Chromatographic conditionsThe HPLC

Chromatographic conditions
The HPLC system consisted of a Waters 2690 Alliance HPLC
system (Milford, MA), a Waters 996 PDA detector and a
Shimadzu RF 535 fluorescence detector (Kyoto, Japan),controlled by Waters Millennium32 data management software,
4.0 edition. AWaters Spherisorb 3 μmODS2, 4.6 × 250mmanalytical
column was used for the separation of all components.
The chromatographic separation was performed by isocratic
elution with a mixture of acetonitrile and methanol (65:35, v/v)
containing 0.065%of triethylamine at a flow rate of 1.5mL/min.
The temperatures of the sample chamber and column oven were
10°C and 30°C, respectively. The injection volume on the
column was 10 μL. The PDA detection wavelength range was
from 200 to 500 nm. The fluorescence detector parameters were
as follows: excitation wavelength, 285 nm; emission wavelength,
325 nm; response, medium; sensitivity, high; and range, 1024.
The concentrations of δ-, γ-, α-tocopherol, and α-tocopherol
acetate (IS1) were determined by fluorescence
detection. The carotenoids lutein,
zeaxanthin, canthaxanthin, β-cryptoxanthin,
lycopene, α-carotene, β-carotene, and
echinenone (IS3) were quantified at 450
nm, and all-trans-retinol and retinyl
acetate (IS2) were measured at 326 nm by
PDA detection.
Calibration curves and quantification
External standard calibration curves
were constructed by plotting the peak-area
ratio of the analyte-internal standard
against the concentration of the analyte. A
linear least-squares regression analysis was
performed for each analyte, and the final
calibration curve for each analyte was the
average based on ten-time replicates in
which the correlation coefficient was above
0.99. Plasma concentrations of each analyte
were quantified on the final calibration
curves.
Recovery, reproducibility, and precision
For reproducibility and recovery studies,
pooled human plasma samples were supplemented
with different concentrations of
the analytes of interest. Twelve sets of
enriched samples were prepared to give the
concentrations listed in Table II. Analyses
were carried out within 24 h for within-day
variation, and between-day variation was
determined by repeating the same assay
once a week for 6 consecutive weeks. Two
lyophilized standard reference materials
(SRM 968c) from NIST were processed to
determine the accuracy of the method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สภาพโครมาระบบ HPLC ประกอบด้วย HPLC เป็นพันธมิตรน้ำ 2690ระบบ (ลฟอร์ด MA), เครื่องตรวจจับน้ำ 996 PDA และจับเรืองแสง Shimadzu RF 535 (เกียวโต ญี่ปุ่น), ควบคุม โดยซอฟต์แวร์การจัดการข้อมูลน้ำ Millennium32รุ่น 4.0 AWaters Spherisorb 3 μmODS2, 4.6 × 250mmanalyticalคอลัมน์ถูกใช้สำหรับการแยกของส่วนประกอบทั้งหมดทำการแยกโครมา โดย isocraticชะ ด้วย acetonitrile และเมทานอล (65:35, v/v)ประกอบด้วย 0.065%of triethylamine 1.5 mL/min อัตราการไหลอุณหภูมิของเตาอบ chamber และคอลัมน์อย่างถูก10° C และ 30° C ตามลำดับ เสียงฉีดคอลัมน์ถูก 10 μL มีช่วงความยาวคลื่นตรวจจับ PDAจาก 200 เป็น 500 nm พารามิเตอร์การตรวจจับการเรืองแสงได้ดังนี้: กระตุ้นความยาวคลื่น 285 nm ปล่อยความยาวคลื่น325 nm ตอบ ปานกลาง ความไว สูง และ ช่วง 1024ความเข้มข้นของδ γ- α-tocopherol และα-tocopherolอะซิเตท (IS1) ดำเนินการ โดยเรืองแสงตรวจจับ ลูทีแคโรทีนอยด์นซีแซนทีนและ canthaxanthin β- ผลไลโคปีน แคโรทีน-α β-แคโรทีน และechinenone (IS3) ถูกวัดที่ 450nm และทั้งหมดทรานส์-retinol และ retinylอะซิเตท (IS2) ถูกวัดที่ 326 nm โดยการตรวจจับ PDAเส้นโค้งการสอบเทียบและการนับเส้นโค้งมาตรฐานภายนอกถูกสร้างขึ้น โดยพล็อตบริเวณจุดสูงสุดสม analyte ภายในมาตรฐานกับความเข้มข้นของ analyte Aแก้ไขวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้นอย่างน้อยสี่เหลี่ยมดำเนินการสำหรับแต่ละ analyte และสุดท้ายคือเส้นโค้งของการสอบเทียบสำหรับแต่ละ analyteค่าเฉลี่ยตามช่วงเวลาที่สิบเหมือนกับในซึ่งค่าสัมประสิทธิ์ความสัมพันธ์ข้างต้น0.99 ความเข้มข้นละ analyteถูกวัดสอบเทียบขั้นสุดท้ายเส้นโค้งกู้คืน การแสดง และความแม่นยำสำหรับการแสดงและศึกษาการกู้คืนตัวอย่างพลาสมามนุษย์ pooled ได้เสริมมีความเข้มข้นแตกต่างกันสารวิเคราะห์น่าสนใจ ชุดที่สิบสองมีเตรียมตัวอย่างเข้มข้นเพื่อให้การความเข้มข้นที่ระบุไว้ในตาราง II วิเคราะห์ดำเนินการภายใน 24 ชั่วโมงภายในวันเปลี่ยนแปลง และระหว่างวันเปลี่ยนแปลงกำหนด โดยการทำซ้ำการทดสอบเดียวกันสัปดาห์ละครั้งติดต่อกัน 6 สัปดาห์ สองlyophilized วัสดุอ้างอิงมาตรฐาน(SRM 968c) จาก NIST ถูกประมวลผลเพื่อตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เงื่อนไข Chromatographic
ระบบ HPLC ประกอบด้วยน้ำ 2,690 พันธมิตร HPLC
ระบบ (ฟอร์ด, MA) เครื่องตรวจจับ PDA น้ำ 996 และ
Shimadzu RF 535 เครื่องตรวจจับการเรืองแสง (เกียวโตญี่ปุ่น), การควบคุมโดยซอฟต์แวร์การจัดการข้อมูลน้ำ Millennium32,
4.0 รุ่น AWaters Spherisorb 3 μmODS2 4.6 × 250mmanalytical
คอลัมน์นี้ถูกนำมาใช้สำหรับการแยกส่วนประกอบทั้งหมด
การแยกสารได้ดำเนินการโดย isocratic
elution ที่มีส่วนผสมของ acetonitrile และเมทานอล (65:35, v / v)
มี 0.065% ของ triethylamine ในอัตราการไหลของ 1.5ml / นาที
อุณหภูมิของเตาอบห้องตัวอย่างและคอลัมน์เป็น
10 องศาเซลเซียสและ 30 องศาเซลเซียสตามลำดับ ปริมาณการฉีดใน
คอลัมน์ 10 ไมโครลิตร ช่วงการตรวจสอบ PDA ความยาวคลื่นเป็น
200-500 นาโนเมตร เรืองแสงพารามิเตอร์ตรวจจับได้
ดังต่อไปนี้: ความยาวคลื่นกระตุ้น 285 นาโนเมตร; ความยาวคลื่นปล่อยก๊าซเรือนกระจก
325 นาโนเมตร; การตอบสนองของกลาง; ความไวสูง และช่วง 1024
ความเข้มข้นของδ-, γ-, αโทโคฟีรอและαโทโคฟีรอ
อะซิเตท (IS1) ถูกกำหนดโดยการเรืองแสง
การตรวจสอบ carotenoids ลูทีน
ซีแซนทีน, canthaxanthin, β-cryptoxanthin,
ไลโคปีนαแคโรทีนβแคโรทีนและ
echinenone (IS3) เป็นวัดที่ 450
นาโนเมตรและทุกทรานส์เรตินและ retinyl
อะซิเตท (is2) เป็นวัดที่ 326 นาโนเมตร โดย
การตรวจสอบ PDA
เส้นโค้งการสอบเทียบและการหาปริมาณ
มาตรฐานภายนอกเส้นโค้งการสอบเทียบ
ที่ถูกสร้างขึ้นโดยพล็อตจุดสูงสุดของพื้นที่
อัตราส่วนของมาตรฐานวิเคราะห์ภายใน
กับความเข้มข้นของการวิเคราะห์
การวิเคราะห์การถดถอยน้อยสี่เหลี่ยมเชิงเส้นได้รับการ
ดำเนินการสำหรับแต่ละวิเคราะห์และสุดท้าย
กราฟมาตรฐานสำหรับแต่ละวิเคราะห์เป็น
เฉลี่ยอยู่บนพื้นฐานของสิบเวลาซ้ำใน
ที่ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์สูงกว่า
0.99 ความเข้มข้นในพลาสมาของแต่ละวิเคราะห์
ถูกวัดในการสอบเทียบสุดท้าย
โค้ง
การกู้คืนการทำสำเนาและความแม่นยำ
สำหรับการทำสำเนาและการกู้คืนการศึกษา
รวบรวมตัวอย่างพลาสมามนุษย์ถูกเสริม
ที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันของ
สารที่น่าสนใจ สิบสองชุด
ตัวอย่างที่อุดมได้เตรียมที่จะให้
ความเข้มข้นของการระบุไว้ในตารางที่สอง วิเคราะห์
ได้ดำเนินการภายใน 24 ชั่วโมงภายในวัน
เปลี่ยนแปลงและการเปลี่ยนแปลงระหว่างวันที่ถูก
กำหนดโดยการทำซ้ำการทดสอบเดียวกัน
สัปดาห์ละครั้งเป็นเวลา 6 สัปดาห์ติดต่อกัน สอง
แห้งวัสดุอ้างอิงมาตรฐาน
(SRM 968c) จาก NIST ถูกประมวลผลเพื่อ
ตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการ