Confirming expression of FTWe const

Confirming expression of FT
We constructed the plasmid shown in the Fig.1-2. One was FT gene with T7 promoter (BBa_I719005) and 6His tag, and the other was FT gene only with T7 promoter. T7 promoter is a strong promotor regulated by T7 polymerase. In our strain of E.coli, the expression of T7 polymerase can be induced by IPTG. 6His tag, which is used in later steps, enabled us to purify FT protein from E.coli using affinity chromatography.
We needed to confirm that E. coli can express FT protein, because there was a possibility that E.coli can not translate FT or FT is unstable or toxic in E.coli.
In order to confirm the expression of FT protein, we performed Western blotting using anti-FT antibody.
As a result, we observed FT and 6 His:FT bands at the expected molecular weight region(Fig.1-2).
So we successfuly confirmed the FT expression!

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยืนยันของฟุตเราสร้าง plasmid ที่แสดงใน Fig.1-2 หนึ่งฟุตยีนโปรโมเตอร์ T7 (BBa_I719005) และแท็ก 6His และอื่น ๆ ได้ยีนฟุตเท่ากับโปรโมเตอร์ T7 โปรโมเตอร์ T7 มี promotor ที่แข็งแกร่งที่ควบคุม โดยพอลิเมอเรส T7 ในสายพันธุ์ของเราของ E.coli นิพจน์ของพอลิเมอเรส T7 สามารถเหนี่ยวนำ ด้วย IPTG แท็ก 6His ซึ่งใช้ในขั้นตอนภายหลัง เปิดใช้งานเราให้บริสุทธิ์โปรตีนฟุตจาก E.coli โดยใช้ความสัมพันธ์ chromatographyเราต้องยืนยันว่า E. coli สามารถแสดงโปรตีนฟุต เนื่องจากมีความเป็นไปได้ที่ไม่สามารถแปล E.coli ฟุตหรือฟุตคือพิษใน E.coli หรือไม่เสถียร เพื่อยืนยันการแสดงออกของโปรตีนฟุต เราทำการ blotting วิธีตะวันตกใช้แอนติบอดีต้านฟุตเป็นผล เราสังเกตฟุตและ 6 ของเขา: วงฟุตที่ region(Fig.1-2) น้ำหนักโมเลกุลที่คาดไว้ดังนั้น เราเรียบร้อยยืนยันนิพจน์ฟุต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยืนยันการแสดงออกของ FT
เราสร้างพลาสมิดที่แสดงใน Fig.1-2 หนึ่งคือยีน FT กับโปรโมเตอร์ T7 (BBa_I719005) และแท็ก 6His และอื่น ๆ ที่เป็น FT ยีนเฉพาะกับโปรโมเตอร์ T7 โปรโมเตอร์ T7 เป็นโปรโมเตอร์ที่แข็งแกร่งควบคุมโดย T7 โพลิเมอร์ ในสายพันธุ์ของเชื้อ E.coli ของเราแสดงออกของ T7 โพลิเมอร์สามารถชักนำโดย IPTG แท็ก 6His ซึ่งจะใช้ในขั้นตอนต่อมาให้เราในการชำระล้างโปรตีน FT จาก E.coli ใช้โครมาเป็นพี่น้องกัน.
เราจำเป็นต้องยืนยันว่าเชื้อ E. coli สามารถแสดงโปรตีน FT เพราะมีความเป็นไปได้ว่า E.coli ไม่สามารถแปล FT หรือ FT ไม่เสถียรหรือเป็นพิษใน E.coli.
เพื่อยืนยันการแสดงออกของโปรตีน FT ที่เราดำเนินการโดยใช้วิธี western blotting ป้องกัน FT แอนติบอดี.
เป็นผลให้เราสังเกต FT และ 6 ของพระองค์วง FT ที่คาดว่าภูมิภาคที่มีน้ำหนักโมเลกุล (Fig.1-2).
ดังนั้นเราสำเร็จแล้วได้รับการยืนยันการแสดงออก FT!

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยืนยันการแสดงออกของฟุตเราสร้างพลาสมิดที่แสดงใน fig.1-2 . หนึ่งคือฟุตจีนกับโปรโมเตอร์ * * 3 ( bba_i719005 ) และ 6his แท็ก , และอื่น ๆฟุตกับโปรโมเตอร์ยีนเพียง * * 3 . * * 3 โปรโมเตอร์จะแข็งแรง Promotor การควบคุมโดยวิธี * * 3 . ในสายพันธุ์ของ E.coli , การแสดงออกของการกระตุ้นด้วยเอนไซม์สามารถ * * 3 . 6his แท็ก ซึ่งจะใช้ในขั้นตอนต่อไป ช่วยให้เราสามารถให้โปรตีนฟุตจาก E.coli ใช้ขี้รังแค .เราต้องการยืนยันว่า E . coli สามารถแสดงโปรตีนฟุต เนื่องจากมีความเป็นไปได้ว่า E.coli ไม่แปลฟุตหรือฟุตจะเสถียรหรือสารพิษใน E.coliเพื่อยืนยันการแสดงออกของโปรตีน ft เราแสดง Western blotting โดยใช้แอนติบอดีต่อต้าน ftเป็นผลให้เราสังเกตฟุตและ 6 ฟุตของเขา : วงดนตรีที่คาดว่าโมเลกุลภูมิภาค ( fig.1-2 )ดังนั้นเราก็สามารถยืนยันฟุตแสดง !