Lipid and fatty acid (FA) extractio

Lipid and fatty acid (FA) extraction. Approximately 1x1011 L. plantanuni cells grown in MRs (with or without 8% [vol/vol] ethanol) until reaching an 0D600 of 1.0 at 20๐C were collected by centrifugation (15.300 x g for 10 min at 23๐C) washed with phosphate buffered saline(PBS), pH 7.4. Cell walls were degraded using 0.05 g. ml-1 lysozyme (Merck, Darmstadt, Germany) and 250 units. ml-1 mutanolysin (Signa Aldrich, St. Louis, MO) in 100 mM K2HPO4 batter (pH) under agitation at 10 rpm for 3 h at 44๐C (RPN251 E hybrid- izathon oven/shaker: Amersham Phammacia Biotech, Little Chalfont. United kingdon). The cells were collected by centrifugation at 4,000 x g for 10 min at 23๐C, and the cell membranes were harvested by dissolving the pellets thoroughly in 3 ml diethyl ether -heptane (1:1) acidified with 2.5 M sulfuric acid, Following centrifugation at 500 x g for 5 min at 23๐ C, the upper organic phase was collected or total fatty acid methyl ester(FAME) analysis. FAMEs were generated and analyzed according to the method of Badings and Dejog (3). A gas chromatograph (GC) (Mega sulni Carlo Erba, Milan,Italy) with flame ionization detection (FID) and on-column injector was used to separate the FAMEs. The GC column (WCOT fused silica with stationary-phase CP-Wax 52 CB Varian. The Netherlands) contained hydrogen as a carrier gas and was 15 m in length, with an inside diameter of n 32 mm and a film thickness of 0.50 um. Data were analyzed with EZChrom Elite. version 3.1.4(Agilent Technologies, Santa Clara, CA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไขมันและกรดไขมัน (FA) สกัด ประมาณ 1 x 1011 L. plantanuni เซลล์ปลูกใน MRs (มี หรือไม่ มีเอทานอล [vol/vol] 8%) จนกว่าจะถึง 0D 600 1.0 ที่ 20๐ C ถูกรวบรวม โดยการหมุนเหวี่ยง (15.300 x g 10 นาทีที่ 23๐ C) ล้าง ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ saline(PBS), pH 7.4 ผนังเซลล์ที่เสื่อมโทรมใช้ 0.05 lysozyme ml-1 g. (Merck ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) และ 250 หน่วย มล.-1 mutanolysin (Aldrich เลิศ เซนต์หลุยส์ MO) ในแป้ง 100 mM K2HPO4 (pH) ภายใต้ความปั่นป่วนที่ 10 rpm สำหรับ 3 ชม.ที่ 44๐ C (RPN251 E ไฮบริ izathon เตาอบ/ปั่น: เทคโนโลยีชีวภาพ Phammacia Amersham ชาร์ฟอร์นเซนน้อย สหอาณาจักรอ) เซลล์ถูกจัดเก็บ โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4,000 x g 10 นาทีที่ 23๐ C และเยื่อหุ้มเซลล์ถูกเก็บเกี่ยว โดยละลายเม็ดละเอียดในอีเทอร์ diethyl 3 ml-heptane (1:1) กรด ด้วยกรดกำมะถัน 2.5 M ต่อหมุนเหวี่ยงที่ 500 x g ที่ 23๐ C 5 นาที ระยะอินทรีย์บนถูกรวบรวม หรือรวมกรดไขมันเมทิล ester(FAME) วิเคราะห์ FAMEs ถูกสร้างขึ้น และวิเคราะห์ตามวิธีการของ Badings และ Dejog (3) Chromatograph เป็นก๊าซ (GC) (Mega sulni Carlo Erba มิลาน อิตาลี) กับตรวจจับไอออไนซ์ (FID) ที่เปลวไฟ และใช้หัวฉีดในคอลัมน์ FAMEs ที่แยก คอลัมน์ GC (WCOT ครอบฟันด้วยทั่วซิลิกากับ Varian CB เฟสเขียนขี้ผึ้ง CP 52 เนเธอร์แลนด์) ประกอบด้วยไฮโดรเจนเป็นก๊าซผู้ขนส่ง และ 15 เมตรความยาว มีเส้นผ่าศูนย์กลาง 32 มม. n และฟิล์มหนา 0.50 อืมม มีวิเคราะห์ข้อมูลกับ EZChrom Elite รุ่นซานตาคลารา CA, 3.1.4(Agilent เทคโนโลยี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไขมันและกรดไขมัน (เอฟเอ) สกัด ประมาณ 1x1011 ลิตร plantanuni เซลล์ที่ปลูกใน MRs (มีหรือไม่มี 8% [ปริมาตร / ปริมาตร] เอทานอล) จนกระทั่งถึง 0D600 1.0 ที่ 200C ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (15.300 XG 10 นาทีที่ 230C) ล้างด้วยน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส ) ค่า pH 7.4 ผนังเซลล์ถูกย่อยสลายโดยใช้ 0.05 กรัม ML-1 ไลโซไซม์ (เมอร์ค, ดาร์มสตัด, เยอรมนี) และ 250 หน่วย ML-1 mutanolysin (Signa ดิช, St. Louis, มิสซูรี) ใน 100 มิลลิเมตร K2HPO4 แป้ง (pH) ภายใต้การกวนที่ 10 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 440C (RPN251 E hybrid- เตาอบ izathon / ปั่น:. Amersham Phammacia ไบโอเทคเล็ก ๆ น้อย ๆ Chalfont ประเทศ Kingdon) เซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4,000 XG 10 นาทีที่ 230C และเยื่อหุ้มเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการละลายเม็ดอย่างทั่วถึงใน 3 มล diethyl -heptane อีเทอร์ (1: 1) กรด 2.5 ล้านกรดกำมะถันดังต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยงที่ 500 XG เวลา 5 นาทีที่ 230 C, เฟสอินทรีย์บนถูกเก็บรวบรวมทั้งหมดหรือกรดไขมันเมทิลเอสเตอร์ (FAME) การวิเคราะห์ FAMEs ถูกสร้างและวิเคราะห์ตามวิธีการของ Badings และ Dejog นี้ (3) gas chromatograph ที่ (GC) (เมกะ sulni Carlo Erba, มิลาน, อิตาลี) มีการตรวจสอบไฟไอออนไนซ์ (FID) และคอลัมน์หัวฉีดถูกใช้ในการแยก FAMEs คอลัมน์ GC (WCOT ผสมซิลิกานิ่งเฟส CP-หุ่นขี้ผึ้ง 52 CB Varian. เนเธอร์แลนด์) ที่มีไฮโดรเจนเป็นก๊าซและเป็น 15 เมตรยาวมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางภายในของ N 32 มิลลิเมตรและความหนาของฟิล์ม 0.50 หนอ วิเคราะห์ข้อมูลด้วย EZChrom ยอด เวอร์ชัน 3.1.4 (Agilent Technologies, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไขมัน และกรดไขมัน ( เอฟเอ ) ในการสกัด ประมาณ 1x1011 L . plantanuni เซลล์ปลูกคุณนาย ( มีหรือไม่มี 8 % [ Vol / Vol ] เอทานอล ) จนไปถึงการ 0d600 1.0 ที่ 20 ๐ C มีจำนวนดังนี้ ( 15.300 x G สำหรับ 10 นาทีที่ 23 ๐ C ) การล้างด้วยน้ำเกลือ ( PBS ) , ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4 . ผนังเซลล์ถูกสลายใช้ 0.05 กรัมแน่นอนไลโซไซม์ ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) และ 250 หน่วย แน่นอน mutanolysin ( ซิกน่า อัลดริช เซนต์ หลุยส์ โม ) ในแป้ง k2hpo4 100 มิลลิเมตร ( pH ) ภายใต้ความปั่นป่วนที่ 10 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 ชั่วโมง 44 ๐ C ( rpn251 E ไฮบริด - izathon เตาอบ / Shaker : ชาม phammacia ชีวภาพน้อยริดสีดวงทวาร . ของคิงเดิ่น ) เซลล์มีจำนวน 3 4000 x G สำหรับ 10 นาทีที่ 23 ๐ C และเยื่อหุ้มเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดยละลายเม็ดละเอียดใน 3 อีเทอร์ - เฮปเทนไดมิลลิลิตร ( 1 : 1 ) ปรับ 2.5 M กรดซัลฟูริก , ต่อไปนี้ 3 500 x G สำหรับ 5 นาทีที่ 23 ๐ C ระยะอินทรีย์บน รวบรวมหรือรวมกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ ( ชื่อเสียง ) การวิเคราะห์ ดีถูกสร้างขึ้น และวิเคราะห์ข้อมูลตามวิธีการของ badings dejog และ ( 3 ) แก๊สโครมาโตกราฟ ( GC ) ( Mega sulni คาร์โลมา , มิลาน , อิตาลี ) กับการตรวจหาไอเปลว ( FID ) และบนหัวคอลัมน์ที่ใช้เพื่อแยกสาร . GC คอลัมน์ซิลิกา ( wcot หยุดนิ่งระยะ CP ขี้ผึ้ง 52 CB เครื่อง . เนเธอร์แลนด์ ) ประกอบด้วย ไฮโดรเจนเป็นผู้ให้บริการก๊าซและ 15 เมตรในความยาว มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางภายในของ 32 มม. และความหนาของฟิล์ม 0.50 . . . วิเคราะห์ข้อมูลด้วย ezchrom ชั้นยอด รุ่น 3.1.4 ( Agilent Technologies , ซานตา คลาร่า , แคลิฟอร์เนีย )