All cows on the farm were genotyped

All cows on the farm were genotyped by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). CXCR1 PCR primers were designed based on the NCBI http://www.ncbi.nlm.nih.gov nucleotide sequence U19947.(Forward: 5’-caa tac aac gaa atg gcg gat gat-3’, Reverse: 5’-cag gtt gta ggg cag cca gca gag-3’). TLR4 primers were designed based on the sequence NM_174198 (Forward: 5’-aac agg tag ccc aga cag cat ttc-3’, Reverse: 5’-ggc acg ccc tcc tcc aag tt-3’). Each PCR product was designed to incorporate a Bsp 1286 I restriction site within the amplicon to act as an internal quality control for enzyme activity. Cycling conditions were as follows: initial denaturation at 94°C for 5 min followed by 30 cycles for 94°C for 1 min, annealing temp (61°C for CXCR1, 60°C for TLR4) for 1 min, 72°C for 1 min, with a final extension at 72°C for 5 min. Each PCR reaction was performed in 25 μl volumes and con- tained 1× NH4 Buffer (160 nM (NH4)2SO4, 670 mM Tris-HCl (pH8.8), 0.1% Tween 20), 200 μM each dNTP and 2.5 U Taq Polymerase (Bioline Ltd., London, UK). CXCR1 PCR amplified a region of 202 bp using 100 ng template genomic DNA (gDNA), 10 pmol of each pri- mer in the presence of 2.5 mM MgCl2 and 10% DMSO. TLR4 PCR reactions amplified a region of 580 bp using 200 ng of template gDNA, 25 pmol of each primer in the presence of 1.5 mM MgCl2. PCR products were ana- lyzed by gel electrophoresis (1.5%) and ethidium

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัวทั้งหมดในฟาร์มถูก genotyped โดยโพลิเมอร์ห่วงโซ่ปฏิกิริยาการ จำกัด ระยะเวลาในส่วน polymorphism (PCR-RFLP) ไพรเมอร์ cxcr1 pcr ได้รับการออกแบบบนพื้นฐานของ NCBI http://www.ncbi.nlm.nih.gov เบื่อหน่ายลำดับ u19947 (ไปข้างหน้า. 5'-CAA แทค, aac GAA ATG GCG GAT GAT-3 'กลับ: 5'-CAG GTT gta ggg CAG CCA gca ปิดปาก-3 ') ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบ TLR4 ตามลำดับ nm_174198 (ไปข้างหน้า:5'-AAC แท็ก agg CCC แมวนายพล CAG TTC-3 'กลับ: 5'-GGC ACG CCC TCC TCC เอเอจี tt-3') ผลิตภัณฑ์ pcr แต่ละถูกออกแบบมาเพื่อรวม bsp 1286 i จำกัด เว็บไซต์ภายใน amplicon เพื่อทำหน้าที่เป็นการควบคุมคุณภาพภายในสำหรับกิจกรรมของเอนไซม์ เงื่อนไขการขี่จักรยานมีดังนี้ denaturation เริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 30 รอบ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีอุณหภูมิการหลอม (61 องศาเซลเซียสเพื่อ cxcr1,60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา TLR4) เป็นเวลา 1 นาที, 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีที่มีนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที แต่ละปฏิกิริยา pcr ได้ดำเนินการในปริมาณ 25 ไมโครลิตรและ con-tained 1 × NH4 บัฟเฟอร์ (160 นาโนเมตร (NH4) 2SO4, 670 มม. tris-hcl (ph8.8) 0.1% ทวี 20), 200 ไมโครเมตรแต่ละ dntp และ 2.5 u Taq โพลิเมอร์ (Bioline จำกัด ., ลอนดอน, สหราชอาณาจักร) cxcr1 pcr ขยายพื้นที่จาก 202 bp 100 แม่ ng ดีเอ็นเอจีโนม (gdna),10 pmol ของแต่ละไพรแมร์ในที่ที่มี 2.5 มม. MgCl2 และ 10% DMSO ปฏิกิริยา TLR4 pcr ขยายพื้นที่ของ 580 bp ใช้ 200 ng ของแม่ gdna, 25 pmol ของแต่ละไพรเมอร์ในที่ที่มี 1.5 มม. MgCl2 ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูก ana-lyzed โดยเจลอิ (1.5%) และ ethidium

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัวทั้งหมดในฟาร์มได้ โดยโพลีมอร์ฟิพอลิเมอเรสจำกัดปฏิกิริยาลูกโซ่ส่วนยาวซึม (PCR-RFLP) genotyped ไพรเมอร์ CXCR1 PCR ถูกออกแบบตามลำดับนิวคลีโอไทด์ http://www.ncbi.nlm.nih.gov NCBI U19947(ไปข้างหน้า: ซีเอเอ 5'-โฮมาตรวัด aac เฒ่า atg gcg แกทพ้อยท์แกทพ้อยท์-3', ย้อนกลับ: 5'cag gtt gta ggg cag cca gca ปิดปาก-3') ไพรเมอร์ TLR4 ถูกออกแบบตามลำดับ NM_174198 (ไปข้างหน้า: 5'-aac agg แท็กซีซีซีนี้ cag แมวทีทีซีจำกัด-3', ย้อนกลับ: 5'-ggc จีบซีซีซีไทยคันทรีคลับไทยคันทรีคลับเอเอจี tt-3') แต่ละผลิตภัณฑ์ PCR ถูกออกแบบให้รวม Bsp 1286 ฉันไซต์จำกัดภายใน amplicon เป็นตัวควบคุมคุณภาพภายในสำหรับกิจกรรมของเอนไซม์ สภาพขี่ได้ดังนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 94° C สำหรับ 5 นาทีตาม ด้วยรอบ 30 สำหรับ 94° C สำหรับ 1 นาที อุณหภูมิหลอม (61° C สำหรับ CXCR1 60 ° C สำหรับ TLR4) ใน 1 นาที 72 ° C สำหรับ 1 นาที มีส่วนขยายที่ 72 ° C สำหรับ 5 นาทีสุดท้าย ทำแต่ละปฏิกิริยา PCR ใน 25 μl ไดรฟ์และคอน-tained 1 การบัฟเฟอร์ NH4 (160 nM (NH4) 2SO4, 670 มม.ตรี- (pH8.8), HCl 0.1% Tween 20), 200 μM dNTP และพอลิเม 2.5 U Taq อเรส (จำกัดนำ ลอนดอน สหราชอาณาจักร) CXCR1 PCR ขยายพื้นที่ 202 bp ใช้ 100 ng แม่ genomic DNA (gDNA), pmol 10 ของแต่ละแมร์ค่อนข้างดีในต่อหน้าของ MgCl2 และ 10% DMSO 2.5 มม. ปฏิกิริยา TLR4 PCR ขยายพื้นที่ 580 bp ใช้ 200 ng ของแม่ gDNA, pmol 25 แต่ละพื้นในต่อหน้าของผลิตภัณฑ์ PCR 1.5 มม. MgCl2 มีอานา lyzed electrophoresis เจล (1.5%) และ ethidium

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัวในฟาร์มที่มี genotyped โดยปฏิกิริยาลูกโซ่ polymerase - การจำกัดความยาวสักเท่าไหร่ polymorphism ( pcr - rflp ) primers pcr cxcr 1 ได้รับการออกแบบตาม ncbi http://www.ncbi.nlm.nih.gov nucleotide ลำดับ u19947 .(ส่งต่อที่ 5 ' - CAA TAC AAC , gaa gcg ATG - 3 องค์องค์'ย้อนกลับ 5 ' - cag gtt GTA ggg cag cca GCA ,เฉพาะปิดปาก - 3 ') 4 primers tlr ได้รับการออกแบบตามลำดับ nm_ 174198 (ส่งต่อttc 5 ' - AAC , agg แท็ก CCC Balinese Aga เพื่อมาถึงได้ cag CAT - 3 'ย้อนกลับ 5 ' - GGC acg CCC ผ่อนคลายแป้งตราผ่อนคลายแป้งตรา aag TT - 3 ') แต่ละ ผลิตภัณฑ์ pcr ได้รับการออกแบบมาเพื่อเข้าเว็บไซต์การจำกัดเหมือนกันที่อยู่: 1286 I ที่อยู่ ภายใน amplicon เพื่อทำหน้าที่เป็นการควบคุม คุณภาพ ภายใน สำหรับการทำงานของเอนไซม์ เงื่อนไขการขี่จักรยานดังนี้ denaturation เริ่มต้นที่ 94 ° C สำหรับ 5 นาทีตามด้วย 30 รอบสำหรับ C annealing อุณหภูมิ ( 61 ° 94 ° C สำหรับ 1 นาทีสำหรับ cxcr 160 ° C สำหรับ tlr 4 )สำหรับ 1 นาทีที่ 72 ° C สำหรับ 1 นาทีพร้อมด้วยการขยายเวลาครั้งสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ 5 นาทีแต่ละ pcr ปฏิกริยาได้ดำเนินการใน 25 μl เล่มและ Con - tained 1 × NH 4 Buffer ( 160 nm ( NH 4 ) 2 so4 , 670 มม.ผลิตไฟฟ้าราชบุรีโฮลดิ้งจำกัด - HCL ( PH 8.8 ), 0.1% ส่วนกลาง 20 ), 200 μ m แต่ละ dntp และ 2.5 U taq polymerase ( bioline จำกัด, London , UK ) cxcr 1 pcr แอมพลิฟาย ภูมิภาค ที่ 202 BP โดยใช้ดีเอ็นเอ 100 NG เทมเพลต genomic ( gdna )10 pmol ของส่วนตัว - Mer แต่ละครั้งในการมีอยู่ของ 2.5 มม. mgcl 2 และ 10% dmso . tlr 4 เกิดปฏิกิริยา pcr แอมพลิฟายเขตพื้นที่ที่ 580 BP โดยใช้ 200 ไนจีเรียของ gdna เทมเพลต 25 pmol ของเชื้อปะทุแต่ละตัวในการมีอยู่ของ 1.5 mgcl 2 มม. ผลิตภัณฑ์ pcr เป็น ANA - lyzed โดย electrophoresis เจล( 1.5% )และ ethidium