Restriction fragment length polymor

Restriction fragment length polymorphism (RFLP) and
antibiotic susceptibility analysis of the MDR-plasmid
Large plasmids (> 50 kb) of 17 AMP and STR-resistant S.
Braenderup isolates were characterized. Plasmid DNA was
purified from resistant wild-type isolates by the alkaline
lysis method [42] and then transformed into the competent
E. coli strain pir116 (STRR), which was prepared by
the CaCl2 method. Transformants were selectively grown
on LB agar plates supplemented with AMP (100 μg/ml)
and further tested for resistance to CHL, TET, and KAN,
but not for resistance to STR, since the recipient strain was
inherently resistant to streptomycin. The antibiotic resistance
genes blaTEM, aadA, and blaCMY-2, class 1 integron as
well as the insertion sequence IS26 and its related DNA
fragments were amplified using the primers listed in Table
4. The genes blaSHV and blaCTX-M3 and M14 were also detected
by the multiplex method [43]. The R-plasmids of each
transformant were purified by use of the Geneaid Plasmid
Midi Kit (Geneaid, Taiwan) and were digested with HindIII
(New England Biolabs, USA) to determine similarity.
Plasmid DNA fragments were separated by electrophoresis
through a 0.6 % SeaKem GTG agarose gel (Cambrex
Bio Science Rockland, Inc., Rockland, ME, USA) at 25 V
for 16 h. The PCR product of class 1 integron was purified
by DNA Clean/Extraction kit (GeneMark, Taiwan) and
sequenced by Mission Biotech co. (Taiwan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ข้อจำกัดส่วนความยาวโพลีมอร์ฟิซึม (RFLP) และวิเคราะห์ภูมิไวรับยาปฏิชีวนะ MDR-plasmidPlasmids ขนาดใหญ่ (> 50 kb) 17 แอมป์และ S. STR ทนBraenderup ที่แยกได้มีลักษณะการ มี plasmid DNAบริสุทธิ์จากป่าชนิดแยกทน โดยอัลคาไลน์วิธีการ lysis [42] และจากนั้น เปลี่ยนเป็นการมีอำนาจPir116 ต้องใช้ e. coli (STRR), ซึ่งถูกจัดทำโดยวิธี CaCl2 Transformants ได้เลือกปลูกบนแผ่น agar ปอนด์เสริม ด้วยแอมป์ (100 μg/ml)และทดสอบเพิ่มเติมสำหรับความต้านทาน การ CHL, TET กันแต่ไม่ทนต่อ STR เนื่องจากมีพันธุ์ผู้รับมีความทนทานต่อการ streptomycin ต้านทานยาปฏิชีวนะยีน blaTEM, aadA และ blaCMY-2, integron 1 เป็นคลาสรวมทั้งลำดับแทรก IS26 และดีเอ็นเอเกี่ยวข้องชิ้นส่วนถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ที่แสดงอยู่ในตาราง4.ยีน blaSHV และ blaCTX M3 และ M14 ยังพบโดยวิธี multiplex [43] Plasmids R ของแต่ละtransformant ได้บริสุทธิ์ โดยใช้ Geneaid Plasmidชุด Midi (Geneaid ไต้หวัน) และถูกต้องกับ HindIII(นิวอิงแลนด์ Biolabs สหรัฐอเมริกา) เพื่อตรวจสอบความคล้ายคลึงกันบางส่วนของ plasmid DNA ถูกคั่น ด้วย electrophoresisถึง 0.6% SeaKem GTG agarose เจล (CambrexRockland วิทยาศาสตร์ชีวภาพ Inc., Rockland, ME สหรัฐอเมริกา) ที่ 25 Vสำหรับ 16 h ผลิตภัณฑ์ PCR ของคลาส 1 integron ที่บริสุทธิ์โดยชุดสะอาด/สกัดดีเอ็นเอ (GeneMark ไต้หวัน) และเรียงลำดับตามภารกิจเทคโนโลยีชีวภาพ co. (ไต้หวัน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความแตกต่างส่วนระยะเวลาในการ จำกัด (RFLP)
และการวิเคราะห์ความไวต่อยาปฏิชีวนะของMDR-พลาสมิดพลาสมิดขนาดใหญ่ (> 50 กิโลไบต์) 17 แอมป์และ STR ทนเอส Braenderup แยกโดดเด่น ดีเอ็นเอถูกบริสุทธิ์จากป่าชนิดทนแยกจากอัลคาไลน์วิธีการสลาย[42] และจากนั้นกลายเป็นอำนาจอี coli สายพันธุ์ pir116 (STRR) ซึ่งจัดทำโดยวิธีCaCl2 Transformants ปลูกคัดเลือกบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อLB เสริมด้วยแอมป์ (100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) และผ่านการทดสอบต่อไปสำหรับความต้านทานต่อการ CHL, TET และ KAN, แต่ไม่ได้สำหรับความต้านทานต่อการ STR เนื่องจากความเครียดเป็นผู้รับทนโดยเนื้อแท้streptomycin ความต้านทานยาปฏิชีวนะยีน blaTEM, Aada และ blaCMY-2, ชั้น 1 integron เป็นเดียวกับการแทรกลำดับIS26 และดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้องเศษถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ที่ระบุไว้ในตารางที่4 ยีนและ blaSHV โดย blaCTX-M3 และ M14 ยังตรวจพบด้วยวิธีการหลายส่วน[43] การวิจัยพลาสมิดของแต่ละtransformant ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ Geneaid พลาสมิดMidi Kit (Geneaid ไต้หวัน) และได้รับการย่อยด้วย HindIII (นิวอิงแลนด์ Biolabs, สหรัฐอเมริกา) เพื่อตรวจสอบความคล้ายคลึงกัน. ชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ถูกแยกจากกันโดยอิเล็กผ่าน 0.6% SeaKem GTG เจล agarose (Cambrex Bio วิทยาศาสตร์ร็อกแลนด์, Inc ร็อกแลนด์, ME, USA) ที่ 25 V 16 ชั่วโมง ผลิตภัณฑ์ PCR ของชั้น 1 integron บริสุทธิ์โดยดีเอ็นเอสะอาด/ ชุดสกัด (GeneMark ไต้หวัน) และลำดับขั้นตอนโดยภารกิจไบโอเทคร่วม (ไต้หวัน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จำกัด fragment length polymorphism ( RFLP ) และการวิเคราะห์ความไวของยาปฏิชีวนะ

( 2547 ) พลาสมิดขนาดใหญ่ 50 KB ) 17 แอมป์และ STR ทน S .
braenderup สายพันธุ์มีลักษณะ . พลาสมิดดีเอ็นเอของสายพันธุ์บริสุทธิ์ทนจาก

วิธีการผลิตจากด่าง [ 42 ] และแปลงแล้วเป็น pir116 เชี่ยวชาญ
E . coli สายพันธุ์ ( strr ) ซึ่งเตรียมโดย