Plasmid pGA11 for cell surface disp

Plasmid pGA11 for cell surface display of R. oryzae glucoamylase
was constructed as described previously in Ref. [5]. To amplify
a DNA fragment between glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase
(GAPDH) promoter and GAPDH terminator containing the
coding region of the glucoamylase with the 30 half of a-agglutinin
gene, two primers containing artificial SphI and Sse837 I sites
(underlined) (50-ACATGCATGCACCAGTTCTCACACGGAACA-30 and
50-TCCTGCAGGTCAATCAATGAATCG AAAATG-30) were designed and
a 4.3-kbp fragment was amplified by PCR using Ex Taq polymerase
(TaKaRa). The amplified fragments were digested with the cognate
restriction enzymes and inserted between the SphI and Sse837 I
sites of pAUR101 (TaKaRa) to generate pAU101RGA. To integrate
pAU101RGA into the S. cerevisiae K7 genomic DNA, the plasmid was
digested with StuI to generate a linear DNA fragment. This DNA
fragment was transformed into the strain K7 by the lithium acetate
method following manufacturer’s instructions (TaKaRa). Transformants
were obtained on YPD plates containing 1.0 mg/ml Aureobasidin
A (TaKaRa).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พลาสมิด pGA11 สำหรับการแสดงผลเซลล์ผิวของอาร์ oryzae glucoamylase
ถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในการอ้างอิง [5] เพื่อขยายส่วนดีเอ็นเอระหว่าง dehydrogenase glyceraldehydes-3-ฟอสเฟต (GAPDH) โปรโมเตอร์และเทอร์มิ GAPDH ที่มีเขตการเข้ารหัสของglucoamylase กับ 30 ครึ่งหนึ่งของ-agglutinin ยีนสองไพรเมอร์ที่มี SphI เทียมและ Sse837 เว็บไซต์ที่ฉัน(ขีดเส้นใต้) (50 -ACATGCATGCACCAGTTCTCACACGGAACA-30 และ50 TCCTGCAGGTCAATCAATGAATCG AAAATG-30) ได้รับการออกแบบและชิ้นส่วน4.3 KBP ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้อดีตโพลิเมอร์ Taq (Takara) ชิ้นส่วนขยายที่ถูกย่อยด้วยสายเลือดเอนไซม์ข้อ จำกัด และแทรกระหว่าง SphI และ Sse837 ฉันเว็บไซต์ของpAUR101 (Takara) เพื่อสร้าง pAU101RGA เพื่อบูรณาการpAU101RGA เข้าไปในดีเอ็นเอ S. cerevisiae K7 จีโนมพลาสมิดที่ถูกย่อยด้วยStuI ในการสร้างชิ้นดีเอ็นเอเชิงเส้น ดีเอ็นเอนี้ส่วนได้กลายเป็น K7 ความเครียดจากอะซิเตตลิเธียมวิธีการทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต(Takara) Transformants ที่ได้รับบนจานที่มี YPD 1.0 mg / ml Aureobasidin A (Takara)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

pga11 พลาสมิดสำหรับผิวเซลล์ R . oryzae กลูโคอะไมเลส
แสดงถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในอังกฤษ [ 5 ] เพื่อขยายการดีเอ็นเอระหว่าง glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase
( gapdh ) และการ gapdh เทอร์มิเนเตอร์ที่มี
รหัสภูมิภาคของเอนไซม์กลูโคอะไมเลสกับ 30 ครึ่งของยีน a-agglutinin
2 ชนิดที่มี sphi เทียมและ sse837 ฉันเว็บไซต์
( ขีดเส้นใต้ ) ( 50-acatgcatgcaccagttctcacacggaaca-30 และ

50-tcctgcaggtcaatcaatgaatcg aaaatg-30 ) ได้ออกแบบและเป็นส่วน 4.3-kbp ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้อดีตได้ดีโดย
( ทาการะ ) ชิ้นส่วนของที่ถูกย่อยด้วยเอนไซม์จำกัดเชื้อสาย
แทรกระหว่างฉันและ sphi sse837
เว็บไซต์ของ paur101 ( ทาการะ ) เพื่อสร้าง pau101rga . รวม
pau101rga เป็น Sโดย K7 genomic DNA , พลาสมิด
ย่อยด้วย stui สร้างชิ้นส่วนดีเอ็นเอเชิงเส้น นี้ส่วนดีเอ็นเอ
กลายเป็นสายพันธุ์ K7 ตามคำแนะนำลิเธียมเตต
วิธีต่อไปนี้ของผู้ผลิต ( ทาการะ ) พลาสมิด
ได้บนจานที่มี ypd 1.0 mg / ml aureobasidin
( ทาการะ )