2. Materials and methods2.1. Bacter

2. Materials and methods
2.1. Bacterial strain

L. casei (ATCC 393) was obtained from the Korean Federation of Culture Collections. The strains were grown in MRS broth medium and stored with 20% glycerol at −80 °C until use.

2.2. Chemicals

Saccharose (d(+)−Sucrose, C12H22O11, 98%) was purchased from Dae Jung Chemical and Metals (Seoul, Korea). Mannose (d(+)-mannose, C6H12O6, 99.0%), calcium carbonate (CaCO3, 98%), and sodium hydroxide (NaOH, >93.0%) were purchased from Samchun Pure Chemical (Seoul, Korea). Glucose (d(+)−glucose, C6H12O6, 98.0%) was purchased from Junsei Chemical (Tokyo, Japan).

2.3. Effect of growth media composition and pH on viability after freeze-drying

The L. casei strain was inoculated into MRS broth (Difco, Franklin Lakes, NJ, USA) and incubated at 37 °C for 30 h based on the growth curve. The MRS broth contained NaOH (the pH was adjusted to 8.0), 0.1% (w/v) CaCO3, 1% (w/v) mannose, NaOH with 1% (w/v) mannose, and 0.1% (w/v) CaCO3 with 1% (w/v) mannose. Next, 20 ml of each suspension were poured into liquid nitrogen until thermal equilibrium was reached. The samples were then loaded into the freeze-dryer for 24 h and rehydrated with the same volume of buffered peptone water (BPW). The number of CFU ml−1 (colony forming units) was determined by the plate dilution method using a bromocresol purple (BCP) plate count agar (Eiken Chemical, Japan).

2.4. Effect of air pressure during spraying process

The L. casei strain was incubated in optimized growth media at 37 °C for 30 h, and then cells were harvested by centrifugation. The strain was then homogeneously suspended in the same volume of BPW. In order to evaluate the possible damage caused by the spraying through a two-fluid nozzle, the probiotic solution was sprayed (feed supply 5 ml/min) into a test tube. The atomization air pressures of 20 kPa and 30 kPa were applied, and the nozzle tip lift was 1 mm. After spraying, the probiotic solutions were collected, and their viability was determined by the plate dilution method using a BCP plate count agar.

2.5. Effect of protective agents on powder properties and viability after spray freeze-drying

The L. casei strain was incubated in optimized growth media at 37 °C for 30 h, and cells were harvested by centrifugation. The strain was homogeneously suspended in the same volume of solution with different compositions (e.g., BPW, 0.1% and 1% sucrose solution, and 0.1% and 1% glucose solution) in distilled water. The probiotic solution was then sprayed through a two-fluid nozzle (nozzle tip lift: 1.0 mm opening) with a flow rate of 5 mL/min for 4 min. The atomization air pressure was 20 kPa, and the resulting droplets were immersed in liquid nitrogen.

After the spraying process was completed, the vessel containing the liquid nitrogen and L. casei strain was transferred to a deep freezer (Gudero, Ilshin Lab, Gyeonggi-do, Korea) for annealing and to evaporate the liquid nitrogen. The annealing time and temperature were 3 h and −15 °C, respectively. The final annealing temperature and time were −40 °C and 1 h. The sample was then transferred to a freeze-dryer and loaded. Drying was performed at a pressure of 0.133 kPa. The shelf temperature was kept at −25 °C for 24 h and was then increased to 20 °C over 4 h and held for 10 h. The number of CFU ml−1 was determined by the plate dilution method using a BCP plate count agar. Then, the dried L. casei powders were stored at 4 °C until use.

2.6. Scanning electron microscopy and particle size analysis

An SEM (JSM 5410LV, JEOL, Japan) was used to evaluate the powder surface and structure after SFD. The dried powder samples were attached to double-sided carbon tabs and mounted on the SEM support, which was coated with a thin layer of gold for 10 min.

A laser particle size analyzer was used to determine the particle size and particle size distribution. Particle diameter was indicated by volume (%). Each dried powder sample (10 mg) was dispersed in 40 ml of hexane and then analyzed.

2.7. Statistical evaluation

Data are expressed as means ± SD. Differences between groups were analyzed using a paired t-test and an ANOVA. A p-value

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. แบคทีเรียสายพันธุ์L. บ้าน (ATCC 393) ได้รับจากสภาคอวัฒนธรรมเกาหลี สายพันธุ์ปลูกในน้ำซุป MRS และเก็บไว้กับกลีเซอรอล 20% ที่ −80 ° C จนกว่าจะใช้2.2. เคมีภัณฑ์Saccharose (d (+) −Sucrose, C12H22O11, 98%) ถูกซื้อจาก Dae Jung เคมีและโลหะ (โซล เกาหลี) Mannose (d (+) -mannose, C6H12O6, 99.0%), แคลเซียมคาร์บอเนต (CaCO3, 98%), และโซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH, > 93.0%) ซื้อจาก Samchun บริสุทธิ์เคมี (โซล เกาหลี) กลูโคส (d (+) −glucose, C6H12O6, 98.0%) ซื้อจากเคมีจุน (โตเกียว ญี่ปุ่น)2.3. ผลขององค์ประกอบสื่อเจริญเติบโตและค่า pH ในชีวิตหลังจากแช่แข็งแห้งสายพันธุ์บ้าน L. inoculated ลงในน้ำซุป MRS (Difco ทะเลสาบแฟรงคลิน NJ สหรัฐอเมริกา) และรับการกกที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 ชม.ตามเส้นโค้งการเจริญเติบโต น้ำซุป MRS ประกอบด้วย NaOH (pH ปรับการ 8.0), 0.1% (w/v) CaCO3, mannose 1% (w/v) NaOH กับ mannose 1% (w/v) และ 0.1% (w/v) CaCO3 กับ mannose 1% (w/v) ถัดไป 20 ml ของแต่ละระบบกันสะเทือนถูกเทลงในไนโตรเจนเหลวจนสมดุลความร้อนก็มาถึง ตัวอย่างแล้วถูกโหลดลงในเครื่องเป่าหยุดใน 24 ชม และ rehydrated ด้วยระดับเสียงเดียวน้ำ peptone บัฟเฟอร์ (สมาคมฯ) จำนวน CFU ml−1 (อาณานิคมหน่วยการขึ้นรูป) ถูกกำหนด โดยวิธีการเจือจางแผ่นที่ใช้เป็นสีม่วง bromocresol (BCP) อาหารเหลว (Eiken เคมี ญี่ปุ่น)2.4. ผลของความดันอากาศในระหว่างกระบวนการฉีดพ่นสายพันธุ์บ้าน L. incubated สื่อเหมาะสมเจริญเติบโตที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 ชม. แล้ว เซลล์มาเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยง สายพันธุ์แล้ว homogeneously ถูกระงับในไดรฟ์ข้อมูลเดียวของสมาคมฯ พ่นแก้ปัญหาโปรไบโอติกเพื่อประเมินหายไปได้ โดยการฉีดผ่านหัวฉีดของเหลวสองตัว (อาหารจัดหา 5 มล./นาที) ลงในหลอดทดลอง ใช้ความกดดันอากาศแยกเป็นอะตอม 20 kPa และ 30 kPa และยกปลายหัวฉีดก็ 1 mm หลังจากฉีดพ่น โซลูชั่นโปรไบโอติกถูกเก็บรวบรวม และกำหนดชีวิตของพวกเขา โดยวิธีการเจือจางจานใช้การ BCP อาหารเหลว2.5. ผลของบริษัทตัวแทนการป้องกันคุณสมบัติผงและชีวิตหลังจากแช่แข็งแห้งสเปรย์สายพันธุ์บ้าน L. incubated สื่อเหมาะสมเจริญเติบโตที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 ชม. และเซลล์ถูกเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยง สายพันธุ์ถูกระงับ homogeneously ในไดรฟ์ข้อมูลเดียวกันของโซลูชันที่มีองค์ประกอบแตกต่างกัน (เช่น สมาคมฯ 0.1% และ 1% ซูโครสโซลูชัน และโซลูชันกลูโคส 0.1% และ 1%) ในน้ำกลั่น โซลูชันโปรไบโอติกถูกแล้วพ่นผ่านหัวฉีดของเหลวสองตัว (ยกหัวฉีดแนะนำ: เปิด 1.0 มิลลิเมตร) กับอัตราการไหล 5 มล./นาที 4 นาที ความดันอากาศแยกเป็นอะตอม 20 kPa และหยดเป็นผลลัพธ์ถูกแช่อยู่ในไนโตรเจนเหลวหลังจากเสร็จสิ้นกระบวนการฉีดพ่น เรือที่ประกอบด้วยไนโตรเจนเหลวและ L. บ้านเครียดถูกย้ายไปตู้แช่ลึก (คยอง เกาหลี Gudero, Ilshin แล็บ) สำหรับหลอม และระเหยไนโตรเจนเหลว เวลาและอุณหภูมิหลอมได้ 3 ชม.และ −15 ° C ตามลำดับ สุดท้ายหลอมอุณหภูมิและเวลา −40 ° C และ 1 h ตัวอย่างการหยุดเครื่องอบแล้ว และโหลด การอบแห้งได้ดำเนินการที่แรงดัน 0.133 kPa อุณหภูมิชั้นถูกกำหนดไว้ที่− 25 ° C ใน 24 ชม และจากนั้นเพิ่มขึ้นเป็น 20 ° C กว่า 4 ชม. และรอ 10 ชม. จำนวน CFU ml−1 ถูกกำหนด โดยวิธีการเจือจางจานใช้การ BCP อาหารเหลว แล้ว บ้านผงแห้งของ L. ถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C จนกว่าจะใช้2.6 การวิเคราะห์ขนาดอนุภาคและชาวดัตช์การสแกนSEM (JSM 5410LV, JEOL ญี่ปุ่น) ถูกใช้เพื่อประเมินผงพื้นผิวและโครงสร้างหลังจาก SFD ตัวอย่างผงแห้งถูกแนบกับคาร์บอนสองแท็บ และติดตั้งการสนับสนุน SEM ซึ่งถูกเคลือบ ด้วยชั้นบาง ๆ ของทองสำหรับ 10 นาทีเครื่องวิเคราะห์ขนาดอนุภาคเลเซอร์ถูกใช้เพื่อกำหนดขนาดอนุภาคและการกระจายขนาดของอนุภาค อนุภาคเส้นผ่านศูนย์กลางระบุ โดยปริมาตร (%) แต่ละตัวอย่างผงแห้ง (10 มิลลิกรัม) กระจายใน 40 มล.ของเฮกเซน และวิเคราะห์แล้ว2.7. สถิติการประเมินข้อมูลจะแสดงเป็นหมายความว่า แอพเดียวความแตกต่างระหว่างกลุ่มได้วิเคราะห์โดยใช้ t-ทดสอบจับคู่และ ANOVA ± P-ค่า < 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สายพันธุ์แบคทีเรีย

L. casei (ATCC 393) ที่ได้รับจากสภาวัฒนธรรมเกาหลีของคอลเลกชัน สายพันธุ์ที่ปลูกในสื่อ MRS น้ำซุปและเก็บไว้กับ 20% กลีเซอรอลที่ -80 องศาเซลเซียสจนการใช้งาน

2.2 สารเคมี

Saccharose (D (+) - ซูโครส C12H22O11, 98%) ซื้อมาจากแดจุงทางเคมีและโลหะ (กรุงโซลประเทศเกาหลี) แมนโนส (D (+) - แมนโนส, C6H12O6, 99.0%), แคลเซียมคาร์บอเนต (CaCO3 98%) และโซดาไฟ (NaOH> 93.0%) ที่ซื้อมาจาก Samchun เคมีบริสุทธิ์ (กรุงโซลประเทศเกาหลี) กลูโคส (D (+) - กลูโคส C6H12O6, 98.0%) ซื้อมาจาก Junsei เคมี (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น)

2.3 ผลขององค์ประกอบสื่อการเจริญเติบโตและความเป็นกรดด่างในการมีชีวิตหลังจากแช่แข็งแห้ง

ความเครียด L. casei ได้รับเชื้อเข้าไปในน้ำซุป MRS (Difco แฟรงคลินทะเลสาบ, นิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 ชั่วโมงขึ้นอยู่กับเส้นโค้งการเจริญเติบโต น้ำซุป MRS มี NaOH (pH ที่ถูกปรับ 8.0) 0.1% (w / v) CaCO3, 1% (w / v) mannose, NaOH 1% (w / v) mannose และ 0.1% (w / v ) CaCO3 1% (w / v) mannose ถัดไป 20 มล. ของแต่ละระงับถูกเทลงในไนโตรเจนเหลวจนสมดุลความร้อนก็มาถึง กลุ่มตัวอย่างที่ถูกโหลดแล้วลงไปแช่แข็งเครื่องเป่าเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและคืนรูปที่มีปริมาณเดียวกันของน้ำบัฟเฟอร์เปปโตน (BPW) จำนวน CFU ML-1 (อาณานิคมหน่วยขึ้นรูป) ถูกกำหนดโดยวิธีเจือจางแผ่นโดยใช้ bromocresol สีม่วง (BCP) นับจานเลี้ยงเชื้อ (Eiken เคมีญี่ปุ่น)

2.4 ผลของความดันอากาศในระหว่างขั้นตอนการฉีดพ่น

ความเครียด L. casei ถูกบ่มในสื่อการเจริญเติบโตที่ดีที่สุดที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 ชั่วโมงและจากนั้นเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง ความเครียดจากนั้นก็ถูกระงับเป็นเนื้อเดียวกันในปริมาณเดียวกันของ BPW เพื่อประเมินความเสียหายที่อาจเกิดจากการฉีดพ่นผ่านหัวฉีดสองของเหลวทางออกโปรไบโอติกพ่น (อุปทานฟีด 5 มล. / นาที) ลงในหลอดทดลอง แรงกดดันละอองอากาศ 20 กิโลปาสคาลและ 30 กิโลปาสคาลที่ถูกนำไปใช้และยกปลายหัวฉีดคือ 1 มิลลิเมตร หลังการฉีดพ่นโซลูชั่นโปรไบโอติกที่ถูกเก็บรวบรวมและการมีชีวิตของพวกเขาถูกกำหนดโดยวิธีเจือจางแผ่นโดยใช้แผ่น BCP นับวุ้น

2.5 ผลของตัวแทนป้องกันเกี่ยวกับคุณสมบัติและผงสเปรย์มีชีวิตหลังจากแช่แข็งแห้ง

ความเครียด L. casei ถูกบ่มในสื่อการเจริญเติบโตที่ดีที่สุดที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 ชั่วโมงและเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง สายพันธุ์ที่ถูกระงับเป็นเนื้อเดียวกันในปริมาณเดียวกันของการแก้ปัญหาที่มีองค์ประกอบที่แตกต่าง (เช่น BPW, 0 1% และสารละลายน้ำตาลซูโครส 1% และ 0.1% และการแก้ไขปัญหาน้ำตาลกลูโคส 1%) ในน้ำกลั่น วิธีการแก้ปัญหาโปรไบโอติกพ่นแล้วผ่านของเหลวที่สอง (ยกปลายหัวฉีด: 1.0 มมเปิด) หัวฉีดที่มีอัตราการไหลของ 5 มิลลิลิตร / นาทีเป็นเวลา 4 นาที ความดันละอองอากาศ 20 kPa และหยดน้ำที่เกิดขึ้นถูกแช่อยู่ในไนโตรเจนเหลว

หลังจากขั้นตอนการฉีดพ่นเสร็จสมบูรณ์เรือที่มีไนโตรเจนเหลวและความเครียด L. casei ถูกย้ายไปช่องแช่แข็งลึก (Gudero, Ilshin แล็บ, Gyeonggi-do เกาหลี) สำหรับการหลอมและระเหยไนโตรเจนเหลว เวลาหลอมและอุณหภูมิได้ 3 ชั่วโมงและ -15 ° C ตามลำดับ อุณหภูมิการหลอมสุดท้ายและเวลาได้ -40 ° C ถึง 1 ชั่วโมง กลุ่มตัวอย่างนั้นก็ย้ายไปแช่แข็งเครื่องเป่าและโหลด การอบแห้งที่ได้ดำเนินการที่ความดัน 0.133 kPa อุณหภูมิการเก็บรักษาที่ถูกเก็บไว้ที่ -25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและได้เพิ่มขึ้นแล้วถึง 20 องศาเซลเซียสในช่วง 4 ชั่วโมงและจัดขึ้นเป็นเวลา 10 ชั่วโมง จำนวน CFU ML-1 ที่ได้รับการกำหนดโดยวิธีเจือจางแผ่นโดยใช้แผ่น BCP นับวุ้น จากนั้นแห้งผง L. casei ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน

2.6 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกนและวิเคราะห์ขนาดอนุภาค

SEM (JSM 5410LV, JEOL ญี่ปุ่น) ถูกนำมาใช้ในการประเมินพื้นผิวผงและโครงสร้างหลัง SFD กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ผงแห้งติดอยู่กับสองด้านแท็บคาร์บอนไดออกไซด์และติดตั้งอยู่บนการสนับสนุน SEM ซึ่งถูกเคลือบด้วยชั้นบาง ๆ ของทองเป็นเวลา 10 นาที

วิเคราะห์ขนาดอนุภาคเลเซอร์ถูกใช้ในการกำหนดขนาดอนุภาคและอนุภาคกระจายขนาด เส้นผ่าศูนย์กลางอนุภาคถูกระบุโดยปริมาตร (%) แต่ละตัวอย่างผงแห้ง (10 mg) กำลังระบาดใน 40 มล. เฮกเซนและวิเคราะห์แล้ว

2.7 การประเมินผลทางสถิติ

ข้อมูลจะแสดงเป็นหมายถึง± SD ความแตกต่างระหว่างกลุ่มที่ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้คู่ t-test และ ANOVA p-value <0.05 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . แบคทีเรียL . casei ( ATCC 393 ) ที่ได้รับจากสหพันธ์เกาหลีของคอลเลกชันของวัฒนธรรม สายพันธุ์ปลูกใน MRS broth medium และเก็บไว้กับ 20 % กลีเซอรอลที่ 80 ° C −จนใช้2.2 . เคมีภัณฑ์แซคคาโรส ( D ( + ) −ซูโครส c12h22o11 98% ) ซื้อมาจาก แด จอง เคมีและโลหะ ( โซล เกาหลี ) แมนโนส ( D ( + ) - แมน C6H12O6 99.0 , ร้อยละ , แคลเซียมคาร์บอเนต ( CaCO3 , 98 % ) และโซเดียมไฮดรอกไซด์ ( NaOH , > 93.0 % ) ซื้อจาก samchun เคมีบริสุทธิ์ ( โซล เกาหลี ) กลูโคส ( D ( + ) −กลูโคส C6H12O6 98.0 , % ) ซื้อมาจากจุนเคมี ( โตเกียว , ญี่ปุ่น )2.3 ผลของการเจริญเติบโตของสื่อองค์ประกอบและค่า pH ในชีวิตหลังจากการทำแห้งเยือกแข็งสายพันธุ์ L . casei เป็นเชื้อ MRS broth ( difco Franklin Lakes , NJ , USA ) และบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 ชั่วโมงตามเส้นโค้งการเติบโต ซุปนางที่มีอยู่ NaOH ( ปรับ pH 8.0 ) 0.1% ( w / v ) แคลเซียมคาร์บอเนต 1% ( w / v ) แมน NaOH ด้วย 1% ( w / v ) mannose และ 0.1% ( w / v ) CaCO3 กับ 1% ( w / v ) แมน . ถัดไป 20 ml ของแต่ละช่วงล่างที่ถูกเทลงไปในไนโตรเจนเหลวจนสมดุลทางความร้อน ครบ จำนวนแล้วโหลดลงเครื่องแช่แข็ง 24 H และได้ทำการ รีไฮเดรทมกับปริมาตรของน้ำในเปปโตน ( BPW ) จํานวน CFU ml − 1 ( หน่วยเป็นอาณานิคม ) ถูกกำหนดโดยการใช้แผ่นแบบโบรมอกลีซ สีม่วง ( BCP ) Planetmath reference ( eiken เคมี , ญี่ปุ่น )2.4 . ผลของความดันอากาศระหว่างกระบวนการฉีดพ่นL . casei สายพันธุ์ถูกบ่มในสื่อการเจริญเติบโตที่ 37 ° C ( 30 ) แล้วเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดยการปั่นเหวี่ยง ความเครียดก็เป็นเนื้อเดียวกันแขวนอยู่ในระดับเดียวกันกับ BPW . เพื่อประเมินความเสียหายที่เกิดขึ้น โดยได้ผ่านสองหัวฉีดพ่นของเหลว โซลูชั่น โปรไบโอติกคือพ่นอาหารใส่ 5 มิลลิลิตรต่อนาที ) ลงในหลอดทดลอง ที่เป็นละอองอากาศความดัน 20 kPa และ 30 กิโลปาสคาลที่ใช้ และหัวฉีดยกได้ 1 มิลลิเมตร หลังการฉีดพ่น , โซลูชั่น โพรไบโอติก ศึกษา และชีวิตของพวกเขาถูกกำหนดโดยการใช้แผ่น วิธีนับจากจานอาหารเลี้ยงเชื้อ2.5 ผลของตัวแทนป้องกันสมบัติและความอยู่รอดหลังทำแห้งผงสเปรย์L . casei สายพันธุ์ถูกบ่มในสื่อการเจริญเติบโตที่ 37 ° C ( 30 ) , และเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดยการปั่นเหวี่ยง ความเครียดก็เป็นเนื้อเดียวกันแขวนอยู่ในปริมาตรของสารละลายที่มีองค์ประกอบที่แตกต่างกัน ( เช่น BPW , 0.1% และสารละลายซูโครส 1% และ 0.1% และสารละลายกลูโคส 1% ) ในน้ำกลั่น โซลูชั่นโพรไบโอติกแล้วพ่นผ่านหัวฉีดของเหลวสอง ( หัวฉีดยก 1.0 มม. เปิด ) ด้วยอัตราการไหล 5 มิลลิลิตรต่อนาทีเป็นเวลา 4 นาทีเป็นละอองแรงดันอากาศ 20 kPa และเป็นผลให้ถูกแช่อยู่ในไนโตรเจนเหลวหลังจากพ่นกระบวนการเสร็จ เรือที่มีไนโตรเจนเหลวและ L . casei สายพันธุ์ถูกย้ายไปที่ตู้แช่ลึก ( gudero ILSHIN แล็บ คยองกี ทำ เกาหลี ) สำหรับการอบและระเหยไนโตรเจนเหลว การอบอ่อน เวลาและอุณหภูมิได้ 3 H และ− 15 ° C ตามลำดับ สุดท้ายการอบอุณหภูมิและเวลาเป็น− 40 ° C และ 1 ชั่วโมง จำนวน แล้วย้ายไปแช่แข็งและแห้งโหลด การอบแห้งถูกดำเนินการที่ความดันของ 0.133 kPa . การเก็บรักษาอุณหภูมิไว้ที่ 25 องศา C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และ บริษัท เวสเทิร์น ก็เพิ่มขึ้นเป็น 20 ° C กว่า 4 ชั่วโมง และจัดขึ้นเป็นเวลา 10 ชั่วโมง จำนวน CFU ml − 1 ถูกกำหนดโดยการใช้แผ่น วิธีนับจากจานอาหารเลี้ยงเชื้อ แล้ว L . casei ผงแห้งที่อุณหภูมิ 4 องศา C จนใช้2.6 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด และวิเคราะห์ขนาดอนุภาคและ SEM ( JSM 5410lv จอล , ญี่ปุ่น ) ถูกนำมาใช้เพื่อประเมินผงพื้นผิวและโครงสร้างหลัง sfd . ผงแห้งจำนวนแนบสองเม็ดคาร์บอน และติดบน SEM สนับสนุน ซึ่งถูกเคลือบด้วยชั้นบางของทองสำหรับ 10 นาทีเลเซอร์เครื่องวิเคราะห์ขนาดอนุภาคที่ใช้ในการตรวจสอบขนาดและการกระจายขนาดของอนุภาค ขนาดอนุภาคที่ถูกระบุโดยปริมาตร ( % ) แต่ละตัวอย่างผงแห้ง ( 10 mg ) ถูกกระจายออกไปใน 40 มิลลิลิตร เฮกเซน และวิเคราะห์2.7 . การประเมินผลทางสถิติข้อมูลที่แสดงเป็นวิธีการ± SD ความแตกต่างระหว่างกลุ่ม วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้สถิติ Paired t-test และ ANOVA p < 0.05 อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ