Samples of muscle were extracted an

Samples of muscle were extracted and deproteinized according to the method described by Aristoy and Toldrá (1991). One gram of longissimus lumborum muscle was homogenized with 0.1 N HCl (dilution 1:10) using a homogenizer (Ultra-Turrax T25; IKA Werke GmbH & Co.KG, Staufen, Germany) for 1 min at 18,000 rpm. These homogenates were centrifuged at 4°C at 10,000 × g for 20 min. The supernatant was filtered through filter paper and stored at –80°C until use. Then 200 μL of thawed sample plus 20 μL of an internal standard solution (norvaline and sarcosine, 10 nmol/μL of each; Sigma-Aldrich, St. Louis,MO) were deproteinized by adding 780 μL of ethanol and centrifuged at 14,000 × g for 10 min at 4°C. The supernatant was derivatized by online column derivatization using o-phthalaldehyde for primary AA and 9-fluorenylmethyl chloroformate for secondary AA (Henderson et al., 2000).The derivatized AA were analyzed by reversed-phase HPLC using a column (Gemini C18 column, 150 × 4.60 mm, 5 µm; Phenomenex, Torrance, CA).The separation was performed at 40°C using a gradient between 2 sol vents: 40 mM sodium phosphate at pH 7.8 (solvent A) and acetonitrile:methanol:water (45:45:10 vol/vol, solvent B).The flow rate was 2 mL/min, and the solvent gradient was initially 0% B until 1.9 min, followed by a 16.2-min linear change to 57% B and a 0.5-min linear change to 100% B,which was maintained for 3.7 min. The AA analysis was achieved in 22 min. The detection was monitored using the fluorescence signal monitored at 450 nm for emission and 340 nm for excitation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างของกล้ามเนื้อถูกสกัด และ deproteinized ตามวิธีการอธิบายไว้ โดย Aristoy และ Toldrá (1991) กรัมหนึ่งของกล้ามเนื้อ lumborum longissimus ถูก homogenized เป็นกลุ่ม ด้วย 0.1 N HCl (เจือจาง 1:10) โดยใช้ homogenizer (Ultra Turrax T25 IKA Werke GmbH & Co.KG, Staufen เยอรมนี) ใน 1 นาทีที่ 18000 รอบต่อนาที Homogenates เหล่านี้ถูก centrifuged ที่ 4° C ที่ 10000 × g สำหรับ 20 นาที Supernatant การกรองโดยใช้กระดาษกรอง และเก็บไว้ที่ –80 ° C จนใช้ แล้ว μL 200 ของอย่าง thawed บวก μL 20 ของภายในมาตรฐาน (norvaline และ sarcosine, nmol 10 μL ละ Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) deproteinized โดยการเพิ่ม μL 780 ของเอทานอล และ centrifuged ที่ 14000 × g ใน 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatant ถูก derivatized โดยคอลัมน์ออนไลน์ derivatization ใช้ o phthalaldehyde chloroformate AA และ 9 fluorenylmethyl หลักสำหรับ AA รอง (Henderson et al., 2000)Derivatized AA ได้วิเคราะห์ โดยใช้คอลัมน์ HPLC ขั้นตอนย้อนกลับ (C18 เมถุนคอลัมน์ 150 × 4.60 mm, 5 µm Phenomenex รันซ์ CA)ทำการแยกที่ 40° C โดยใช้การไล่ระดับสีระหว่าง 2 โซลเว้นท์: 40 มม.โซเดียมฟอสเฟตที่ค่า pH 7.8 (ตัวทำละลาย A) และ acetonitrile:methanol:water (45:45:10 vol/vol ตัวทำละลาย B)อัตราการไหล 2 mL/min และการไล่ระดับสีเป็นตัวทำละลายถูกเริ่มต้น 0% B จนถึง 1.9 นาที ตาม ด้วยการเปลี่ยนแปลงเชิง 16.2 นาที 57% B และการเปลี่ยนแปลงเชิงเส้น 0.5 นาที 100% B ซึ่งได้รับการรักษา 3.7 นาที AA วิเคราะห์สำเร็จในนาทีที่ 22 การตรวจพบถูกตรวจสอบโดยใช้สัญญาณ fluorescence ติดตามที่ 450 nm สำหรับปล่อยก๊าซและ 340 nm สำหรับในการกระตุ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างของกล้ามเนื้อถูกสกัดและโปรตีนตามวิธีการอธิบายโดย Aristoy และ Toldra (1991) หนึ่งกรัมของกล้ามเนื้อ longissimus กลับกลับทำให้เป็นเนื้อเดียวกันกับ 0.1 น HCl (เจือจาง 1:10) โดยใช้โฮโมจีไน (อัลตร้า Turrax T25; IKA Werke GmbH & Co.KG, Staufen, เยอรมนี) เป็นเวลา 1 นาทีที่ 18,000 รอบต่อนาที homogenates เหล่านี้ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4 ° C ที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาที ใสถูกกรองผ่านกระดาษกรองและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน แล้ว 200 ไมโครลิตรของตัวอย่างละลายบวก 20 ไมโครลิตรของสารละลายมาตรฐานภายใน (Norvaline และ sarcosine, 10 นาโนโมล / ไมโครลิตรของแต่ละ บริษัท Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์) เป็นโปรตีนโดยการเพิ่ม 780 ไมโครลิตรของเอทานอลและหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 ×กรัม 10 นาทีที่ 4 ° C ใสถูก derivati​​zed โดยอนุพันธ์คอลัมน์ออนไลน์โดยใช้ o-phthalaldehyde สำหรับ AA หลักและ 9 fluorenylmethyl chloroformate สำหรับรอง AA (เฮนเดอ et al., 2000) ได้โดยง่าย AA derivati​​zed นำมาวิเคราะห์โดยวิธี HPLC ย้อนกลับเฟสโดยใช้คอลัมน์ (คอลัมน์ราศีเมถุน C18, 150 × 4.60 มม 5 ไมครอน; Phenomenex, Torrance, CA) ได้โดยง่ายแยกเป็นที่ 40 ° C โดยใช้การไล่ระดับสีระหว่าง 2 ช่องระบายอากาศโซล: 40 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตที่พีเอช 7.8 (ตัวทำละลาย) และ acetonitrile: เมทานอล: น้ำ (45 : 45: 10 ปริมาตร / ปริมาตรตัวทำละลาย B) อัตราการไหลได้โดยเริ่มต้นเป็น 2 มิลลิลิตร / นาทีและการไล่ระดับสีตัวทำละลายเป็นคนแรก 0% B จนถึง 1.9 นาทีตามด้วยการเปลี่ยนแปลงเชิงเส้น 16.2 นาทีถึง 57% บีและ 0.5 นาที Linear เปลี่ยนไป 100% B ซึ่งได้รับการเก็บรักษาไว้เป็น 3.7 นาที การวิเคราะห์ AA ก็ประสบความสำเร็จใน 22 นาที การตรวจสอบได้รับการตรวจสอบโดยใช้สัญญาณเรืองแสงตรวจสอบที่ 450 นาโนเมตรสำหรับการปล่อยก๊าซเรือนกระจกและ 340 นาโนเมตรสำหรับการกระตุ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างของกล้ามเนื้อถูกสกัดและ deproteinized ตามวิธีการที่อธิบายโดย aristoy และ toldr . kgm ( 1991 ) หนึ่งกรัมของโค lumborum กล้ามเนื้อเป็นโฮโมด้วย 0.1 N HCl ( เจือจาง 1 : 10 ) การโฮโมจิไนซ์ ( Ultra turrax t25 ; อิกะ werke GmbH & co.kg Staufen , เยอรมนี ) นาน 1 นาทีที่ 18 , 000 รอบต่อนาที homogenates เหล่านี้เป็นระดับที่ 4 ° C ที่ 10 × G 20 นาที