2.3. Primer design and PCR specific

2.3. Primer design and PCR specificity and sensitivity analysis
In the present study, the primers used for PCR and real-time
PCR were designed using primer express software v2.0 (Applied
Biosystems, USA) and Primer Design Assistant (National Health
Research Institute, Taiwan) based on the gene sequences for TnI
(pork: NM_213912, chicken: NM_205417, and goat: AY033589),
MRP (beef: NM_001045926) and tropomodulin (ostrich:
AB254879) (Chen, Lin, Cho, Lo, & Hsiung, 2003) retrieved from
the National Center for Biotechnology Information (NCBI)
GenBank. The primer and amplicon sequences are shown in
Supplemental Tables 2 and 3.
For the primer sensitivity test, a series of primer concentrations
(1, 0.5, 0.25, 0.1 and 0.05 lM) were examined in PCR reactions containing
100 ng cDNA template. For the cDNA template sensitivity
test, ten-fold serial dilutions (100, 10, 1, 0.1, and 0.01 ng) were prepared
for the cDNA template generated from each species. To
assess meat adulteration, 20, 2, 0.2 and 0.02 ng of cDNA were used
as templates per PCR reaction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การออกแบบไพรเมอร์และความจำเพาะ PCR
และการวิเคราะห์ความไวในการศึกษาปัจจุบันไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับPCR และ real-time
PCR ได้รับการออกแบบโดยใช้ไพรเมอร์ v2.0 ซอฟต์แวร์ด่วน (Applied
Biosystems สหรัฐอเมริกา) และไพรเมอร์ช่วยออกแบบ
(สุขภาพแห่งชาติสถาบันวิจัยไต้หวัน) ขึ้นอยู่กับลำดับยีนสำหรับ TNI
(หมู: NM_213912 ไก่: NM_205417 และแพะ: AY033589)
MRP (เนื้อ: NM_001045926) และ tropomodulin (นกกระจอกเทศ:
AB254879) (เฉินหลินโชโลและ Hsiung, 2003) ดึง
จากศูนย์แห่งชาติสำหรับข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ(NCBI)
GenBank ไพรเมอร์และลำดับ amplicon ที่แสดงอยู่ในตารางเสริมที่ 2 และ 3 สำหรับการทดสอบความไวของไพรเมอร์ชุดของความเข้มข้นของไพรเมอร์(1, 0.5, 0.25, 0.1 และ 0.05 LM) ได้รับการตรวจสอบในปฏิกิริยา PCR ที่มี100 นาโนกรัมแม่แบบของยีน สำหรับยีนแม่แบบไวทดสอบสิบเท่าเจือจางอนุกรม (100, 10, 1, 0.1 และ 0.01 นาโนกรัม) ได้จัดทำสำหรับแม่แบบยีนที่เกิดจากแต่ละสายพันธุ์ เพื่อประเมินการปลอมปนเนื้อสัตว์ 20, 2, 0.2 และ 0.02 นาโนกรัมของยีนถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบต่อปฏิกิริยาPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 แนวทางการออกแบบและการวิเคราะห์ความไวและความจำเพาะเชื้อ
ในการศึกษาด้วยเทคนิค PCR แบบเรียลไทม์ และใช้ซอฟต์แวร์ Express ถูกออกแบบมาโดยใช้ไพรเมอร์
V2.0 ( ประยุกต์
Biosystems , USA ) และไพรเมอร์ที่ออกแบบผู้ช่วย ( สุขภาพแห่งชาติ
สถาบันวิจัยไต้หวัน ) ตามลำดับสำหรับยีน TNI
( หมู : nm_213912 , ไก่ : nm_205417 และแพะ : ay033589
MRP ( เนื้อ : )nm_001045926 ) และ tropomodulin ( นกกระจอกเทศ :
ab254879 ) ( เฉินหลิน โช ดูเถิด & hsiung , 2003 ) ที่ดึงมาจาก
ศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ ( ncbi )
ขนาด . ไพรเมอร์ และ จะแสดงในลำดับและเสริมตารางที่ 2 และ 3
.
สำหรับการทดสอบความไวของชุดไพรเมอร์ , รองพื้น )
( 1 , 0 , 0.25 , 0.1 และ 0.05 LM ) โดยทำการศึกษาในปฏิกิริยา PCR ที่มี
100 ของดีเอ็นเอแม่แบบ สำหรับดีเอ็นเอแม่แบบไว
ทดสอบสิบเท่าซีเรียลเจือจาง ( 100 , 10 , 1 , 0.1 และ 0.01 กรัม ) เตรียม
สำหรับแม่แบบที่สร้างขึ้นจากสายพันธุ์แต่ละชนิด

การประเมินเนื้อ , 20 , 2 , 0.2 และ 0.02 ng ของดีเอ็นเอถูกใช้เป็นแม่แบบ
ต่อปฏิกิริยา PCR