(B) Repeated recloning of P29 subcl

(B) Repeated recloning of P29 subclones to select the subclone with the highest proportion of T15091C mtDNA. A subclone P29-22 with 22% T15091C mtDNA was cultivated for 2 months to allow its stochastic segregation. From this clone, we obtained 34 subclones; the one with the most prevalent T15091C mtDNA possessed 34% T15091C mtDNA. After four more rounds of subcloning, we isolated five P29 subclones with more than 95% T15091C mtDNA, and one of them was used as
P29-95. (C) Identification and quantification of T15091C mtDNA with an additional G9976A mutation in the ND4L gene in subclone P29-95 by BstNI digestion of the PCR products.
The mtDNA without the G9976A mutation produced 108-bp and 32-bp fragments owing to the presence of the BstNI site, whereas mtDNA with the G99976A mutation produced a
140-bp fragment owing to the loss of the BstNI site by mutation. About 55% of T15091C mtDNA possessed the additional G9976A mutation, whereas mtDNA without the T15091C
mutation did not possess the G9976A mutation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

(ข) subclones recloning P29 ซ้ำเพื่อเลือก subclone สัดส่วนสูงสุดของ T15091C mtDNA Subclone P29-22 กับ mtDNA T15091C 22 ถูกปลูกมา 2 เดือนให้แบ่งแยกของสโทแคสติก จากโคลนนี้ เราได้รับ 34 subclones หนึ่งกับ mtDNA T15091C แพร่หลายมากที่สุดต้อง mtDNA 34% T15091C หลังจากสี่เพิ่มเติมรอบที่ subcloning เราแยกต่างหากห้า P29 subclones มากกว่า 95% T15091C mtDNA และหนึ่งของพวกเขาถูกใช้เป็นP29-95 (ค) รหัสและนับของ mtDNA T15091C กับการกลายพันธุ์ G9976A เพิ่มเติมในยีน ND4L ใน subclone P29-95 โดยย่อยอาหาร BstNI ของผลิตภัณฑ์ PCRMtDNA โดยไม่มีการกลายพันธุ์ G9976A 108-bp และ 32 bp ชิ้นส่วนเนื่องจากสถานะการออนไลน์ของเว็บไซต์ BstNI ผลิตขณะผลิต mtDNA มีการกลายพันธุ์ G99976A การส่วน 140 bp เพราะสูญเสียของเว็บไซต์ BstNI โดยการกลายพันธุ์ ประมาณ 55% ของ T15091C mtDNA ต้องมีการกลายพันธุ์ G9976A เพิ่มเติม ในขณะที่ mtDNA โดย T15091Cการกลายพันธุ์ไม่มีการกลายพันธุ์ G9976A

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

(B) ซ้ำ recloning ของ subclones P29 เพื่อเลือก subclone ที่มีสัดส่วนสูงสุดของ mtDNA T15091C P29-22 subclone กับ 22% mtDNA T15091C ได้รับการปลูกฝังเป็นเวลา 2 เดือนเพื่อให้การสุ่มของการแยกจากกัน จากโคลนนี้เราได้รับ 34 subclones; หนึ่งกับ T15091C ที่แพร่หลายมากที่สุด mtDNA ครอบครอง 34% mtDNA T15091C หลังจากสี่รอบมากขึ้นของ subcloning เราแยกห้า P29 subclones ที่มีมากกว่า 95% T15091C mtDNA และหนึ่งของพวกเขาถูกใช้เป็น
P29-95 (C) การจำแนกชนิดและปริมาณของ T15091C mtDNA กับการกลายพันธุ์ G9976A เพิ่มเติมในยีน ND4L ใน subclone P29-95 โดยการย่อยอาหาร BstNI ของผลิตภัณฑ์ PCR.
mtDNA โดยไม่มีการกลายพันธุ์ G9976A ผลิตชิ้นส่วน 108 bp และ 32 bp เนื่องจากการปรากฏตัว เว็บไซต์ BstNI ขณะ mtDNA กับการกลายพันธุ์ที่ผลิต G99976A
ส่วน 140 bp เนื่องจากการสูญเสียของเว็บไซต์ BstNI โดยการกลายพันธุ์ ประมาณ 55% ของ T15091C mtDNA มีการกลายพันธุ์ G9976A เพิ่มเติมในขณะที่โดยไม่ต้อง mtDNA T15091C
กลายพันธุ์ไม่ได้มีการกลายพันธุ์ G9976A

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

( ข ) recloning ซ้ำของ p29 ระดับสายพันธุ์บริสุทธิ์เพื่อเลือก subclone มีสัดส่วนที่สูงที่สุดของ t15091c แสดง . เป็น p29-22 subclone 22 % t15091c แสดงเมื่อเลี้ยงเป็นเวลา 2 เดือนเพื่อให้สุ่มแยก . จากโคลนนี้เราได้รับ 34 ระดับสายพันธุ์บริสุทธิ์ ; หนึ่งที่มีแพร่หลายมากที่สุดซึ่งแสดง t15091c 34 % t15091c แสดง . หลังจาการอีก 4 รอบ ,เราแยกห้า p29 ระดับสายพันธุ์บริสุทธิ์ที่มีมากกว่า 95% t15091c แสดง และหนึ่งของพวกเขาถูกใช้เป็น
p29-95 . ( ค ) การระบุและปริมาณของ t15091c แสดงด้วยอีก g9976a การกลายพันธุ์ในยีน nd4l ใน subclone p29-95 โดย bstni การย่อยอาหารของผลิตภัณฑ์ PCR
แสดงโดยไม่ g9976a การกลายพันธุ์ที่ 108 ของ BP และ 32 BP เศษเนื่องจากการแสดงตนของ bstni เว็บไซต์ในขณะที่แสดงกับ g99976a การกลายพันธุ์ผลิต
140 BP เช่นกันเนื่องจากการสูญเสียของเว็บไซต์ bstni โดยการกลายพันธุ์ ประมาณ 55% ของ t15091c แสดงมีการกลายพันธุ์ g9976a เพิ่มเติม ในขณะที่แสดงโดยไม่ t15091c
มิวไม่ได้มี g9976a กลายพันธุ์