database search criteria were taxon

database search criteria were taxonomy, yeast fixed modification,carboxyamidomethylation at cysteine residues, variable modifica-tion, oxidation at methionine residues, a maximum allowed missedcleavage of 2, an MS tolerance of 100 ppm, and an MS/MS toler-ance of 0.1 Da. Only peptides resulting from trypsin digests wereconsidered.2.8. Analytical procedureThe total yeast protein contents secreted into the mediumfollowing bead beating were determined via a Bradford assayusing bovine serum albumin as a standard [25]. The amount ofbio-ethanol produced as a result of cell-free fermentation wasmeasured using a UV–vis spectrophotometer (Sunil Eyela Co., Ltd.,China) and an ethanol kit (BioAssay Systems, Hayward, CA, USA), aspreviously described [20]. The removal of glucose from the fermen-tation broth was ensured prior to the bio-ethanol quantificationusing a saccharide removal kit (BioAssay Systems, Hayward, CA,USA) [20]. The concentration of glucose in the fermentation brothwas determined with a glucose assay kit (Sigma GAGO-20); anATP assay kit (ab83355) and NAD+/NADH assay kit (ab65348) wereused to determine the concentration of ATP and NAD+in the cell-free enzyme system. All the experiments were performed at leastin triplicate, and differences between the means were consideredsignificant at p ≤ 0.05.2.9. Microbiological analysisThe density of yeast cells was measured by the standard trypanblue method using a hemocytometer [26]. The number of colonyforming units (CFU) of yeast was determined using YM selectivegrowth media on agar plates. Specifically,: the plates were incu-bated at 30◦C for three days, and the colonies were counted [20].A fluorescence microscope (JENMED, Germany) was used to inves-tigate the morphology of the yeast cells before, during, and afterbead beating.2.10. FermentationFermentation was performed using a cell-free enzyme system.A pure glucose solution was used as the substrate for the yeastcell-free enzyme system.2.10.1. Determination of the optimum temperature, pH, andglucose concentrationThe optimum temperature for the cell-free enzyme system wasdetermined by incubating a reaction mixture composed of an equalvolume of cell-free enzyme solution (3.13 mg/mL) and glucose solu-tion (1%) at temperatures of 30, 40, 50, and 60◦C with agitation(150 rpm) for 8 h at pH 7.0. The final concentration of cell-freeenzymes in each reaction mixture was 1.56 mg/mL. Next, 4 mMarsenate (Sigma 45587) was added to the reaction mixture, andthe total bio-ethanol produced at various temperatures was deter-mined using an ethanol assay kit.The optimum pH for the cell-free fermentation system wasdetermined using pH buffer solutions (SAMCHUN©, Korea) ofdifferent pH values (4.0–9.0). The glucose solution (1%) and cell-free solution (1.56 mg/mL) were incubated at 40◦C with agitation(150 rpm) for 8 h. The reaction mixture was then evaluated for bio-ethanol production at various pH ranges using a bio-ethanol assaykit.The effect of glucose concentration on the production ofbio-ethanol was determined by placing the fermentation broth con-taining different glucose concentrations (1, 2, 3, 4, and 5%) and thecell-free solution (1.56 mg/mL) in separate 5-mL glass vials sealedwith a rubber cap and incubating the samples at 40◦C with agi-tation (150 rpm) for 8 h. During the incubation, samples from thefermentation broth were collected every hour and analyzed fortotal bio-ethanol production and glucose conversion using an assaykit.2.10.2. Effect of the cell-free enzyme solution concentrationThe effect of increasing cell-free enzyme concentrations on totalbio-ethanol production were evaluated using 3% and 5% glucosesolutions as the substrate. Briefly, the cell-free enzyme solutionwas concentrated to 5 mg/mL using 10-kD spin columns (ab93349),and serial dilutions containing different concentrations of cell-freesolution (1, 2, 3, 4, and 5 mg/mL) were prepared. Similar quantitiesof solid glucose were added to each cell-free enzyme solution (1 mL)to obtain the reaction mixture; the vials containing the reactionmixture were incubated at pH 7.0 for 8 h at 40◦C with agitation(150 rpm), and samples from each reaction vial were analyzed fortotal bio-ethanol production using an assay kit.2.11. Comparison of cell-free and conventional fermentationsystemsPellets of yeast culture were obtained by high-speed centrifu-gation (3500 rpm) of a freshly prepared yeast pre-culture (50 mL).The pellets were then resuspended in YM broth (5 mL) to obtaina dense yeast culture. This dense yeast culture and the cell-freeenzymes obtained from same volume of dense yeast culture werethen incubated with a 1% glucose solution with agitation (150 rpm)at five different temperatures (30, 35, 40, 45, and 50◦C) at pH 7.0for 8 h and comparatively evaluated for bio-ethanol production.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฐานข้อมูลค้นหา carboxyamidomethylation ที่ตก cysteine ตัวแปร modifica-สเตรชัน ออกซิเดชัน ยีสต์คงปรับเปลี่ยน ระบบภาษีที่ตกค้าง methionine สูงสุดที่อนุญาตให้ missedcleavage 2 ค่าเผื่อเป็น MS ของ 100 ppm และ toler-ance เป็น MS/MS 0.1 ดา เปปไทด์เดียวที่เกิดจาก wereconsidered.2.8 digests ทริปซิน ProcedureThe วิเคราะห์รวมยีสต์โปรตีนเนื้อหา secreted เข้าไปในลูกปัด mediumfollowing ที่ตีถูกกำหนดผ่านเป็นแบรดฟอร์ด assayusing วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน [25] การเงิน ofbio-เอทานอลผลิตจาก wasmeasured หมักปราศจากเซลล์ใช้เป็น UV – vis เครื่องทดสอบกรดด่าง (Sunil Eyela Co., Ltd. ประเทศจีน) และมีเอทานอลชุด (BioAssay ระบบ Hayward, CA, USA), aspreviously อธิบายพรม [20] เอาน้ำตาลกลูโคสจากซุป fermen-tation ได้มั่นใจก่อน quantificationusing ไบโอเอทานอลชุดเอา saccharide (BioAssay ระบบ Hayward, CA, USA) [20] ความเข้มข้นของกลูโคสใน brothwas หมักขึ้นอยู่กับชุดทดสอบน้ำตาลกลูโคส (ซิก GAGO-20); ชุดทดสอบ anATP (ab83355) และและ + /mts NADH wereused (ab65348) ชุดวิเคราะห์เพื่อกำหนดความเข้มข้นของ ATP และ + ในระบบฟรีเซลล์เอนไซม์ ดำเนินการทดลองทั้งหมดที่ leastin triplicate และความแตกต่างระหว่างวิธีได้ consideredsignificant ที่ p ≤ 0.05.2.9 ความหนาแน่น analysisThe ทางจุลชีววิทยาของเซลล์ยีสต์ที่วัด โดยวิธีมาตรฐาน trypanblue ใช้ hemocytometer [26] จำนวน colonyforming หน่วย (CFU) ยีสต์ได้กำหนดใช้สื่อ YM selectivegrowth บนแผ่น agar โดยเฉพาะ,: แผ่นถูก bated incu ที่ 30◦C สามวัน และอาณานิคมที่นับได้ [20]ใช้กล้องจุลทรรศน์ fluorescence (JENMED เยอรมนี) inves tigate สัณฐานวิทยาของเชื้อยีสต์เซลล์ก่อน ระหว่าง และ afterbead beating.2.10 FermentationFermentation ที่ดำเนินการโดยใช้ระบบฟรีเซลล์เอนไซม์โซลูชันกลูโคสบริสุทธิ์ถูกใช้เป็นพื้นผิวที่สำหรับ system.2.10.1 yeastcell ฟรีเอนไซม์ กำหนดอุณหภูมิที่เหมาะสม ค่า pH อุณหภูมิสูงสุด concentrationThe andglucose สำหรับ wasdetermined ระบบเอนไซม์เซลล์ฟรีโดย incubating ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย equalvolume เป็นโซลูชั่นฟรีเซลล์เอนไซม์ (3.13 mg/mL) และน้ำตาลกลูโคส solu-สเตรชัน (1%) ที่อุณหภูมิ 30, 40, 50 และ 60◦C กับ agitation(150 rpm) สำหรับ h 8 ที่ pH 7.0 1.56 mg/mL ความเข้มข้นสุดท้ายของเซลล์-freeenzymes ส่วนผสมแต่ละปฏิกิริยานั้น ถัดไป 4 mMarsenate (ซิก 45587) เข้ามาเพื่อผสมปฏิกิริยา และการรวมลชีวภาพผลิตที่อุณหภูมิต่าง ๆ ขัดขวางขุดโดยใช้ชุดทดสอบการเอทานอลPH ที่เหมาะสมสำหรับ wasdetermined ระบบหมักที่ปราศจากเซลล์ที่ใช้แก้ไขปัญหาบัฟเฟอร์ pH (SAMCHUN ©, เกาหลี) ค่า pH ofdifferent (4.0 – 9.0) โซลูชันกลูโคส (1%) และโซลูชันฟรีเซลล์ (1.56 mg/mL) ถูก incubated ที่ 40◦C กับ agitation(150 rpm) สำหรับ 8 h ผสมปฏิกิริยาถูกแล้วประเมินสำหรับการผลิตไบโอเอทานอลที่ช่วงค่า pH ต่าง ๆ ใช้ assaykit ไบโอเอทานอลผลของความเข้มข้นของกลูโคสในการผลิต ofbio-เอทานอลถูกกำหนดด้วยหมักซุป taining คอนต่าง ๆ กลูโคสความเข้มข้น (1, 2, 3, 4 และ 5%) และฟรี thecell โซลูชัน (1.56 mg/mL) ในขวดแก้ว 5 มล.แยก vials sealedwith ฝาครอบยางและ incubating ตัวอย่างที่ 40◦C กับ agi-tation (150 รอบต่อนาที) สำหรับ 8 h ในระหว่างที่คณะทันตแพทยศาสตร์ ตัวอย่างจากซุป thefermentation ถูกรวบรวมไว้ทุกชั่วโมง และวิเคราะห์ผลิตเอทานอลไบโอ fortotal และแปลงกลูโคสโดยใช้การ assaykit.2.10.2 ผลของผล concentrationThe โซลูชันฟรีเซลล์เอนไซม์ของเอนไซม์ฟรีเซลล์ความเข้มข้นในการผลิตเอทานอล totalbio ได้ถูกประเมินโดยใช้ glucosesolutions 3% และ 5% เป็นพื้นผิวเพิ่มขึ้น สั้น ๆ solutionwas ฟรีเซลล์เอนไซม์เข้มข้น 5 mg/mL โดยใช้คอลัมน์หมุน 10-kD (ab93349), และ dilutions อนุกรมที่ประกอบด้วยความเข้มข้นแตกต่างกันของเซลล์ freesolution เพื่อเตรียม (1, 2, 3, 4 และ 5 mg/mL) Quantitiesof กลูโคสแข็งคล้ายถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละโซลูชันฟรีเซลล์เอนไซม์ (1 mL) รับผสมปฏิกิริยา vials ที่ประกอบด้วย reactionmixture มี incubated ที่ pH 7.0 สำหรับ h 8 ที่ 40◦C กับ agitation(150 rpm) และตัวอย่างจากแต่ละปฏิกิริยาคอนแทคได้ผลิตเอทานอลไบโอ fortotal วิเคราะห์โดยใช้การทดสอบ kit.2.11 เปรียบเทียบ fermentationsystemsPellets เซลล์ฟรี และทั่วไปของยีสต์ได้รับมา ด้วยความเร็วสูง centrifu-gation (3500 รอบต่อนาที) ของยีสต์ลิ้มก่อนวัฒนธรรม (50 มล.)ขี้ได้แล้ว resuspended ในซุป YM (5 mL) วัฒนธรรม obtaina ยีสต์หนาแน่น วัฒนธรรมนี้หนาแน่นยีสต์และ freeenzymes เซลล์ที่ได้รับจากไดรฟ์ข้อมูลเดียวกันของ werethen วัฒนธรรมยีสต์หนาแน่น incubated ด้วยโซลูชั่นกลูโคส 1% มีอาการกังวลต่อ (150 รอบต่อนาที) ที่อุณหภูมิแตกต่างกัน 5 (30, 35, 40, 45 และ 50◦C) ที่ pH 7.0for 8 h และค่าดีอย่างหนึ่งสำหรับการผลิตไบโอเอทานอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เกณฑ์การค้นหาฐานข้อมูลเป็นอนุกรมวิธานการปรับเปลี่ยนคงยีสต์ carboxyamidomethylation ที่ cysteine​​ ตกค้างตัวแปรเปลี่ยน-การออกซิเดชันที่ตกค้าง methionine, missedcleavage สูงสุดที่อนุญาตของ 2, ความอดทน MS 100 พีพีเอ็มและ MS / MS TOLER-ance 0.1 ดา . เปปไทด์เฉพาะที่เกิดจากการย่อยสลาย trypsin wereconsidered.2.8 วิเคราะห์ procedureThe โปรตีนยีสต์รวมหลั่งเข้าไปในเต้นลูกปัด mediumfollowing ได้รับการพิจารณาผ่านทางแบรดฟอ assayusing ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน [25] จำนวน ofbio เอทานอลที่ผลิตเป็นผลมาจากการหมักเซลล์ฟรี wasmeasured ใช้สเปก UV-Vis (Sunil Eyela Co. , Ltd. , จีน) และชุดเอทานอล (ชีวภาพ Systems, เฮย์เวิร์ด, CA, USA), aspreviously อธิบาย [ 20] การกำจัดของกลูโคสจากน้ำซุป fermen-tation ถูกมั่นใจก่อนที่จะมีไบโอเอทานอล quantificationusing ชุดกำจัด saccharide (ชีวภาพ Systems, เฮย์เวิร์ด, CA, USA) [20] ความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคสในการหมัก brothwas กำหนดกับชุดทดสอบน้ำตาลกลูโคส (Sigma GAGO-20); ชุดทดสอบ anATP (ab83355) และ NAD + / NADH ชุดทดสอบ (ab65348) wereused เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของเอทีพีและ NAD + ในระบบเอนไซม์เซลล์ฟรี การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการที่เพิ่มขึ้นสามเท่า leastin และความแตกต่างระหว่างวิธีการที่ถูก consideredsignificant P ≤ 0.05.2.9 ความหนาแน่นของจุลชีววิทยา analysisThe ของเซลล์ยีสต์ถูกวัดโดยวิธีมาตรฐาน tr​​ypanblue ใช้ hemocytometer [26] จำนวนหน่วย colonyforming (CFU) ของยีสต์ถูกกำหนดใช้สื่อ YM selectivegrowth บนจานอาหารเลี้ยงเชื้อ โดยเฉพาะ ,: แผ่นถูก incu-ซึ้งน้อยลงที่30◦Cสามวันและอาณานิคมนับ [20] กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงในขณะนี้ A (JENMED, เยอรมนี) ถูกใช้ในการ INVES-tigate สัณฐานวิทยาของเซลล์ยีสต์ก่อนระหว่าง และ afterbead beating.2.10 FermentationFermentation ได้รับการดำเนินการโดยใช้เอนไซม์เซลล์ฟรีแก้ปัญหาน้ำตาลใน system.A บริสุทธิ์ถูกใช้เป็นสารตั้งต้นสำหรับเอนไซม์ yeastcell ฟรี system.2.10.1 การกำหนดอุณหภูมิที่เหมาะสม, ค่า pH, andglucose concentrationThe อุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับระบบเอนไซม์เซลล์ฟรี wasdetermined โดยบ่มผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย equalvolume ของการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์เซลล์ฟรี (3.13 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) และกลูโ​​คส Solu-การ (1%) ที่อุณหภูมิ 30, 40, 50, และ60◦Cกับความปั่นป่วน (150 รอบต่อนาที) เป็นเวลา 8 ชั่วโมงที่พีเอช 7.0 ความเข้มข้นสุดท้ายของเซลล์ freeenzymes ในผสมปฏิกิริยาแต่ละ 1.56 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ถัดไป 4 mMarsenate (Sigma 45587) ได้ถูกเพิ่มเข้าไปผสมปฏิกิริยา, andthe รวมเอทานอลไบโอผลิตที่อุณหภูมิต่างๆเป็นยับยั้ง-ขุดโดยใช้การตรวจสอบปริมาณเอทานอล kit.The ค่า pH ที่เหมาะสมสำหรับระบบการหมักเซลล์ฟรี wasdetermined โดยใช้สารละลายบัฟเฟอร์พีเอช ( Samchun ©เกาหลี) ค่าพีเอช ofdifferent (4.0-9.0) วิธีการแก้ปัญหาน้ำตาลกลูโคส (1%) และการแก้ปัญหามือถือฟรี (1.56 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) บ่มที่อุณหภูมิ40◦Cกับความปั่นป่วน (150 รอบต่อนาที) เป็นเวลา 8 ชั่วโมง ผสมปฏิกิริยาถูกประเมินแล้วสำหรับการผลิตไบโอเอทานอลในช่วงที่ค่า pH ต่าง ๆ โดยใช้ผลกระทบ assaykit.The ไบโอเอทานอลความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคสในการผลิตเอทานอล ofbio ถูกกำหนดโดยการวางน้ำหมัก Con-ในประเด็นความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคสที่แตกต่างกัน (1, 2 , 3, 4 และ 5%) และการแก้ไขปัญหา thecell ฟรี (1.56 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) แยก 5 มิลลิลิตรขวดแก้ว sealedwith หมวกยางและบ่มตัวอย่างที่40◦Cกับ agi-ช่อ (150 รอบต่อนาที) เป็นเวลา 8 ชั่วโมง . ในระหว่างการบ่มตัวอย่างจากน้ำ thefermentation ถูกเก็บรวบรวมทุกชั่วโมงและการวิเคราะห์การผลิตเอทานอลไบโอ fortotal และการแปลงโดยใช้กลูโคส assaykit.2.10.2 ผลของการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์เซลล์ฟรี concentrationThe ผลของการเพิ่มความเข้มข้นของเอนไซม์เซลล์ฟรีในการผลิตเอทานอล totalbio ได้รับการประเมินโดยใช้ 3% และ 5% glucosesolutions เป็นสารตั้งต้น สั้น ๆ เอนไซม์เซลล์ฟรี solutionwas เข้มข้นถึง 5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโดยใช้คอลัมน์หมุน 10 kD (ab93349) และเจือจางอนุกรมที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของเซลล์ freesolution (1, 2, 3, 4 และ 5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) มี เตรียมพร้อม ที่คล้ายกัน quantitiesof กลูโคสของแข็งถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละเซลล์ที่ปราศจากการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ (1 มิลลิลิตร) จะได้รับการผสมปฏิกิริยา; ขวดที่มี reactionmixture บ่มที่อุณหภูมิ 7.0 ค่า pH 8 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ40◦Cกับความปั่นป่วน (150 รอบต่อนาที) และตัวอย่างจากขวดปฏิกิริยาแต่ละถูกนำมาวิเคราะห์การผลิตเอทานอลไบโอ fortotal ใช้ทดสอบ kit.2.11 เปรียบเทียบของเซลล์ฟรีและ fermentationsystemsPellets ทั่วไปของเชื้อยีสต์ที่ได้จากความเร็วสูง centrifu-มาตรการ (3500 รอบต่อนาที) ของยีสต์ที่เตรียมสดใหม่วัฒนธรรมก่อน (50 มิลลิลิตร) เม็ดได้โดยเริ่มต้นที่ถูก resuspended แล้วในน้ำซุป YM (5 มิลลิลิตร) เพื่อ obtaina เชื้อยีสต์หนาแน่น วัฒนธรรมยีสต์หนาแน่นและเซลล์ freeenzymes ที่ได้รับจากปริมาณเดียวกันของวัฒนธรรมยีสต์หนาแน่นบ่ม werethen ด้วยโซลูชั่นที่ 1% glucose กับความปั่นป่วน (150 รอบต่อนาที) ที่ห้าอุณหภูมิที่แตกต่างกัน (30, 35, 40, 45, และ50◦C) ที่ ค่า pH 7.0for 8 ชั่วโมงและประเมินผลเปรียบเทียบสำหรับการผลิตไบโอเอทานอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เงื่อนไขการค้นหาฐานข้อมูลถูกอนุกรมวิธาน ยีสต์ดัดถาวร carboxyamidomethylation ซีสเตอีนตกค้างใน modifica tion , ตัวแปร , ปฏิกิริยาออกซิเดชันที่ยังมีตกค้าง เป็นสูงสุดที่อนุญาต missedcleavage 2 , MS มากกว่า 100 ppm และเป็น MS / MS toler ance 0.1 ดา . เพียงเปปไทด์ที่เกิดจากเอนไซม์ย่อยสลายมี 2.8 .วิเคราะห์ procedurethe รวมยีสต์โปรตีนที่หลั่งลงใน mediumfollowing ลูกปัดเต้นถูกกำหนดผ่านแบรดฟอร์ด assayusing อัลบูมินเป็นมาตรฐาน [ 25 ] ปริมาณเอทานอลที่ผลิต ofbio เป็นผลจากการหมักโดยใช้การสังเคราะห์วัด Spectrophotometer ( UV ) ซึ่ง Sunil eyela Co . , Ltd . , China ) และเอทานอล Kit ( ระบบไม่เฮย์เวิร์ด , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา )aspreviously อธิบาย [ 20 ] การกำจัดกลูโคสจาก fermen tation broth คือว่าก่อนที่จะเป็น ไบโอ เอทานอล quantificationusing สูงเอาชุด ( ระบบทดสอบเฮย์เวิร์ด , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) [ 20 ] ความเข้มข้นของกลูโคสในกระบวนการหมัก brothwas มุ่งมั่นกับกลูโคส 3 ชุด ( Sigma gago-20 )ชุดทดสอบ anatp ( ab83355 ) และ NAD / การต่อชุด ( ab65348 ) ทำการศึกษาความเข้มข้นของระบบเอนไซม์ในการสังเคราะห์ ATP size . การทดลองทั้งหมด มีการปฏิบัติอยู่ใน leastin ทำสำเนาสามฉบับ และความแตกต่างระหว่างหมายถึง consideredsignificant P ≤ 0.05.2.9 .ความหนาแน่น analysisthe จุลชีววิทยาของเซลล์ยีสต์จะถูกวัดโดยวิธีมาตรฐานไตรแพนบลูใช้ hemocytometer [ 26 ] จำนวน colonyforming หน่วย ( CFU ) ของยีสต์คือการพิจารณาการ selectivegrowth สื่อบนอาหารวุ้นแผ่น โดย : จานถูก incu ลด 30 ◦ C เป็นเวลา 3 วัน และอาณานิคมถูกนับ [ 20 ] . ( jenmed กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ,เยอรมนี ) คือใช้ในการ จัดการ tigate สัณฐานวิทยาของยีสต์เซลล์ก่อน ระหว่าง และ afterbead beating.2.10 . fermentationfermentation ได้ดําเนินการโดยใช้ระบบเอนไซม์กลูโคสบริสุทธิ์ การสังเคราะห์ การแก้ไขใช้เป็นฐานรองสำหรับ yeastcell ฟรีเอนไซม์ระบบ 2.10.1 . การหาค่าอุณหภูมิ พีเอชandglucose concentrationthe สูงสุดที่อุณหภูมิการสังเคราะห์เอนไซม์ทดสอบโดยการแช่ปฏิกิริยาผสมสารละลายเอนไซม์ที่ประกอบด้วยการ equalvolume การสังเคราะห์ ( 3.13 mg / ml และ solu tion ) กลูโคส ( 1% ) ที่อุณหภูมิ 30 , 40 , 50 และ 60 ◦ C ด้วยการกวน 150 รอบต่อนาที ) 8 H ที่ pH 7.0 . สุดท้าย freeenzymes ความเข้มข้นของเซลล์ในแต่ละปฏิกิริยาผสม 1.56 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ต่อไป4 mmarsenate ( Sigma 45587 ) คือการเพิ่มปฏิกิริยาไบโอเอทานอลที่ผลิตโดยส่วนผสมและอุณหภูมิต่างๆ ถูกยับยั้งไว้ใช้เอทานอล 3 ชุด พีเอชที่เหมาะสมสำหรับการสังเคราะห์และทดสอบการใช้โซลูชั่นระบบการหมัก pH buffer ( samchun สงวนลิขสิทธิ์ เกาหลี ) ส่วนค่า pH ( 4.0 – 9.0 ) สารละลายกลูโคส ( 1% ) และการสังเคราะห์สารละลาย ( 156 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส ◦การกวน 150 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 8 ชั่วโมง ปฏิกิริยาที่ผสมแล้วทำการผลิตเอทานอลชีวภาพต่าง ๆ โดยใช้ไบโอเอทานอลช่วง pH assaykit ผลของความเข้มข้นของกลูโคสในการผลิตเอทานอล ofbio ถูกกำหนดโดยการวางน้ำหมัก con TAINING กลูโคสมีปริมาณที่แตกต่างกัน ( 1 , 2 , 3 , 4 , และ 5 เปอร์เซ็นต์ ) และโซลูชั่นฟรี thecell ( 156 mg / ml ) ในขวดแก้ว 5-ml แยก sealedwith หมวกยางและการแช่ตัวอย่างที่ 40 ◦ C กับ AGI tation ( 150 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 8 ชั่วโมงในระหว่างการบ่มตัวอย่างจากน้ำซุป thefermentation รวบรวมทุกชั่วโมง และวิเคราะห์ fortotal ไบโอเอทานอลและการผลิตกลูโคสโดยใช้การแปลง assaykit . 2.10.2 .ผลของการสังเคราะห์สารละลายเอนไซม์ concentrationthe ผลของการสังเคราะห์เอนไซม์เพิ่มความเข้มข้นในการผลิตเอทานอล totalbio ถูกประเมินโดยใช้ 3 % และ 5 % glucosesolutions เป็นสับสเตรท สั้น ๆ , การสังเคราะห์เอนไซม์ solutionwas ความเข้มข้น 5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโดยใช้ 10 กิโลปั่นคอลัมน์ ( ab93349 ) และซีเรียลเจือจางที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของเซลล์ freesolution ( 1 , 2 , 3 , 4 ,และ 5 mg / ml ) เตรียมไว้แล้ว ที่คล้ายกัน quantitiesof แข็งเพิ่มการสังเคราะห์กลูโคสในสารละลายเอนไซม์ ( 1 มล. ) เพื่อให้ได้ปฏิกิริยาผสม ; หลอดที่มี reactionmixture อุณหภูมิ pH 7.0 สำหรับ 8 ชั่วโมง 40 ◦ C ด้วยการกวน 150 รอบต่อนาที ) และตัวอย่างจากแต่ละปฏิกิริยาขวดวิเคราะห์ fortotal ชีวภาพการผลิตเอทานอลโดยใช้วิธี kit.2.11 .การเปรียบเทียบการสังเคราะห์ และปกติ fermentationsystemspellets วัฒนธรรมยีสต์ที่ได้จาก gation centrifu ความเร็วสูง ( 3500 รอบต่อนาที ) ของเตรียมสดยีสต์ก่อนวัฒนธรรม ( 50 ml ) เม็ดแล้ว resuspended ใน broth ) ( 5 ml ) obtaina หนาแน่นยีสต์วัฒนธรรมยีสต์วัฒนธรรมนี้หนาแน่นและเซลล์ freeenzymes ได้จากปริมาณเดียวกันของวัฒนธรรมมาบ่มยีสต์หนาแน่นด้วย 1% สารละลายน้ำตาลกลูโคสด้วยการกวน 150 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิที่แตกต่างกัน ( 5 ) 30 , 35 , 40 , 45 และ 50 ◦ C ) ที่ pH 7.0for 8 H และเปรียบเทียบการประเมินการผลิตเอทานอลชีวภาพ