5’-Nucleotides assay The sample ext

5’-Nucleotides assay
The sample extraction and analysis followed Taylor and et al. (1981). 1 g mushroom powder was extracted with 25 ml of deion-ised water. The suspension was heated under boiling for 1 min. and centrifuged (CT15RT Centrifuge. Techcomp Co., Ltd., Shanghai) at 12,000 (16,000 g) rpm for 15 min after cooling. The residue was extracted with the same method and the combined extraction was filtered through 0.22 µm mixed cellulose esters filler (Welch) ready to inject into a high-performance liquid chromatography (HPLC, Waters 600, Waters Co., Milord, MA USA).
The HPLC system was composed of a 10 µl sample loop,an ultra-violet detector and an Ultimate AQ-C18 column (250 mm×4.6 mm,5µm,Welch).The mobile phase was 10 mM KH2PO4(pH 4.68,AR grade, Sinopharm) at a flow rate of 1.0 ml/min and UV detection at 259 nm. The tube temperature was set at 30oC.Sample compounds were identified using standard 5’-nuclotides (Sigma) based on their retention time, and were quantified by comparing their peak area with relevant calibration curves of standard compounds. Each sam-ple has been determined in triplicate.

Free amino acids assay
Mushroom powder (500 mg) was diluted with 30 ml of 0.1 N HCI (guarantee reagent, Sinopharm) and had been extracted with ultrasonic for 30 min at 40 °C, for analysis of free amino acids. The suspension was centrifuged at 10,000 rpm (11,100 g) for 5 min after standing for 30 min at room temperature. The superna-tant (1 ml) blended with the some volumeof 10% sulfosalicylic acid (amalytical reagent, Sinopharm) was stood for 30 min at 4 °C, and then centrifuged at 10,000 rpm (11,100 g) for 30 min at 4 °C. 10 N NaOH was used to adjust pH value of the supernatant to 2.0 and the worken extraction was filtered through 0.22 µm mixed cellu-lose esters filter (Welch) ready to inject into an L-8900 amino acid analysis kit (Hitachi, Ltd., Tokyo, Japan).
Free amino acids were separated by an ion exchange column (4.6 mm × 60 mm, 3 µm)
With the sample size of 10 µl. The mobile phase and reaction buffer were obtained from Mitsubishi Chemical Corporation (Tokyo, Japan). Sample compounds were identified and quantified by comparing their retention time and peak area with relevant standard amino acids, Type B and Type AN-2 (Wako, Osaka, Japan). Each sample was determined in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ 5'-นิวคลีโอไทด์
สกัดตัวอย่างและวิเคราะห์ตาม Taylor และ et al. (1981) ผงเห็ด 1 g ถูกสกัด ด้วย 25 ml น้ำ deion ised ระงับการถูกความร้อนภายใต้เดือดใน 1 นาที และ centrifuged (CT15RT เครื่องหมุนเหวี่ยง เซี่ยงไฮ้ Techcomp Co., Ltd. ) ที่ 12000 รอบต่อนาที (16000 g) ใน 15 นาทีหลังจากระบายความร้อน สารตกค้างถูกสกัด ด้วยวิธีการเดียวกัน และแยกรวมถูกกรองผ่าน µm 0.22 ผสมเซลลูโลส esters ฟิลเลอร์ (Welch) พร้อมที่จะฉีดเข้ามีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC น้ำ 600 วอเตอร์ จำกัด Milord, MA USA) .
ระบบ HPLC มีประกอบด้วยวนตัวอย่าง 10 µl จับตัวทันอมม่วง และมีคอลัมน์ C18 AQ สูงสุด (250 มม. × 4 6 มม., 5µm, Welch)ระยะการเคลื่อน 10 มม. KH2PO4 (ภาษาอังกฤษ 4.68 ค่า pH, AR เกรด Sinopharm) ที่อัตราการไหลของ 1.0 ml/min และตรวจจับ UV ที่ 259 nm อุณหภูมิหลอดถูกตั้งค่าใน 30oC.Sample สารระบุใช้มาตรฐาน 5'-nuclotides (ซิกมา) โดยใช้เวลาเก็บข้อมูล และถูก quantified โดยการเปรียบเทียบพื้นที่สูงสุดของตนกับโค้งเทียบที่เกี่ยวข้องของสารมาตรฐาน กำหนดแต่ละแซมเปิ้ลใน triplicate

วิเคราะห์กรดอะมิโนอิสระ
ผงเห็ด (500 มิลลิกรัม) ถูกผสมกับ 30 ml ของ hci N 0.1 (รับประกันรีเอเจนต์ Sinopharm) และได้ถูกดึงด้วยอัลตราโซนิกใน 30 นาทีที่ 40 ° C สำหรับการวิเคราะห์กรดอะมิโนอิสระ การระงับได้ centrifuged ที่ 10000 รอบต่อนาที (11,100 g) สำหรับ 5 นาทีหลังจากยืนใน 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง Superna-tant (1 ml) ผสมกับ volumeof บาง 10% sulfosalicylic กรด (amalytical รีเอเจนต์ Sinopharm) อยู่ใน 30 นาทีที่ 4 ° C และ centrifuged แล้ว ที่ 10000 rpm (11,100 g) สำหรับ 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส 10 N NaOH ที่ใช้ปรับค่า pH ของ supernatant กับ 2.0 และแยก worken ถูกกรองผ่าน 022 µm ผสม cellu-สูญเสีย esters กรอง (Welch) พร้อมที่จะฉีดเข้าตัว L 8900 กรดอะมิโนวิเคราะห์ชุด (ฮิตาชิ จำกัด โตเกียว ญี่ปุ่น) .
กรดอะมิโนอิสระถูกแยก โดยคอลัมน์ที่มีการแลกเปลี่ยนไอออน (4.6 มม. × 60 มม. 3 µm)
10 µl ขนาดตัวอย่าง ระยะเคลื่อนและบัฟเฟอร์ของปฏิกิริยาได้รับมาจาก บริษัทมิตซูบิชิเคมี (โตเกียว ญี่ปุ่น) สารตัวอย่างได้ระบุ และ quantified โดยการเปรียบเทียบการรักษาเวลา และพื้นที่สูงสุดที่เกี่ยวข้องมาตรฐานกรดอะมิโน ชนิด B และชนิด AN-2 (Wako โอซาก้า ญี่ปุ่น) กำหนดแต่ละอย่างใน triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5'-นิวคลี assay
สกัดตัวอย่างและการวิเคราะห์ตามเทย์เลอร์และคณะ (1981) 1 กรัมผงเห็ดถูกสกัดด้วย 25 ml ของน้ำ Deion-Ised ระงับความร้อนภายใต้เดือดเป็นเวลา 1 นาที และหมุนเหวี่ยง (Centrifuge CT15RT. Techcomp จำกัด Shanghai) 12,000 (16,000 กรัม) รอบต่อนาทีนาน 15 นาทีหลังจากที่ระบายความร้อน ที่เหลือถูกสกัดด้วยวิธีการเดียวกันและการสกัดรวมถูกกรองผ่าน 0.22 ไมโครเมตรผสมเอสเทอเซลลูโลสฟิลเลอร์ (เวลช์) พร้อมที่จะฉีดเข้าไปในของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC น้ำ 600, วอเตอร์ จำกัด พระเดชพระคุณ, MA USA)
ระบบ HPLC ประกอบด้วยห่วงตัวอย่าง 10 ไมโครลิตร, เครื่องตรวจจับอัลตร้าไวโอเลตและคอลัมน์สุดยอด AQ-C18 (250 มิลลิเมตร× 4.6 มม, 5 ไมครอนเวลช์) เฟสเคลื่อนที่ได้โดยง่ายคือ 10 มิลลิ KH2PO4 (pH 4.68, AR เกรด บริษัท ซีโนฟาร์ม) ที่อัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและตรวจสอบ UV ที่ 259 นาโนเมตร อุณหภูมิหลอดตั้งอยู่ที่สารประกอบ 30oC.Sample ถูกระบุโดยใช้มาตรฐาน 5'-nuclotides (Sigma) ขึ้นอยู่กับเวลาการเก็บรักษาของพวกเขาและได้รับการวัดโดยการเปรียบเทียบพื้นที่สูงสุดของพวกเขาที่มีเส้นโค้งการสอบเทียบที่เกี่ยวข้องของสารมาตรฐาน แต่ละ sam-เปิ้ลได้รับการพิจารณาในการเพิ่มขึ้นสามเท่าฟรีกรดอะมิโนทดสอบผงเห็ด (500 มิลลิกรัม) ถูกเจือจางกับ 30 มิลลิลิตร 0.1 HCI (สารรับประกัน บริษัท ซีโนฟาร์ม) และได้รับการสกัดด้วยอัลตราโซนิกเป็นเวลา 30 นาทีที่ 40 ° C สำหรับ การวิเคราะห์ของกรดอะมิโนอิสระ ระงับถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาที (11,100 กรัม) เป็นเวลา 5 นาทีหลังจากที่ยืนเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง superna-สํา (1 มิลลิลิตร) ผสมกับบาง volumeof 10% sulfosalicylic กรด (สาร amalytical, บริษัท ซีโนฟาร์ม) ได้รับการยืนเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C และจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาที (11,100 กรัม) เป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C . 10 N NaOH ถูกใช้ในการปรับค่าพีเอชของสารละลาย 2.0 และการสกัด worken ถูกกรองผ่าน 0.22 ไมโครเมตรผสม Cellu-สูญเสียเอสเทอกรอง (เวลช์) พร้อมที่จะฉีดเข้าไปในชุดการวิเคราะห์กรดอะมิโน L-8900 (ฮิตาชิ จำกัด โตเกียว, ญี่ปุ่น) ฟรีกรดอะมิโนที่ถูกคั่นด้วยคอลัมน์แลกเปลี่ยนไอออน (4.6 มม× 60 มม, 3 ไมครอน) ด้วยขนาดของกลุ่มตัวอย่างจาก 10 ไมโครลิตร เฟสและปฏิกิริยาบัฟเฟอร์มือถือที่ได้รับจากมิตซูบิชิ Chemical Corporation (โตเกียว, ญี่ปุ่น) สารตัวอย่างที่มีการระบุและวัดโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาของพวกเขาและพื้นที่ยอดเขาที่มีกรดอะมิโนที่เกี่ยวข้องมาตรฐาน Type B และประเภท-2 (Wako, โอซาก้า, ญี่ปุ่น) แต่ละตัวอย่างถูกกำหนดในเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5 ' - เบส (
ตัวอย่างการสกัดและการวิเคราะห์ตาม Taylor และ et al . ( 1981 ) 1 กรัม เห็ดหอมผงสกัด 25 มิลลิลิตร เป็นการ deion น้ำ ถูกระงับความร้อนใต้เดือด 1 นาที ไฟฟ้า ( ct15rt เหวี่ยง . techcomp Co . , Ltd . Shanghai ) ที่ 12 , 000 ( 10 กรัม ) รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที หลังเย็นทำการสกัดด้วยวิธีเดียวกัน และกรองผ่านการสกัดรวม 0.22 µ M ผสมเซลลูโลสเทอร์ ฟิลเลอร์ ( Welch ) พร้อมที่จะฉีดเข้าไปใน high-performance liquid chromatography ( HPLC , น้ำ 600 , น้ำ Co . , นายท่าน , MA USA ) .
ระบบ HPLC จำนวน 10 ตัวอย่างµผมห่วงเป็นพิเศษสีม่วงเครื่องตรวจจับและ aq-c18 ultimate คอลัมน์ ( 250 มม. × 4.6 มม. , 5 µ M , Welch )ระยะเคลื่อนที่ 10 มม. kh2po4 ( pH 4.68 , AR เกรด sinopharm ) ที่อัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและตรวจจับยูวีที่ 259 nm . ท่อตั้งที่อุณหภูมิ 30oC สารตัวอย่างที่ถูกระบุโดยใช้มาตรฐาน 5 ' - nuclotides ( Sigma ) ขึ้นอยู่กับเวลาการเก็บรักษาของพวกเขา , และ quantified โดยเปรียบเทียบพื้นที่สูงสุดของพวกเขาที่เกี่ยวข้องกับเส้นโค้งสอบเทียบสารมาตรฐานแต่ละเปิ้ลแซมถูกกำหนดทั้งสามใบ

3
กรดอะมิโนฟรีเห็ดผง ( 500 มิลลิกรัม ) เจือจางกับ 30 มล. 0.1 N HCI ( รับประกันรีเอเจนต์ sinopharm ) และได้ถูกสกัดด้วยคลื่นอัลตราโซนิคสำหรับ 30 นาทีที่ 40 ° C , การวิเคราะห์กรดอะมิโนอิสระ ระงับได้ระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาที ( 11100 g ) เป็นเวลา 5 นาที หลังจากยืนรอ 30 นาที ที่อุณหภูมิห้องการ superna tant ( 1 มิลลิลิตร ) ผสมกับบางเท่ากับ 10% sulfosalicylic acid ( amalytical รีเอเจนต์ sinopharm ) คือยืนสำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C และระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาที ( 11100 กรัม ) สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C 10 N NaOH ที่ใช้ปรับค่า pH ของน่านกับ 2.0 และ การ worken สกัดกรองผ่าน 0cellu 22 µ M ผสมเสียเทอร์ กรอง ( Welch ) พร้อมที่จะฉีดเข้าไปใน l-8900 กรดอะมิโนการวิเคราะห์ Kit ( Hitachi , Ltd . , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) .
กรดอะมิโนอิสระจากกัน โดยการแลกเปลี่ยนไอออนคอลัมน์ ( 4.6 มิลลิเมตร× 60 มม. 3 µ m )
ด้วยขนาดตัวอย่าง 10 µลิตร ระยะที่โทรศัพท์มือถือและบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาได้จากบริษัทมิตซูบิชิเคมี ( โตเกียว , ญี่ปุ่น )สารตัวอย่างที่ถูกระบุและปริมาณโดยการเปรียบเทียบเวลาของพวกเขาและเก็บพื้นที่สูงสุด กับมาตรฐานที่เกี่ยวข้อง กรดอะมิโน ชนิด B และชนิด an-2 ( Wako โอซาก้า , ญี่ปุ่น ) แต่ละตัวอย่างตั้งใจ
ทั้งสามใบ