The study was conducted with an aim

The study was conducted with an aim to optimize the transformation efficiency of the Gram-positive bacterium Staphylococcus carnosus to a level that would enable the creation of cell surface displayed combinatorial protein libraries.
METHODS AND RESULTS:
We have thoroughly investigated a number of different parameters for: (i) the preparation of electrocompetent cells; (ii) the treatment of cells before electroporation; (iii) the electroporation step itself; and (iv) improved recovery of transformed cells. Furthermore, a method for heat-induced inactivation of the host cell restriction system was devised to allow efficient transformation of the staphylococci with DNA prepared from other species, such as Escherichia coli. Previously described protocols for S. carnosus, giving transformation frequencies of approximately 10(2) transformants per transformation could be improved to reproducible procedures giving around 10(6) transformants for a single electroporation event, using plasmid DNA prepared from either S. carnosus or E. coli. The transformed staphylococcal cells were analysed using flow cytometry to verify that the entire cell population retained the introduced plasmid DNA and expressed the recombinant protein in a functional form on the cell surface at the same level as the positive control population.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ศึกษาได้ดำเนินการโดยมีวัตถุประสงค์เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงของรมบวกและแบคทีเรียเชื้อ Staphylococcus carnosus ให้อยู่ในระดับที่จะช่วยให้การสร้างเซลล์ผิวที่ปรากฏห้องสมุดโปรตีน combinatorial
วิธีการและผล.
เรามีการสอบสวนอย่างละเอียดที่แตกต่างกันจำนวน พารามิเตอร์สำหรับ (i) การเตรียมความพร้อมของเซลล์ electrocompetent;(ii) การรักษาของเซลล์ก่อน electroporation (iii) ขั้นตอน electroporation ตัวเองและ (iv) การฟื้นตัวที่ดีขึ้นของเซลล์เปลี่ยน นอกจากนี้วิธีการใช้งานความร้อนที่เกิดขึ้นของระบบเซลล์โฮสต์ จำกัด เป็นวิธีการที่จะช่วยให้การเปลี่ยนแปลงที่มีประสิทธิภาพของเชื้อที่มีการเตรียมดีเอ็นเอจากสายพันธุ์อื่น ๆ เช่น Escherichia coli โปรโตคอลที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับ scarnosus ให้การเปลี่ยนแปลงของความถี่ประมาณ 10 (2) transformants ต่อการเปลี่ยนแปลงอาจจะดีขึ้นขั้นตอนการทำซ้ำให้ประมาณ 10 (6) transformants สำหรับเหตุการณ์ electroporation เดียวโดยใช้พลาสมิดดีเอ็นเอที่เตรียมจากทั้ง s carnosus หรือ e coliเซลล์ staphylococcal เปลี่ยนถูกวิเคราะห์โดยใช้ภูมิคุ้มกันเพื่อตรวจสอบว่าประชากรเซลล์ทั้งเก็บดีเอ็นเอพลาสมิดที่รู้จักและแสดงโปรตีนในรูปแบบการทำงานของเซลล์ผิวในระดับเดียวกับการควบคุมประชากรบวก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิจัย มีเป้าหมายเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการแปลงของแบคทีเรียแบคทีเรียแกรมบวก carnosus Staphylococcus ระดับที่จะช่วยให้การสร้างเซลล์ผิวโปรตีนปัญหาแสดงไลบรารี
ผลลัพธ์และวิธีการ:
เราได้สืบสวนจำนวนพารามิเตอร์ต่าง ๆ สำหรับทำ: (i) การเตรียมเซลล์ electrocompetent (ii รักษาเซลล์ก่อน electroporation ) (iii) ขั้นตอนการ electroporation เอง และ (iv) การฟื้นตัวของเซลล์ที่แปรรูป นอกจากนี้ วิธีการยกเลิกการทำให้เกิดความร้อนเรียกระบบโฮสต์เซลล์จำกัดได้กำหนดให้การเปลี่ยนแปลงประสิทธิภาพของ staphylococci ที่ มีดีเอ็นเอที่เตรียมจากพันธุ์อื่น ๆ เช่น Escherichia coli ก่อนหน้านี้อธิบายรโตสำหรับ s carnosus แปลงความถี่ประมาณ 10(2) transformants ต่อการเปลี่ยนแปลงให้สามารถปรับปรุงการจำลองขั้นตอนให้สถาน transformants 10(6) สำหรับเหตุการณ์เดียว electroporation ใช้ plasmid DNA เตรียมจาก S. carnosus หรือ E. coli เซลล์ staphylococcal แปรรูปได้ analysed ใช้กระแสเซลล์เพื่อตรวจ สอบว่า ประชากรทั้งหมดในเซลล์สะสม DNA plasmid นำแสดงโปรตีน recombinant ในทำงานรูปแบบบนพื้นผิวของเซลล์ที่ระดับเดียวกับประชากรควบคุมบวก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การศึกษาเป็นผู้ดำเนินการโดยมีวัตถุประสงค์เพื่อเพิ่ม ประสิทธิภาพ ที่มี ประสิทธิภาพ ของการเปลี่ยนแปลงที่กรัมบวกแบคทีเรีย staphylococcus carnosus ในระดับที่จะทำให้การสร้างเซลล์ผิว combinatorial โปรตีนจะแสดงไลบรารี.
วิธีการและผลลัพธ์:
เรามีการสอบสวนอย่างละเอียดที่แตกต่างกันของพารามิเตอร์สำหรับ:( i )การเตรียมการของ electrocompetent เซลล์;( ii )การรักษาของเซลล์ก่อน electroporation ( iii )ขั้นตอนที่ electroporation เองและ( IV )การกู้คืนข้อมูลได้ดียิ่งขึ้นของเซลล์ปรับเปลี่ยนรูปแบบ. ยิ่งไปกว่านั้นวิธีสำหรับ inactivation ความร้อนทำให้เกิดระบบการจำกัดจัดบริการข้อมูลของสถานีฐานที่มีน้ำท่วมในการอนุญาตให้มีการปรับเปลี่ยนอย่างมี ประสิทธิภาพ ของ staphylococci จะมีดีเอ็นเอเตรียมไว้จากสายพันธุ์อื่นๆเช่นริคีอา โปรโตคอลที่ระบุไว้สำหรับ. S . S .ความถี่การเปลี่ยนแปลงให้ carnosus ประมาณ 10 ( 2 ) transformants ต่อการเปลี่ยนแปลงจะเกิดขึ้นซ้ำเดิมได้รับการปรับปรุงขั้นตอนการให้ประมาณ 10 ( 6 ) transformants สำหรับเหตุการณ์ electroporation เพียงตัวเดียวโดยใช้ดีเอ็นเอ plasmid จัดเตรียมจากทั้ง carnosus . S . S .หรือผลเซลล์ staphylococcal ปรับเปลี่ยนได้วิเคราะห์โดยใช้ cytometry ไหลเพื่อตรวจสอบว่าจำนวนประชากรเซลล์ทั้งหมดที่เก็บได้นำดีเอ็นเอ plasmid และแสดงออกมาโปรตีน poxvaccine ที่อยู่ในแบบฟอร์มที่ใช้บนพื้นผิวเซลล์ที่อยู่ในระดับเดียวกับที่เป็นประชากรในเชิงบวกที่ควบคุม