A sensitive and reliable high-throu

A sensitive and reliable high-throughput approach to screen lipoxygenase (LOX) mutants was developed
to permit a directed evolution study in an attempt to increase the activity and thermostability of LOX
from Anabaena sp. PCC 7120 using error-prone polymerase chain reaction (PCR) and DNA shuffling. The
best mutant, named D22, contained one key amino acid change (N305D) and its half-life of inactivation
at 50 ◦C was increased by approximately twofold in comparison to the wild-type enzyme, while specific
activity 1.87-fold higher than the wild-type enzyme. The N305D substitution was confirmed to be critical
for the thermostability and catalytic activity of LOX by site-saturation mutagenesis. Indeed, the reaction
temperature for maximum activity increased from 45 ◦C to 50 ◦C, while catalytic efficiency (kcat/Km) was
increased by 83%. This study reports for the first time on the directed evolution of the LOX from Anabaena
sp. for improving thermostability and catalytic activity, and the mutant is of potential importance in food
processing and flavor biosynthesis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มีความไวและเชื่อถือได้วิธีสูงผ่านไปยังหน้าจอ lipoxygenase (แซลมอนรมควัน)
การกลายพันธุ์ได้รับการพัฒนาเพื่อเปิดโอกาสให้การศึกษาวิวัฒนาการกำกับในความพยายามที่จะเพิ่มกิจกรรมและทนร้อนของแซลมอนรมควันจาก
Anabaena SP PCC 7120 โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอผิดพลาดได้ง่าย (PCR) และสับดีเอ็นเอ
กลายพันธุ์ที่ดีที่สุดชื่อ D22, มีการเปลี่ยนแปลงกรดอะมิโนที่สำคัญอย่างหนึ่ง (N305D)
และครึ่งชีวิตของการใช้งานที่50
◦Cได้เพิ่มขึ้นประมาณสองเท่าเมื่อเทียบกับเอนไซม์ชนิดป่าในขณะที่เฉพาะกิจกรรมที่1.87 เท่าสูงกว่า เอนไซม์ชนิดป่า การเปลี่ยนตัวผู้เล่น N305D
ได้รับการยืนยันที่จะมีความสำคัญสำหรับทนร้อนและกิจกรรมการเร่งปฏิกิริยาของแซลมอนรมควันโดยฉับเว็บไซต์อิ่มตัว อันที่จริงการเกิดปฏิกิริยาอุณหภูมิสูงสุดเป็นกิจกรรมที่เพิ่มขึ้นจาก 45 ◦Cถึง 50 ◦Cในขณะที่ประสิทธิภาพการใช้ตัวเร่งปฏิกิริยา (kcat / กิโลเมตร) ได้เพิ่มขึ้น83% รายงานการศึกษานี้เป็นครั้งแรกในวิวัฒนาการของแซลมอนรมควันจาก Anabaena SP สำหรับการปรับปรุงการทนร้อนและการเร่งปฏิกิริยาและกลายพันธุ์เป็นสิ่งที่สำคัญที่อาจเกิดขึ้นในอาหารการประมวลผลและการสังเคราะห์รสชาติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อ่อนไหวง่ายและเชื่อถือได้วิธีการที่จะช่วยจอภาค ( LOX ) กลายพันธุ์พัฒนา
ให้ผู้กํากับวิวัฒนาการศึกษาในความพยายามที่จะเพิ่มกิจกรรมของ Anabaena sp . LOX ทดล
จาก PCC 7120 ข้อผิดพลาดมักจะใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่และดีเอ็นเอสับไพ่
ชื่อ d22 ที่ดีที่สุด , กลายพันธุ์มีอยู่หนึ่งที่สำคัญในการเปลี่ยนกรดอะมิโน ( n305d ) และค่าครึ่งชีวิตของการยับยั้ง
ที่ 50 ◦ C เพิ่มขึ้นประมาณสองเท่าในการผลิตเอนไซม์ โดยเฉพาะ
1.87-fold สูงกว่ากิจกรรมของเอนไซม์ การ n305d ทดแทนได้รับการยืนยันเป็นวิกฤต
สำหรับทดลและฤทธิ์ของความอิ่มตัวของออกซิเจนเหลว โดยเว็บไซต์ . แน่นอน , ปฏิกิริยา
อุณหภูมิสูงสุดสำหรับกิจกรรมเพิ่มขึ้นจาก 45 ◦ C 50 ◦ C ในขณะที่ประสิทธิภาพการ ( kcat / km ) คือ
เพิ่มขึ้น 83 % การศึกษานี้ได้รายงานครั้งแรกในกำกับวิวัฒนาการของปลาแซลมอนรมควันจาก Anabaena sp . สำหรับการปรับปรุงกิจกรรมทดล
และ catalytic และกลายพันธุ์เป็นศักยภาพสำคัญในการประมวลผลอาหาร
และรสชาติใน .