The enzyme solution was prepared da

The enzyme solution was prepared daily by dissolving
3.32 mg of b-glucuronidase/sulfatase (3  106 U g solid1) in 1mL
of 1 M ammonium acetate buffer (pH 5.0).

25 lL of 4-methylumbelliferyl
glucuronide/4-methylumbelliferyl sulfate/13C4-4-methylumbelliferone
standard mixture (4 lgmL1) was also added to
determine the extent of deconjugation.

After mixing, the sample
was incubated at 37 C for 24 h.

Next, analytes were extracted from
the samples by adding 15 mL of ethyl acetate/formic acid (99:1, v/
v) and shaking for 30 min.

The mixture was centrifuged for 10 min
at 4050g.

Subsequently, the extracts were evaporated to dryness at
room temperature under a nitrogen stream.

The residue was dissolved
with 400 lL of a mixture of Milli-Q water/MeOH (50:50,
v/v) and placed in a 1.5 mL Eppendorf tube.

500 lL of hexane
was added and the mixture was centrifuged for 15 min at
24960g.


Finally, the underlying aqueous phase was separated and
10 lL injected into the ultra high performance liquid chromatograph
(UHPLC) system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โซลูชั่นเอนไซม์ถูกเตรียมทุกวัน โดยยุบ3.32 มิลลิกรัมของ b-glucuronidase/sulfatase (3 106 U g แข็ง 1) ใน 1 mLของ 1 M แอมโมเนีย acetate บัฟเฟอร์ (pH 5.0) 25 lL 4-methylumbelliferylglucuronide/4-methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13C 4-4-methylumbelliferoneนอกจากนี้ยังได้เพิ่มส่วนผสมมาตรฐาน (4 lgmL 1)กำหนดขอบเขตของ deconjugation หลังจากผสม ตัวอย่างมี incubated ที่ 37 C ใน 24 ชม ถัดไป analytes ที่สกัดจากตัวอย่าง โดยเพิ่ม 15 mL ของกรด formic/acetate เอทิล (99:1, v /v) แล้วสั่นสำหรับ 30 นาที ส่วนผสมถูก centrifuged สำหรับ 10 นาทีที่ 4050 กรัม สารสกัดได้หายไปกับความแห้งกร้านที่มาอุณหภูมิห้องภายใต้กระแสไนโตรเจน สารตกค้างถูกส่วนยุบมี 400 จะผสมระหว่างน้ำ/ทานอจาก Q (คนละครึ่งv/v) และอยู่ในมล 1.5 Eppendorf หลอด 500 จะของเฮกเซนเพิ่ม และมี centrifuged ส่วนผสมสำหรับ 15 นาทีที่24960 กรัม สุดท้าย ระยะอควีต้นถูกแยก และ10 จะฉีดเข้าไปใน chromatograph เหลวประสิทธิภาพสูงเป็นพิเศษระบบ (UHPLC)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ที่ได้รับการจัดทำขึ้นเป็นประจำทุกวันโดยการละลาย
3.32 มิลลิกรัมของ B-glucuronidase / sulfatase (3? U 106 กรัมของแข็ง 1) ใน 1 มล
1 M บัฟเฟอร์อะซิเตตแอมโมเนียม (pH 5.0). 25 lL 4 Methylumbelliferyl glucuronide / 4 Methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13C4-4-methylumbelliferone ส่วนผสมมาตรฐาน (4 lgmL? 1) ถูกเพิ่มเข้ามานอกจากนี้ยังกำหนดขอบเขตของ deconjugation. หลังจากผสมตัวอย่างถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง. ถัดไปวิเคราะห์ถูกสกัดจากกลุ่มตัวอย่างโดยการเพิ่ม 15 มิลลิลิตรเอทิลอะซิเต / กรด (99: 1, v / V). และเขย่าเป็นเวลา 30 นาทีส่วนผสมที่ถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาที. ที่ 4050g ต่อจากนั้นสารสกัดถูกระเหยจนแห้งที่. อุณหภูมิห้องภายใต้กระแสไนโตรเจนที่เหลือก็เลือนหายไปกับ 400 lL ส่วนผสมของพัน-Q น้ำ / เมธานอล (50:50, v / v) และวางไว้ใน 1.5 มิลลิลิตรหลอด Eppendorf. 500 lL ของเฮกเซนถูกเพิ่มเข้ามาและส่วนผสมที่ถูกปั่น 15 นาทีที่24960g . สุดท้ายเฟสน้ำต้นแบบถูกแยกออกและ10 lL ฉีดเข้าไปใน Chromatograph ของเหลวสมรรถนะสูงเป็นพิเศษ(UHPLC) ระบบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารละลายเอนไซม์ที่เตรียมไว้ทุกวัน โดยละลาย
3.32 มิลลิกรัม / b-glucuronidase ซัลฟาเทส ( 3  106 U G แข็ง  1 ) ใน 1ml
1 M แอมโมเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) .

25 จะ 4-methylumbelliferyl
glucuronide / 4-methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13c4-4-methylumbelliferone
มาตรฐานผสม ( 4 lgml  1 ) ยังเพิ่ม กำหนดขอบเขตของ deconjugation




หลังจากผสมตัวอย่างถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง 

ต่อไป สารสกัดจาก
ตัวอย่างโดยการเพิ่ม 15 มิลลิลิตร / กรดเอทิลอะซิเตท ( 99:1 , V /
V ) และเขย่าเป็นเวลา 30 นาที

ส่วนผสมระดับสำหรับ 10 นาทีที่ 4050g


ต่อมาสารระเหยได้แห้งที่อุณหภูมิห้องภายใต้
ไนโตรเจน กระแส

กาก
400 จะละลายผสม milli-q / ปริมาณน้ำ 100%
,v / v ) และวางไว้ใน 1.5 ml เพนดอร์ฟหลอด 500

จะได้เพิ่มและสารผสมที่ระดับ 15 นาทีที่ 24960g



สุดท้าย ( เฟสน้ำถูกแยกออกและ
10 จะถูกฉีดเข้าไปในการปฏิบัติงานสูงยิ่งยวด ของเหลว โครมาโตกราฟ
( uhplc ) ระบบ