3.2. Microorganisms
Pure cultures of target microorganisms included four representative
mycobacteria, namely Mycobacterium fortuitum,
Tsukamurella pauromycobacterium, Rhodococcus equi, and
Gordonia amarae. Pure cultures of Escherichia coli (Gammasubclass
Proteobacteria), Bacillus subtilis (Low G+C Gram
positive), and Paenibacillus polymyxa (Low G+C Gram positive)
were tested as negative controls. The cultures were grown
in commercially available Middelbrook medium for mycobacteria
(Difco Laboratories, Detroit, MI) or Luria Bertani (LB)
medium for all other microorganisms (10 g tryptone, 5 g yeast
extract, and 10 g NaCl per liter H2O, at a pH of 7) from stock
cultures maintained at 4 ◦C on 1.5% agar plates prepared with
Middelbrook (for mycobacteria) or LB medium. Batch cultures
of microorganisms were centrifuged at 10,000×g for 10 min,
and re-suspended in Czapek broth (3 g NaNO3, 1g K2HPO4,
0.5 g MgSO4–H2O, 0.5 g KCl, and 0.01 g FeSO4 per liter H2O)
in 50-mL conical tubes.
3.2. MicroorganismsPure cultures of target microorganisms included four representativemycobacteria, namely Mycobacterium fortuitum,Tsukamurella pauromycobacterium, Rhodococcus equi, andGordonia amarae. Pure cultures of Escherichia coli (GammasubclassProteobacteria), Bacillus subtilis (Low G+C Grampositive), and Paenibacillus polymyxa (Low G+C Gram positive)were tested as negative controls. The cultures were grownin commercially available Middelbrook medium for mycobacteria(Difco Laboratories, Detroit, MI) or Luria Bertani (LB)medium for all other microorganisms (10 g tryptone, 5 g yeastextract, and 10 g NaCl per liter H2O, at a pH of 7) from stockcultures maintained at 4 ◦C on 1.5% agar plates prepared withMiddelbrook (for mycobacteria) or LB medium. Batch culturesof microorganisms were centrifuged at 10,000×g for 10 min,and re-suspended in Czapek broth (3 g NaNO3, 1g K2HPO4,0.5 g MgSO4–H2O, 0.5 g KCl, and 0.01 g FeSO4 per liter H2O)in 50-mL conical tubes.
การแปล กรุณารอสักครู่..
3.2 จุลินทรีย์วัฒนธรรมบริสุทธิ์ของจุลินทรีย์เป้าหมายรวมสี่ตัวแทนเชื้อมัยโคแบคทีเรียคือfortuitum Mycobacterium, Tsukamurella pauromycobacterium, Rhodococcus equi และGordonia amarae วัฒนธรรมบริสุทธิ์ของเชื้อ Escherichia coli (Gammasubclass Proteobacteria) เชื้อ Bacillus subtilis (ต่ำ G + C แกรมบวก) และ Paenibacillus polymyxa (ต่ำ G + C แกรมบวก) ได้มีการทดสอบการควบคุมเชิงลบ วัฒนธรรมที่มีปลูกในสื่อ Middelbrook ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์สำหรับเชื้อมัยโคแบคทีเรีย (Difco ห้องปฏิบัติการ, ดีทรอยต์, มิชิแกน) หรือ Luria Bertani (LB) สื่อกลางในการจุลินทรีย์อื่น ๆ (10 กรัม tryptone, 5 กรัมยีสต์สารสกัดและ10 กรัมโซเดียมคลอไรด์ต่อลิตร H2O, ที่ ค่า pH 7) จากสต็อกวัฒนธรรมที่เก็บรักษาไว้ที่4 ◦C 1.5% ในจานอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปรุงด้วยMiddelbrook (สำหรับเชื้อมัยโคแบคทีเรีย) หรือขนาดกลาง LB Batch วัฒนธรรมของจุลินทรีย์ถูกหมุนเหวี่ยงที่10,000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที, และอีกครั้งที่ลอยอยู่ในน้ำซุป Czapek (3 กรัม NaNO3, 1g K2HPO4, 0.5 กรัม MgSO4-H2O, โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5 กรัมและ 0.01 กรัมต่อลิตร FeSO4 H2O) ใน 50 มิลลิลิตรหลอดรูปกรวย
การแปล กรุณารอสักครู่..
3.2 . จุลินทรีย์
เชื้อบริสุทธิ์ของจุลินทรีย์ไมโคเป้าหมายรวมสี่ตัวแทน
fortuitum ได้แก่เชื้อ , tsukamurella pauromycobacterium rhodococcus เท่ากัน , ,
gordonia amarae . เชื้อบริสุทธิ์ของเชื้อ Escherichia coli ( gammasubclass
โพรทีโอแบคทีเรีย ) , Bacillus subtilis ( Low G C กรัม
บวก ) และ paenibacillus polymyxa ( Low G C กรัมบวก )
ทดสอบเป็นตัวควบคุมลบวัฒนธรรมปลูก
ในกลาง middelbrook ในเชิงพาณิชย์สำหรับไมโค
( difco ห้องปฏิบัติการ , Detroit , MI ) หรือลุเรียแบร์ตานิ ( LB )
) เชื้อจุลินทรีย์อื่น ๆทั้งหมด ( 10 กรัม ทริพโทน 5 กรัมยีสต์
Extract และ 10 กรัมต่อลิตร เกลือ H2O ที่พีเอช 7 ) จากตลาดหลักทรัพย์
วัฒนธรรมยังคงที่ 4 ◦ C 1.5% วุ้นแผ่นเตรียมไว้ด้วย
middelbrook ( ไมโค ) หรือปอนด์ )
ชุดวัฒนธรรมของเชื้อจุลินทรีย์ในระดับที่ 10 × G 10 นาที
และแขวนลอยในน้ำซุปอาหาร Czapek ( 3 G NaNO3 k2hpo4 1g , ,
0.5 กรัม MgSO4 ใ– H2O , 0.5 กรัมโพแทสเซียม และ feso4 0.01 กรัมต่อลิตร H2O )
ใน 50 มล. หลอดรูปกรวย .
การแปล กรุณารอสักครู่..