DNA was extracted from Campylobacte

DNA was extracted from Campylobacter enrichment broth after
the enrichment step by using Genomic DNA purification kit
(Fermentas).
The target genes for the identification of Campylobacter spp., C.
jejuni and C. coli were 16S rRNA (Linton, Lawson, Owen, & Stanley,
1997), mapA (Stucki, Joachim, Nicolet, & Burnens, 1995) and ceuE
respectively. The sequences of primers used for genes amplification
are indicated in Table 1.
The PCR conditions used in this study have been previously
described by Denis et al. (1999). Amplification reactions were
performed in a 50 ll mixture containing 1 U Taq polymerase (Roche
Applied Science), 100 lmol 11 of each dNTP, 0.1 lmol 11 of
MD16S1 and MD16S2 primers, and 0.42 lmol 11 of MDmapAl,
MDmapA2, COL3 and MDCOL2 primers in Fermentase buffer.
Amplification reactions were carried out using a DNA thermocycler
(Master Cycler Gradiant, Eppendurf, Germany) as following:
Ten min at 95 C, 35 cycles each consisting of 30 s at 95 C, 90 s at
59 C, 1 min at 72 C and a final extension step of 10 min at 72 C.
Amplification generated 857 bp, 589 bp and 462 bp DNA fragments
corresponding to the Campylobacter genus, C. jejuni and C. coli,
respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอที่สกัดจากน้ำซุปเพิ่มคุณค่า Campylobacter
หลังจากขั้นตอนการตกแต่งโดยใช้ชุดฟอกดีเอ็นเอจีโนม
(Fermentas).
ยีนเป้าหมายสำหรับการระบุของ Campylobacter spp ได้. ซี
jejuni และ C coli เป็น 16S rRNA (ลินตันลอว์สัน, โอเว่นและ สแตนเลย์,
1997) MAPA (Stucki โจอาคิม, เลและ Burnens, 1995) และ ceuE
ตามลำดับ ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับการขยายยีนที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 เงื่อนไข PCR ใช้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ได้รับการอธิบายโดยเดนิสและอัล (1999) ปฏิกิริยาขยายได้รับการดำเนินการในส่วนผสม 50 LL มี 1 U โพลิเมอร์ Taq (Roche วิทยาศาสตร์ประยุกต์) 100 lmol 1? 1 ของแต่ละ dNTP 0.1 lmol 1? 1 จากMD16S1 และไพรเมอร์ MD16S2 และ 0.42 lmol 1? 1 จาก MDmapAl, MDmapA2 . col3 และไพรเมอร์ MDCOL2 ในบัฟเฟอร์ Fermentase ปฏิกิริยาขยายได้ดำเนินการโดยใช้ thermocycler ดีเอ็นเอ(Master Cycler Gradiant, Eppendurf, เยอรมนี) ดังต่อไปนี้: สิบนาทีที่ 95 ซี 35 รอบแต่ละประกอบด้วย 30 วินาทีที่ 95 C, 90? s ที่59 องศาเซลเซียส, 1 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียสและเป็นขั้นตอนสุดท้ายของการขยายเวลา 10 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส. ขยายสร้าง 857 bp 589 bp และ 462 bp ดีเอ็นเอที่สอดคล้องกับสกุลCampylobacter ที่ C. jejuni และ C coli , ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอจากน้ำรวมทั้งการเสริมหลัง
ขั้นตอนโดยใช้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ชุด

( fermentas ) เป้าหมายยีนกำหนดประกวด spp . , C .
C . coli เป็นเชื้อ และ 16S rRNA ( ลินตัน ลอว์สัน , โอเว่น & Stanley
1997 ) แผนที่ ( stucki โย nicolet , , & burnens , 1995 ) และ ceue
ตามลำดับ ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับขยาย
ยีนแสดงเป็นตาราง 1 .
) เงื่อนไขที่ใช้ในการศึกษานี้ได้รับก่อนหน้านี้
อธิบายโดย Denis et al . ( 1999 ) ปฏิกิริยาแบบมี
แสดง 50 จะผสมที่ประกอบด้วย 1 u แท็ค Polymerase ( วิทยาศาสตร์ประยุกต์โรช
) , 100 lmol 1  1 ของแต่ละ dntp 0.1 lmol 1  1
md16s1 md16s2 และไพรเมอร์และ 0.42 lmol 1  1 mdmapal
mdmapa2 , ไพรเมอร์ , และ col3 mdcol2 fermentase
ในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาแบบทดลองใช้ดีเอ็นเอเทอร์มอไซเคล ์
( Master gradiant eppendurf บ้า , Germany ) เป็นดังต่อไปนี้ :
สิบนาทีที่ 95  C 35 รอบละ 30 วินาทีที่ 95  C 90 s
59  C 1 นาทีที่ 72  c และสุดท้ายขยายขั้นตอนที่ 10 นาที 72  C .
( สร้าง 857 BP , 589 BP และ 462 bp ดีเอ็นเอ
ตรงกับรวมทั้งเชื้อสกุล , C . และ C . coli
ตามลำดับ