PCR was done in an MJ Research PTC2

PCR was done in an MJ Research PTC200 thermal cycler and the products resolved on 1.2% agarose gel in Tris–boric acid/EDTA buffer with a constant voltage of 80 in parallel using standard markers. The PCR amplified DNA samples were purified using QIAquick gel extraction and PCR purification kits (Qiagen) followed by cloning in TA cloning vector (pTZ57RT – Fermentas) as per protocols indicated by respective manufacturers. The cloned column purified plasmid DNA samples were PCR amplified with gene specific as well as M13 primers to confirm the insert DNA in the vector and sequenced using M13 primers at Eurofins Genomics India Pvt. Ltd., Bangalore. The multiple sequence alignment and phylogenetic relationship of the Indian isolate of DNV-2 with Chinese and Japanese DNV-2 isolates were analyzed using ClustalW and MEGA 5.1 programs, respectively and accordingly grouped into clusters of sequences belonging to the same gene.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำ PCR cycler มีร้อน MJ PTC200 วิจัยและผลิตภัณฑ์แก้ไขบนเจ agarose 1.2% ในทริสเรทติ้ง – boric กรด/EDTA บัฟเฟอร์ ด้วยแรงดันคงที่ 80 พร้อมกันโดยใช้เครื่องหมายมาตรฐาน PCR การขยายดีเอ็นเอตัวอย่างที่บริสุทธิ์ที่ใช้สกัดเจ QIAquick และ PCR ฟอกชุด (Qiagen) ตามโคลนตามโปรโตคอลที่ระบุ โดยผู้ผลิตที่เกี่ยวข้องใน TA โคลนเวกเตอร์ (pTZ57RT – Fermentas) คอลัมน์โคลนบริสุทธิ์ plasmid DNA ตัวอย่างถูก PCR ขยายกับยีนเฉพาะและไพรเมอร์ M13 ยืนยันดีเอ็นเอแทรกในเวกเตอร์ และเรียงลำดับโดยใช้ไพรเมอร์ M13 ที่ Eurofins Genomics อินเดีย pvt. จำกัด บังกาลอร์ ลำดับหลายตำแหน่งและความสัมพันธ์ phylogenetic ของอินเดียแยก DNV 2 กับจีน และญี่ปุ่น DNV 2 แยกได้วิเคราะห์โดยใช้โปรแกรม ClustalW และ MEGA 5.1 ตามลำดับ และตามการจัดกลุ่มเป็นคลัสเตอร์ของลำดับของยีนเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR ได้ทำใน Cycler ความร้อนวิจัย MJ PTC200 และผลิตภัณฑ์มีมติเมื่อวันที่ 1.2% agarose เจลในกรดบอริก-Tris / บัฟเฟอร์ EDTA กับแรงดันคงที่ 80 ในแบบคู่ขนานโดยใช้เครื่องหมายมาตรฐาน PCR ขยายตัวอย่างดีเอ็นเอถูกสกัดบริสุทธิ์โดยใช้เจล QIAquick และ PCR ชุดฟอก (Qiagen) ตามด้วยโคลนในโคลน TA เวกเตอร์ (pTZ57RT - Fermentas) ตามโปรโตคอลที่ระบุโดยผู้ผลิตที่เกี่ยวข้อง โคลนตัวอย่างดีเอ็นเอพลาสมิดบริสุทธิ์คอลัมน์ถูกขยาย PCR ที่มียีนที่เฉพาะเจาะจงเช่นเดียวกับไพร M13 เพื่อยืนยันดีเอ็นเอแทรกในเวกเตอร์และหาลำดับโดยใช้ไพรเมอร์ M13 ที่ Eurofins ฟังก์ชั่น India Pvt จำกัด , บังกาลอร์ ลำดับการจัดเรียงหลายและความสัมพันธ์ของสายวิวัฒนาการแยกอินเดีย DNV-2 กับจีนและญี่ปุ่นเชื้อ DNV-2 ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ ClustalW และ MEGA 5.1 โปรแกรมตามลำดับและจัดกลุ่มตามเข้าไปในกลุ่มของลำดับที่อยู่ในประเภทยีนเดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีทำใน ptc200 วิจัย MJ ความร้อนวงจรและผลิตภัณฑ์การแก้ไขบน 1.2 % เจลในบริษัท–กรด EDTA บัฟเฟอร์ที่มีแรงดันคงที่ / 80 ในแบบขนานโดยใช้เครื่องหมายมาตรฐานการตรวจดีเอ็นเอตัวอย่างมีความบริสุทธิ์ของการสกัดและการ qiaquick เจล PCR ชุด ( เพิ่ม ) ตามด้วยการโคลนนิ่งในเวกเตอร์โคลนทา ( ptz57rt – fermentas ) ตามโปรโตคอลที่ระบุโดยผู้ผลิตที่เกี่ยวข้องโคลนบริสุทธิ์มีพลาสมิดดีเอ็นเอตัวอย่างคอลัมน์ PCR ของยีนที่เฉพาะเจาะจงรวมทั้ง M13 ไพรเมอร์เพื่อยืนยันการแทรกดีเอ็นเอในเวกเตอร์และลำดับเบสโดยใช้ไพรเมอร์ที่ eurofins M13 ในอินเดีย Pvt . จำกัด อินเดียหลายลำดับการวิวัฒนาการและความสัมพันธ์ของอินเดียกับจีนและญี่ปุ่น และ dnv-2 dnv-2 แยกวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ clustalw และ Mega 5.1 โปรแกรมตามลำดับ และตาม แบ่งออกเป็นกลุ่มของลำดับของยีนเดียวกัน