vague (Boulogne-sur-Mer, ฝรั่งเศส) ปลาทูน่าในน้ำมันดอกทานตะวันและปลาซาร์ดีนในน้ำมันมะกอกในกระป๋องที่ได้รับการ precooked และมีเพียงปลาทูน่าในน้ำเกลือเป็นวัตถุดิบ ก่อนที่จะมีการรักษา HP ตัวอย่างปลาที่ถูกสับในเครื่องปั่นและกดผ่านตะแกรงหลังจากนั้นก็จะได้รับความเป็นเนื้อเดียวกันเมทริกซ์. ในฐานะที่เป็นระบบแบบ ACES บัฟเฟอร์ (N- (2-Acetamido) -2-aminoethanesulfonic กรด) (Merck KGaA, Darmstadt เยอรมนี 0.05 โมล, พีเอช 7) ที่ค่อนข้างมีเสถียรภาพค่า pH บัฟเฟอร์ HP ถูกนำมาใช้. สื่อดัน (เมทริกซ์ปลาและบัฟเฟอร์) เป็นเชื้อที่มีสปอร์ของB. amyloliquefaciens หรือจี stearothermophilus ไปสปอร์นับ105-107 กรัมต่อและ ผสมกับ Stomacher (เอิร์ดแพทย์ลอนดอนสหราชอาณาจักร). สำหรับการวิเคราะห์ furan และ MCPD / MCPD-เอสเทอบางส่วนของเมทริกซ์ยกเลิกเชื้อผสม(1.5 กรัม) ถูกวางไว้ในภาชนะ (Nunc Cryo ท่อ Nr. 375299, ในขณะนี้ A / S, กิลด์, DK) และวางบนน้ำแข็ง ทุกการทดลองได้ดำเนินการในที่ซ้ำกัน. 2.3 HPTS รักษาหน่วยความดันสูงU 111 (Unipress วอร์ซอ PL) ระบบระดับห้องปฏิบัติการที่ถูกใช้ในการดำเนินการใช้งานและการก่อตัวของการศึกษาFPCs. กับแรงกดดันหน่วยได้ถึง 700 MPa และอุณหภูมิสูงถึง 130 องศาเซลเซียสสามารถเข้าถึงได้ ความดันสูงการส่งกลางเป็นน้ำมันซิลิโคน. หน่วยประกอบด้วยห้าห้องมีปริมาณ 4 มิลลิลิตรแช่ในอ่างน้ำมันที่สามารถใช้แยกต่างหากสำหรับการทดลองแรงดันสูง. ความดันอัตราการสร้างขึ้นเป็น 25 เมกะปาสคาล / วินาที อุณหภูมิเลือกสำหรับการรักษาจำนวน 90, 105, 110, 115 และ 121 ° C ที่ 600 MPa อาบน้ำน้ำมันตั้งอยู่บนอุณหภูมิกระบวนการที่เลือกและอุณหภูมิเริ่มต้นสำหรับระบบอาหารแต่ละที่ได้รับในpretrials (ตารางที่ 1). ในการตรวจสอบอุณหภูมิในระหว่างการรักษาตัวอย่างควบคุมที่เต็มไปด้วยปลาเช่นเดียวกับที่ใช้ในการวิเคราะห์จุลินทรีย์ถูกขังอยู่ในหนึ่งของห้องและติดตั้งเทอร์โม (Unipress วอร์ซอ PL) และอุณหภูมิวัดในศูนย์เรขาคณิตของกลุ่มตัวอย่าง(รูปที่ 1).. ในอุตสาหกรรมปลา F0-ค่าสำหรับโต้แย้งธรรมดาของปลากระป๋องคือ7 นาที นี้แสดงให้เห็นถึงสภาพการรักษา 28 นาทีที่115 องศาเซลเซียส ดังนั้นการก่อตัวของ FPCs ถูกตรวจสอบภายใต้ HPTS เงื่อนไขเท่ากับ F0 = 7 นาทีซึ่งเป็น 115 องศาเซลเซียส 28 นาทีและ121 ° C, 7 นาทีที่ 600 MPa สำหรับอุณหภูมิ 90-110 องศาเซลเซียสถือหุ้นครั้งที่นำมาใช้ไม่ได้เท่ากับF0 = 7 นาที ห้าถึงเจ็ดเคลื่อนไหวคะแนนที่ได้รับในช่วงเวลาที่ถือเหล่านี้. ตั้งแต่การใช้งานของสปอร์ภายใต้ความกดดันและความร้อนสูงเงื่อนไขแตกต่างกันในกลไกและความเร็วเวลาการถือครองสำหรับHPTS ได้ระหว่างวันที่ 1 และ 30 นาทีขึ้นอยู่กับอุณหภูมิ. ห้าถึงเจ็ด จุดที่เกี่ยวกับการเคลื่อนไหวที่ได้รับในช่วงเวลาที่ถือเหล่านี้. หลังจากการรักษาตัวอย่างถูกวางบนน้ำแข็งและตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ FPCs ภายหลังถูกแช่แข็งที่ -80 องศาเซลเซียส. 2.4 การวิเคราะห์ FPCs Furan การวิเคราะห์ของ furan ได้ดำเนินการโดยอัตโนมัติ headspace ก๊าซโค-มวลสาร (HS-GC-MS) ตั้งแต่ furan เป็นผันผวนเป็นอย่างมาก(BPT 31 ° C) การใช้การสุ่มตัวอย่าง headspace คือที่เห็นได้ชัดวิธีการfuran กลุ่มตัวอย่างที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิต่ำ(40 ° C) ที่จะเข้าสู่สมดุล furan headspace ซึ่งเป็นตัวอย่างโดยวงฉีด Furan ถูกวัดโดยเปรียบเทียบของยอดพื้นที่ของการตอบสนองfuran กับที่ของไฮโดรเจนที่มีข้อความ furan เพิ่มในระดับต่ำถึงตัวอย่าง วิธีการที่ใช้อธิบายไว้ในรายละเอียดอื่น ๆ(ทีมงานและปราสาท 2007). MCPD / MCPD เอสเทอ: วิธีการในการวิเคราะห์ฟรี MCPD ได้อธิบายไว้ที่อื่นๆ (.. หมู่บ้าน et al, 2002; Zelinková et al, 2008) สำหรับการกำหนด MCPD เอสเทอสองแนวทางที่เป็นไปได้ หนึ่งที่เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงของ MCPD เอสเทอที่จะเป็นอิสระ MCPD โดยทั้งฐานเร่งtransmethylation (BCT) ซึ่งการสูญเสียของ MCPD สามารถเกิดขึ้นได้หรือ transmethylation กรดเร่งปฏิกิริยา (การกระทำ) ที่ก่อตัวของMCPD เพิ่มเติมเป็นไปได้; วิธีการอื่น ๆ ที่เป็นการวิเคราะห์โดยตรงเป็นเอสเทอโดยLC-MS (โคมวลของเหลวspectrometry) หรือ DART-MS (การวิเคราะห์โดยตรงในเวลามวลจริงspectrometry) อธิบายอื่น ๆ (Cajka, Hajslova และ Mastovska, 2008; Hajslova, Cajka, และ Vaclavik 2011; Moravcova et al, 2012). ซึ่งถูกนำมาใช้ในกรณีนี้. 2.5 การวิเคราะห์การใช้งานสปอร์และการวิเคราะห์การถดถอยหลังจากที่การรักษาความดันส่วน (1.5 กรัม) ได้รับการผสมกับ 6 มล Ringer โซลูชั่นและปั่นด้วยลูกปัดแก้ว หลังจากนั้นเจือจางอนุกรมกับการแก้ปัญหา Ringer ลงไป 10-6 และได้ดำเนินการรอดชีวิตหลังดันถูกวัดโดยจำนวนจุลินทรีย์โดยใช้สารอาหารวุ้น อาณานิคมของ amyloliquefaciens บีได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและstearothermophilus กรัมที่ 55 ° C ทั้งสองถูกนับหลังจาก 2 วัน. ในเอกสารจำนวนมากที่อธิบายถึงอิทธิพลของความดันสูงในการใช้งานของสปอร์มันบอกว่าการใช้งานของสปอร์จะอธิบายได้ดีขึ้นพร้อมกับที่n-order (สม. (1)) มากกว่าด้วยวิธีการเชิงเส้นตั้งแต่นานถือครั้ง tailing สามารถเกิดขึ้นได้ แต่ไม่ shouldering เป็นข้อสังเกต (อนันต, ไฮนซ์และSchlüter 2001; Margosch, et ​​al. 2006; Mathys 2008; Reineke, 2012b). สำหรับ n ¼ 1 log10 ไม่มีN0? ¼ log10 จ-kt? ? ð1Þสำหรับ n N 1 log10 ไม่มีN0? ¼ log10 D1 þ k Nn-1 0 ทีðÞ n-1? ? 1 1 n? ð2Þตารางที่ 1 อุณหภูมิการตั้งค่าสำหรับการทดลอง HPTS ที่ 600 MPa. รักษาT [° C] น้ำมันอาบน้ำ T [° C] Aces T เริ่มต้น[° C] ปลาทูน่าในน้ำเกลือT เริ่มต้น [° C] ทูน่าดอกทานตะวันน้ำมันT เริ่มต้น [° C] ปลาซาร์ดีนในน้ำมันมะกอกน้ำมัน T เริ่มต้น [° C] 90 95 50 50 45 45 105 65 65 110 60 60 110 115 70 70 75 75 115 120 75 75 80 80 121 125 80 80 85 85 รูป 1. อุณหภูมิความดัน (121 ° C, 600 MPa; PATS) วัดภายในเรือของU 111 44 อาร์ Sevenich et al, / วิทยาศาสตร์การอาหารนวัตกรรมและเทคโนโลยีใหม่ 20 (2013) 42-50 สองพารามิเตอร์สามารถจะได้มาจากวิธีการรูปแบบซึ่งเป็นที่ไม่ซ้ำกันสำหรับการใช้งานเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวและทุกวิธีโดยที่พวกเขาสามารถนำมาเปรียบเทียบ: สั่งปฏิกิริยาและคงอัตรา k ที่คงที่อัตราการใช้งานอย่างต่อเนื่องแสดงให้เห็นถึงผลกระทบที่เกิดสปอร์ยับยั้งของแต่ละPT-รวมกัน N คือปัจจัยรูปร่างถ้า n = 1 มันเป็นปฏิกิริยาที่สั่งซื้อครั้งแรกอื่นถ้าn N 1 เป็นที่ n-เพื่อรูปร่างขึ้นเว้าและเป็นตัวแทนtailing. สำหรับวันนี้การศึกษาข้อมูลที่ได้จากจุลินทรีย์เป็น log10 ไม่มีN0? ? และพล็อตในช่วงเวลา สาย Isokinetic สำหรับไดอะแกรมเวลาอุณหภูมิที่จะได้รับ3, 5 และ 12 log10 ประเมินการใช้งานได้ที่ได้มาจากการวิเคราะห์การเคลื่อนไหวของข้อมูลการทดลองใช้งาน ที่จะได้รับปฏิกิริยาการสั่งซื้อทั้งหมดจลนศาสตร์อุณหภูมิแรงดันถูกพอดีกับช่วงของการเกิดปฏิกิริยาการสั่งซื้อ(n = 1.0-1.7) (TableCurve2D SPSS อิงค์, Chicago, IL, USA) ผลรวมน้อยที่สุดของข้อผิดพลาดมาตรฐานระบุคำสั่งปฏิกิริยาที่ดีที่สุด. จลนศาสตร์การใช้งานทั้งหมดควบคู่กับ n ที่ดีที่สุดที่จะได้รับ k ที่จะได้รับการพึ่งพาการทำงานของ k (T), k และ T กำลังพอดีกับสมการทุกชุดของTableCurve2D (SPSS อิงค์, Chicago, IL, USA) สมกับที่ผลรวมน้อยที่สุดของตารางข้อผิดพลาด k (T) ถูกนำมาใช้แล้ว (1) สำหรับ k สาย isorate ถูกคำนวณด้วย MathCAD 2001i มืออาชีพ (Mathsoft วิศวกรรมและการศึกษา, Inc, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สปอร์และสปอร์สายพันธุ์
เตรียมใช้วิธีอธิบายไว้ที่อื่น ( paidhungat et al . , 2002 )
. amyloliquefaciens ( technische mikrobilogie weihenstephan 2.479
, , แฟชั่น 82 ) , การสร้างสปอร์ที่ 37 ° C ในนำแข็ง 2 × SG กลาง

แผ่นวุ้นปราศจากยาปฏิชีวนะ สปอร์ถูกระงับความสะอาด โดยปั่น ( ซ้ำ 3-fold
ที่ 5000g ) , การล้างด้วยน้ำกลั่นเย็น ( 4 ° C )และรักษาเป็นครั้งคราวกับ sonication 1 นาที

สะอาดสปอร์แขวนลอยอยู่≥ 95% ระยะที่สดใสและไม่สร้างสปอร์สปอร์
เกือบรวมเป็นถูกตรวจสอบโดยระบบวิเคราะห์
อนุภาค ( FPIA 3000 , Malvern ใน Worcestershire , สหราชอาณาจักร , R )
sevenich et al . วิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีและนวัตกรรมอาหาร 20 ( 2013 ) 42 - 50 43
การสร้างสปอร์แขวนลอยที่ถูกเก็บไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิ 4 องศา สปอร์ของ stearothermophilus
g ( sterikon กับ bioindicator ) ซื้อมาจาก
เมอร์ค ( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) พร้อมรับรอง d121.1 ° C = 1.5 – 2 นาที
และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศาองศาเซลเซียสในที่มืด
2.2 . ตัวอย่างการเตรียม
ดิบ unretorted ปลาทูน่าในน้ำเกลือ ปลาทูน่ากระป๋อง ( ในทานตะวัน
น้ำมันปลาซาร์ดีนในน้ำมันมะกอกที่ได้รับผ่านนูแวลล์คลุมเครือ
( บูโลญ แมร์ , ฝรั่งเศส ) ทูน่าในน้ำมันดอกทานตะวัน และปลาซาร์ดีน
ในน้ำมันมะกอกในกระป๋องได้ผ่านและเพียงทูน่าในน้ำเกลือ
คือดิบ ก่อนการรักษาปลา HP จำนวนสับใน
เครื่องปั่นและกดผ่านตะแกรงหลังจากนั้นได้รับเมทริกซ์เนื้อเดียว

เป็นบัฟเฟอร์ ซึ่งระบบแบบ ( N - ( 2-acetamido ) - 2-aminoethanesulfonic
acid ) ( กระตุ้นการทดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี , 0.05 , กระทรวงแรงงาน ,
pH 7 ) ค่อนข้างมีบัฟเฟอร์พีเอชเอชพีใช้ .
ความดันสื่อ ( เมทริกซ์ปลาและบัฟเฟอร์ ) สปอร์ของเชื้อ B .
amyloliquefaciens หรือ stearothermophilus เพื่อกรัม สปอร์
นับ 105 กับ 107 / กรัมผสมกับแผงประดับหน้าอก ( ซีเวิร์ดทางการแพทย์

ลอนดอน , UK )สำหรับการวิเคราะห์และ furan mcpd / mcpd เอสเทอร์ บางส่วนของ
และผสมเชื้อเมทริกซ์ ( 1.5 กรัม ) ถูกวางไว้ในภาชนะ ( ขณะนี้
เครโอหลอด Nr 375299 , ขณะนี้ A / S , Roskilde , DK ) และใส่ในน้ำแข็ง การทดลองทั้งหมดมีวัตถุประสงค์ในที่ซ้ำกัน
.
2.3 การรักษา hpts
หน่วยความดันสูง u 111 ( unipress , วอร์ซอ , PL ) , ระบบขนาดห้องปฏิบัติการ
ถูกใช้เพื่อทำการการยับยั้งและการก่อตัวของ FPCs การศึกษา .
กับหน่วยนี้แรงกดดันถึง 700 เมกะปาสคาลและอุณหภูมิสูงถึง 130 องศา C
สามารถเข้าถึงได้ ความดันสูงปานกลาง คือ การส่งน้ำมันซิลิโคน
หน่วยประกอบด้วยห้าห้อง มีปริมาณ 4 มิลลิลิตร แช่
ในน้ำมันซึ่งสามารถแยกใช้สำหรับการทดลองที่ความดันสูง ความดันอัตราการสะสม 25 เมกะ
/ Sอุณหภูมิที่เลือกสำหรับ
รักษาเป็น 90 , 105 , 110 และ 115 121 ° C ที่ 600 เมกะปาสคาล น้ำมันอาบน้ำ
ถูกตั้งค่าในกระบวนการเลือกอุณหภูมิและอุณหภูมิเริ่ม
สำหรับแต่ละระบบอาหารที่ได้รับใน pretrials ( ตารางที่ 1 ) .
ตรวจสอบอุณหภูมิระหว่างการรักษาควบคุมตัวอย่าง
เต็มไปด้วยเหมือนกันปลาที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ใส่ไปในตัว
ของห้องและติดตั้งเทอร์โมคัปเปิล ( unipress วอร์ซอ
PL ) และอุณหภูมิที่วัดได้ในศูนย์ของรูปทรงเรขาคณิตตัวอย่าง ( รูปที่ 1 )
.
ในอุตสาหกรรมปลาค่าละภาพจะตอบโต้กับกระป๋องปลา
7 นาที ซึ่งแสดงถึงการรักษาเงื่อนไขของ 28 นาที
115 เมตร C . ดังนั้นการก่อตัวของ FPCs ถูกตรวจสอบภายใต้เงื่อนไข hpts
เท่ากับละ = 7 นาทีจำนวน 115 องศา C และ 28 นาที 121 ° C
7 นาทีที่ 600 เมกะปาสคาล สำหรับอุณหภูมิ 90 ถึง 110 องศา C ถือ
ครั้งใช้ไม่เท่ากับละ = 7 นาที ห้าถึงเจ็ดจุดได้ในช่วง 4

ถือครั้ง ตั้งแต่การยับยั้งสปอร์ภายใต้ความร้อนและความดันสูงเงื่อนไข
แตกต่างในความเร็วและกลไกที่ถือสำหรับ
ครั้งhpts อยู่ระหว่าง 1 และ 30 นาที ขึ้นอยู่กับอุณหภูมิ
ห้าถึงเจ็ดพลังงานจลน์จุดได้ในช่วงถือครั้ง .
หลังการรักษาจำนวนใส่ในน้ำแข็งและตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ในภายหลัง
FPCs ถูกแช่แข็งที่อุณหภูมิ 80 องศา −
2.4 . การวิเคราะห์ของ FPCs
furan : การวิเคราะห์ furan ดำเนินการโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟี - แมสเฮดสเปซ
แบบอัตโนมัติ ( hs-gc ( MS )ตั้งแต่ furan เป็น
ผันผวนมาก ( บีพีที 31 ° C ) ใช้เป็นเฮดสเปซ ) เป็นวิธีการที่ชัดเจนสำหรับ furan
. ตัวอย่างที่บ่มที่อุณหภูมิต่ำ ( 40 /
c ) ทำให้สมดุล furan เป็นเฮดสเปซซึ่งสุ่มตัวอย่างโดย
ฉีดวง furan เป็นวัดโดยการเปรียบเทียบพื้นที่สูงสุด
ของ furan กับการตอบสนองของดิวทีเรียมติดป้าย furan เพิ่ม
ในระดับต่ำการตัวอย่างใช้วิธีการที่อธิบายไว้ในรายละเอียดที่อื่น
( ลูกเรือ&ปราสาท , 2007 ) .
mcpd / mcpd เอสเทอร์ : วิธีการวิเคราะห์ mcpd ฟรีก็อธิบาย
ที่อื่น ( หมู่บ้าน et al . , 2002 ; zelinkov . kgm et al . , 2008 ) สำหรับการ mcpd เอสเทอร์
2 แนวทางที่เป็นไปได้ หนึ่ง
เกี่ยวข้องกับการแปลงของ mcpd เอสเทอร์เพื่อ mcpd ฟรีโดย
ฐานเร่ง transmethylation ( BCT ) ที่สูญเสีย mcpd
สามารถเกิดขึ้นได้ หรือกรดเร่ง transmethylation ( Act ) ที่
เกิด mcpd เพิ่มเติมเป็นไปได้ ; วิธีการอื่น คือ การวิเคราะห์โดยตรงเป็นเอสเทอร์โดย
LC ) MS ( liquid chromatography spectrometry มวล
( ) หรือ dart-ms ( การวิเคราะห์โดยตรงในเวลาจริงมวลสาร
) อธิบายไว้ในที่อื่น ( cajka hajslova & , , mastovska
, 2008 ; hajslova cajka & vaclavik , , , 2011 ; moravcova et al . , 2012 ) ,
ซึ่งถูกใช้ในคดีนี้
2.5 การวิเคราะห์การถดถอยการวิเคราะห์และสปอร์เมื่อ
หลังจากการรักษาความดันส่วน ( 1.5 กรัม ) ผสมกับ
6 ml เป็นโซลูชั่นและบดด้วยลูกปัดแก้ว หลังจากนั้น
เจือจางอนุกรมกับ Ringer solution ลงไป 10 − 6 แสดงและ
ผู้รอดชีวิตหลังจากความดันวัดจากจำนวนจุลินทรีย์ใช้ NUMB3RS

อาณานิคมของamyloliquefaciens อุณหภูมิ 37 องศา C และ G .
stearothermophilus ที่ 55 องศา ทั้งคู่นับหลังจาก 2 วัน
ในหลายเอกสารที่อธิบายถึงอิทธิพลของความดันสูงในการยับยั้งสปอร์
ได้กล่าวไว้ว่า การยับยั้งสปอร์เป็น
อธิบายได้ดีขึ้นด้วยเพื่อแลก ( อีคิว ( 1 ) กว่าด้วย วิธีการเชิงเส้น ,
ตั้งแต่นานถือครั้ง ติดตามสามารถเกิดขึ้นได้แต่ไม่รองรับ
2 ( อนันต& Heinz , โรงเรียน , และ 6 , 2001 ; margosch et al . ,
2006 ; mathys , 2008 ; reineke 2012b , ) .
n ¼ 1
n


LN NO ¼ LN E
− 4   ð 1 Þ
n n 1 LN
-


NO ¼ LN ð 1 þ K NN − 1
0 t ðÞ n − 1
  1
1 − n

ð 2 โต๊ะÞ
1
อุณหภูมิการตั้งค่าสำหรับการทดลองที่ hpts 600 เมกะปาสคาล

[ / c ] t รักษาน้ำมัน

อาบน้ำที [ / c ] t

เอซเริ่ม
[ / c ]
ทูน่าในน้ำเกลือ
T เริ่มต้น [ / c ]


ทานตะวันทูน่าน้ำมันเริ่ม [ / c ] t

น้ำมันปลาซาร์ดีนในมะกอก T เริ่มต้น [ / c ]
90 95 50 50 45 45
105 110 65 65 60 60
110 115 70 70 75 75 75 75 80 80 120
0
121 125 80 80 85 85 รูปที่ 1 อุณหภูมิ ความดัน ( 121 ° C , 600 เมกะปาสคาล ; Pats ) วัดภายในหลอดเลือด
U
44 จาก 111 . . sevenich et al . วิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีและนวัตกรรมอาหาร 20 ( 2013 ) 42 - 50
สองพารามิเตอร์สามารถได้มาจากรูปแบบวิธีการซึ่งมีเอกลักษณ์ทุกตัว
เมื่อและวิธีการที่พวกเขาสามารถ
เมื่อ : ลำดับการเกิดปฏิกิริยาและอัตราคงที่ ค่าคงที่ K ,
เมื่ออัตราคงที่เป็นสปอร์ inactivating ผลของ
แต่ละจุดการรวมกัน N คือปัจจัยรูปร่าง ถ้า n = 1 มันเป็นปฏิกิริยาแรกสั่ง
อีกถ้า n 1 แลกเพื่อ รูปร่างเป็นเว้าและเป็น

ติดตาม .สำหรับการศึกษาครั้งนี้ ข้อมูลที่ได้จากการนับจาน LN N


 NO  และวางแผนในช่วงเวลา เส้นกล้ามเนื้ออุณหภูมิและเวลาไดอะแกรม
รับ 3 , 5 และ 12 เมื่อคาด LN , ได้มาจากการวิเคราะห์จลนศาสตร์ของการยับยั้ง
ข้อมูลการทดลอง เพื่อให้ได้ปฏิกิริยา
สั่งอุณหภูมิและความดันจลนพลศาสตร์เป็นพอดีกว่าช่วงของคำสั่งปฏิกิริยา
( n = 1.0 – 17 ) ( tablecurve2d SPSS Inc , ชิคาโก , IL , USA )
รวมน้อยที่สุดของความคลาดเคลื่อนมาตรฐานระบุลำดับการเกิดปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุด เมื่อมีควบคู่กับจลนศาสตร์
ทั้งหมดที่ดีที่สุดที่จะได้รับ K .

ได้พึ่งพาการทำงานของ K ( t ) K และ T ถูกติดตั้งกับชุดของสมการ
tablecurve2d ( SPSS Inc , ชิคาโก , IL , USA ) สมการกับ
จำนวนน้อยที่สุดของข้อผิดพลาดตารางค่า K ( t ) คือใช้ ( 1 ) สำหรับ K .
isorate เส้นได้ด้วย mathcad 2001i มืออาชีพ ( mathsoft
วิศวกรรม&การศึกษา , Inc . , USA )