2.4. Production of a basic cell lys

2.4. Production of a basic cell lysate
Using the reporter assays as indicators, a basic method for lysate
production comprising only the most necessary processing steps
was established (experiments 1e3, Fig. 1). This method was
modified (Table A.1) to test the influence of single experimental
parameters on enzymatic activities, which were assessed using the
target analyte assay.
Ultrasonication (physical disruption) was applied as a standard
method for the disruption of microbial cells from activated sludge.
Cell lysiswas performed with a sonication microtip (Bandelin MS73
connected to ultrasonic transducer HD3100) at 10 mm immersion
depth in 50 mL tubes filled with 25 mL of concentrated sludge
(~19 gTSS L
1 in HN-buffer). Sonicationwas applied to the ice cooled
samples with a power density of 1 W/mL for 10 min (net) in intervals
of 15 s with 15 s breaks to avoid sample heating.
Cell debris was removed by centrifugation for 20 min at
14,000 rpm, 4 C (Sigma 3K30, rotor 19776-H) and the supernatant,
i.e. the crude cell lysate, was then filtered through 0.2 mm syringe
filters (Whatman 25 mm GD/X polyethersulfone (PES) membrane
with glass microfiber prefilter) to remove residual cells or cell
debris. The resulting cell-free lysate (in HN-buffer) was kept on ice
at all times and analyzed the same day.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การผลิตของเซลล์พื้นฐาน lysate ของใช้ assays ข่าวเป็นตัวชี้วัด วิธีการพื้นฐานสำหรับ lysate ของผลิตประกอบเฉพาะตอนประมวลผลจำเป็นมากที่สุดก่อตั้งขึ้น (ทดลอง 1e3 รูปที่ 1) วิธีนี้ได้แก้ไข (ตาราง A.1) การทดสอบอิทธิพลของเดียวทดลองพารามิเตอร์กิจกรรมเอนไซม์ ซึ่งถูกประเมินโดยใช้การเป้าหมาย analyte ทดสอบUltrasonication (ทรัพยทางกายภาพ) ถูกนำไปใช้เป็นมาตรฐานวิธีการหยุดชะงักของเซลล์จุลินทรีย์จากการเปิดใช้งานเซลล์ lysiswas กับ microtip sonication (Bandelin MS73เชื่อมต่อกับพิกัดอัลตราโซนิ HD3100) ที่แช่ 10 มม.ความลึกในหลอดขนาด 50 มล.ที่เต็มไป ด้วยตะกอนเข้มข้น 25 mL(~ 19 gTSS L 1 ในบัฟเฟอร์ HN) Sonicationwas ที่ใช้ระบายความร้อนด้วยน้ำแข็งตัวอย่างที่มีความหนาแน่นของพลังงานของ 1 W/mL สำหรับ 10 นาที (สุทธิ) ในช่วง15 s กับ s ตัวแบ่ง 15 เพื่อหลีกเลี่ยงความร้อนอย่างนี้เศษเซลล์ออกไปหมุนเหวี่ยงสำหรับ 20 นาทีที่14,000 รอบต่อนาที 4 C (ซิกม่า 3K 30 ใบพัด 19776-H) และ supernatantเช่นเซลล์ดิบ lysate ของ แล้วถูกกรองผ่านเข็ม 0.2 mmตัวกรอง (Whatman 25 มม. GD / X polyethersulfone (PES) เยื่อมีชุดกรองแก้วไมโครไฟเบอร์) การลบตกค้างเซลล์หรือเซลล์เศษ เกิดฟรีเซลล์ lysate ของ (ในบัฟเฟอร์ HN) ถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งตลอดเวลา และวิเคราะห์ในวันเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การผลิตของ lysate มือถือขั้นพื้นฐาน
โดยใช้ชุดตรวจนักข่าวเป็นตัวชี้วัดซึ่งเป็นวิธีการขั้นพื้นฐานสำหรับ lysate
ผลิตประกอบเพียงขั้นตอนการประมวลผลที่จำเป็นที่สุด
ก่อตั้งขึ้น (ทดลอง 1e3 มะเดื่อ. 1) วิธีการนี้ได้รับ
การแก้ไข (ตาราง A.1) เพื่อทดสอบอิทธิพลของการทดลองเดียว
พารามิเตอร์เกี่ยวกับกิจกรรมของเอนไซม์ซึ่งได้รับการประเมินโดยใช้
การทดสอบวิเคราะห์เป้าหมาย.
Ultrasonication (การหยุดชะงักทางกายภาพ) ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐาน
วิธีการสำหรับการหยุดชะงักของเซลล์จุลินทรีย์จากการเปิดใช้งาน กากตะกอน.
มือถือ lysiswas ดำเนินการกับ sonication microtip (Bandelin MS73
เชื่อมต่อกับ transducer ล้ำ HD3100) อยู่ที่ 10 มมแช่
ลึกในหลอด 50 มลเต็มไปด้วย 25 มลตะกอนเข้มข้น
(~ 19 gTSS L? 1 ใน HN บัฟเฟอร์) Sonicationwas นำไปใช้กับน้ำแข็งเย็น
ตัวอย่างที่มีความหนาแน่นของพลังงานของ 1 W / มิลลิลิตรเป็นเวลา 10 นาที (สุทธิ) ในช่วงเวลา
15 S กับแบ่ง 15 วินาทีเพื่อหลีกเลี่ยงความร้อนตัวอย่าง.
เศษเซลล์ถูกลบออกโดยการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 20 นาทีที่
14,000 รอบต่อนาที 4 ? C (Sigma 3K30 ใบพัด 19776-H) และสารละลายที่
เช่น lysate เซลล์น้ำมันดิบถูกกรองแล้วผ่านเข็มฉีดยา 0.2 มม
ฟิลเตอร์ (Whatman 25 มม GD / X polyethersulfone (PES) เมมเบรน
กับแก้วไมโครไฟเบอร์ Prefilter) เพื่อขจัดเซลล์ที่เหลือ หรือเซลล์
เศษ lysate ปราศจากเซลล์ที่เกิด (HN ในบัฟเฟอร์) ถูกเก็บไว้บนน้ำแข็ง
ตลอดเวลาและการวิเคราะห์ในวันเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การผลิตของ lysate เซลล์พื้นฐานใช้นักข่าว ) เป็นตัวบ่งชี้ วิธีพื้นฐานสำหรับ lysateการผลิตประกอบด้วยกระบวนการสำคัญที่สุดเท่านั้นก่อตั้ง ( การทดลอง 1e3 , ฟิค 1 ) วิธีนี้คือการแก้ไข ( ตาราง a.1 ) เพื่อทดสอบอิทธิพลของเดี่ยวทดลองค่ากิจกรรมเอนไซม์ ซึ่งจะถูกประเมินโดยใช้โดยครูเป้าultrasonication ( หยุดชะงักทางกายภาพ ) คือใช้เป็นมาตรฐานวิธีการสำหรับการหยุดชะงักของจุลินทรีย์เซลล์จากกากตะกอนน้ำเสีย .เซลล์ lysiswas ดำเนินการกับ sonication microtip ( bandelin ms73Ultrasonic Transducer ) ที่เชื่อมต่อกับ hd3100 แช่ 10 มม.ความลึก 50 ml หลอดเต็มไปด้วย 25 มล. ความเข้มข้นตะกอน( ~ 19 gtss L1 HN ในบัฟเฟอร์ ) sonicationwas ใช้น้ำแข็งเย็นตัวอย่างที่มีความหนาแน่นพลังงานของ W 1 เป็นเวลา 10 นาที ( สุทธิ ) ในช่วง15 ของ 15 s แบ่งเพื่อหลีกเลี่ยงการใช้ความร้อนเศษเซลล์จะถูกลบออกโดยการปั่นเหวี่ยงสำหรับ 20 นาทีที่14 , 000 รอบต่อนาที 4 C ( Sigma 3k30 , ใบพัด และนำ 19776-h ) ,คือน้ำมันดิบเซลล์ lysate จากนั้นกรองผ่าน , 0.2 มิลลิเมตร เข็มฉีดยาตัวกรอง ( whatman 25 มม. GD / X ( PES ) แผ่นโพลี เทอร์ซัลโฟนกับ prefilter ไมโครแก้ว ) ลบเซลล์ที่ตกค้างหรือเซลล์เศษเล็กเศษน้อย ผลการสังเคราะห์ lysate ( HN บัฟเฟอร์ ) ที่ถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งตลอดเวลา และวิเคราะห์ ในวันเดียวกัน