Determining the Sensitivity of the

Determining the Sensitivity of the LAMPAssay
The sensitivity of the LAMP assay was evaluated on the basis of pork genomic DNA that was serially diluted to final
concentrations ranging from 50 to 5×10−7 ng/μL. Each reaction
contained 1 μL of diluted DNA sample as a template. The
detection limit of the LAMP assay for pork DNA was found to
be 0.5 pg/reaction (Fig. 3).
We then mixed pork DNA into beef or mutton DNA to
produce nominal concentrations of 50, 10, 1, 0.1, 0.01, and
0 % to mimic meat adulteration. A total of 50 ng of genomic
DNAwas used in each reaction, and a mixture of 0.01 % pork
in beef could be detected (Fig. 4). The same result was found
for pork adulteration in mutton (data not shown).
Compared with other previous studies, this limit of detection
represents greater sensitivity than Karabasanavar’s 10 pg
(Karabasanavar et al. 2014) detected via species-specific PCR
and is similar to Martin’s (Martin et al. 2009) real-time PCR
method, which had a detection limit of 0.1 pg. Real-time PCR
is now recognized as the most sensitive method to detect
nucleic acid molecules, and our LAMP assay has a similar
sensitivity. Furthermore, we can detect 0.01 % pork in adulterated
sample mixtures, equivalent to 0.1 g of pork adulteration
in 1 kg of meat. The sensitivity was thereby satisfactory in
detecting adulterated meat.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การกำหนดความไวของการ LAMPAssayรับการประเมินความไวของโคมที่ถกหมูออกดีเอ็นเอที่ถูกเจือจาง serially ไปสุดท้ายความเข้มข้นตั้งแต่ 50 ถึง 5 × 10−7 ng/μL แต่ละปฏิกิริยามีอยู่ 1 μL การเจือจางตัวอย่าง DNA เป็นแม่แบบ การขีดจำกัดการตรวจจับของโคมสำหรับหมูพบว่าดีเอ็นเอเป็น 0.5 pg/ปฏิกิริยา (3 รูป)เราแล้วผสมดีเอ็นเอของหมูเป็นเนื้อวัวหรือเนื้อแกะดีเอ็นเออัตราความเข้มข้นของ 50, 10, 1, 0.1, 0.01 ผลิต และ0% เพื่อเลียนแบบเนื้อสัตว์แจ๊ก จำนวน 50 ฉบับของออกDNAwas ที่ใช้ในแต่ละปฏิกิริยา และส่วนผสมของหมู 0.01%ในเนื้ออาจตรวจพบ (4 รูป) พบผลลัพธ์เดียวกันสำหรับแจ๊กหมูในเนื้อแกะ (ไม่แสดงข้อมูล)เมื่อเทียบกับการศึกษาอื่น ๆ ก่อนหน้า ขีดจำกัดของการตรวจสอบนี้แสดงความไวมากขึ้นกว่าของ Karabasanavar 10 pg(Karabasanavar et al. 2014) ตรวจพบผ่านสาย PCRและของที่คล้ายกับมาร์ติน (Martin et al. 2009) แบบเรียลไทม์ PCRวิธี ซึ่งมีขีดจำกัดการตรวจจับของ 0.1 pg.แบบ Real-time PCRตอนนี้รู้จักเป็นวิธีการสำคัญที่สุดในการตรวจสอบโมเลกุลของกรดนิวคลีอิก โคมของเรามีคล้ายกันความไวแสง นอกจากนี้ เราสามารถตรวจพบหมู 0.01% ในเจือปนส่วนผสมตัวอย่าง เทียบเท่ากับ 0.1 กรัมของแจ๊กหมูในเนื้อสัตว์ 1 กิโลกรัม ความไวแสงได้จึงพึงพอใจในตรวจสอบปลอมปนเนื้อสัตว์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การกำหนดความไวของ LAMPAssay
ความไวของการทดสอบโคมไฟได้รับการประเมินบนพื้นฐานของหมูดีเอ็นเอที่ถูกปรับลดเป็นลำดับสุดท้าย
ความเข้มข้นตั้งแต่ 50-5 × 10-7 ng / ไมโครลิตร แต่ละปฏิกิริยา
ที่มีอยู่ 1 ไมโครลิตรของตัวอย่างดีเอ็นเอเจือจางเป็นแม่แบบ
ขีด จำกัด ของการตรวจสอบของการทดสอบโคมไฟสำหรับดีเอ็นเอหมูพบว่า
0.5 PG / ปฏิกิริยา (รูปที่. 3).
เราดีเอ็นเอหมูแล้วผสมลงในเนื้อวัวเนื้อแกะดีเอ็นเอเพื่อ
ผลิตความเข้มข้นเล็กน้อยจาก 50, 10, 1, 0.1, 0.01, และ
0% ที่จะเลียนแบบการปลอมปนเนื้อสัตว์ จำนวน 50 NG ของจีโนม
DNAwas ใช้ในแต่ละปฏิกิริยาและมีส่วนผสมของเนื้อหมูที่ 0.01%
ในเนื้อสามารถตรวจพบได้ (รูปที่. 4) ผลเดียวกันก็พบว่า
สำหรับการปลอมปนเนื้อหมูในเนื้อแกะ (ไม่ได้แสดงข้อมูล).
เมื่อเทียบกับการศึกษาก่อนหน้าอื่น ๆ ขีด จำกัด ของการตรวจสอบนี้
แสดงให้เห็นถึงความไวมากขึ้นกว่า Karabasanavar 10 PG
(Karabasanavar et al. 2014) ตรวจพบผ่านทางสายพันธุ์เฉพาะ PCR
และมีลักษณะคล้ายกับ มาร์ติน (มาร์ติ et al. 2009) Real-time PCR
วิธีการซึ่งมีการตรวจสอบวงเงิน 0.1 PG Real Time-PCR
ได้รับการยอมรับในขณะนี้เป็นวิธีที่สำคัญที่สุดในการตรวจสอบ
โมเลกุลของกรดนิวคลีอิกและทดสอบโคมไฟของเรามีความคล้ายกัน
ไว นอกจากนี้เราสามารถตรวจจับหมู% 0.01 ในปลอมปน
ผสมตัวอย่างคิดเป็น 0.1 กรัมปลอมปนเนื้อหมู
ใน 1 กิโลกรัมของเนื้อสัตว์ ความไวเป็นที่น่าพอใจดังนั้นใน
การตรวจสอบการปลอมปนเนื้อสัตว์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกำหนดความไวของ lampassayความไวของโคมไฟโดยประเมินบนพื้นฐานของหมู genomic DNA ที่เป็นเจือจางสุดท้ายความเข้มข้นตั้งแต่ 50 ถึง 5 × 10 − 7 ng / μ L แต่ละปฏิกิริยามี 1 μล. เจือจางตัวอย่าง DNA เป็นแม่แบบ ที่ขีดจำกัดของโคมไฟ assay พบดีเอ็นเอหมูเป็น 0.5 pg / ปฏิกิริยา ( รูปที่ 3 )เราก็ผสมดีเอ็นเอหมูในเนื้อวัวหรือเนื้อแกะดีเอ็นเอผลิตตราสารของความเข้มข้น 50 , 10 , 1 , 0.1 , 0.01 , และ0 % เพื่อเลียนแบบการปลอมปนเนื้อสัตว์ ทั้งหมด 50 ng ของจีโนมdnawas ใช้ในแต่ละปฏิกิริยา และส่วนผสมของ 0.01 % หมูในเนื้ออาจจะตรวจพบ ( รูปที่ 4 ) ผลพบว่าหมูเจือปนในเนื้อแกะ ( ข้อมูลไม่แสดง )เมื่อเปรียบเทียบกับการศึกษาอื่น ๆ นี้ จำกัด ของการตรวจสอบหมายถึงความไวมากกว่า karabasanavar 10 pg( karabasanavar et al . 2014 ) ตรวจพบเชื้อโดยเฉพาะ - ขยายพันธุ์และมีลักษณะคล้ายกับมาร์ติน ( Martin et al . 2009 ) PCR แบบเรียลไทม์วิธีซึ่งมีขีดจำกัดของ 0.1 PG เวลา PCR จริงขณะนี้ได้รับการยอมรับว่าเป็นวิธีที่ไวที่สุด เพื่อตรวจหาโมเลกุลของกรดนิวคลีอิก และ การทดสอบ โคมไฟของเรามีคล้ายความไว นอกจากนี้ เรายังสามารถตรวจสอบ 0.01% ปลอมปนในหมูผสมตัวอย่างเท่ากับ 0.1 กรัมของการปลอมปน หมูใน 1 กิโลกรัม เนื้อ ความไวและงบในการตรวจสอบการปลอมปนเนื้อสัตว์