SDS–PAGE was performed, as describe

SDS–PAGE was performed, as described by Laemmli (1970). Samples were resolved on 10% polyacrylamide gels containing 0.1% SDS at room temperature. After electrophoresis, gels were stained with Coomassie Brilliant Blue R-250. The proteins separated by SDS–PAGE were electrically transferred onto polyvinylidene difluoride (PVDF) transfer membrane (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA) in transfer buffer (Tris-base 3.04 g, glycine 14.41 g, and 200 mL methanol) for overnight. The membrane was soaked in PBS-T buffer (Na2HPO4 5.75 g, NaH2-
PO4?2H2O 1.48 g, NaCl 2.92 g, and Tween-20 0.5 mL) added with 5% skim milk for 1 h. After being washed three times in PBS-T buffer, the membrane was incubated for 2 h with His-tag antibody.

Membrane washing was repeated three times with PBS-T buffer and then bands were visualized by the reaction ECL Western blotting detection reagents (GE Healthcare Biosciences, Pittsburgh, PA,USA) on the membrane.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

SDS-หน้าดำเนินการ ตามที่อธิบายไว้ โดย Laemmli (1970) ตัวอย่างได้รับการแก้ไขบน 10% การตรวจสอบวิเคราะห์เจที่ประกอบด้วย SDS 0.1% ที่อุณหภูมิห้อง หลังจากอิ เจถูกย้อม ด้วย Coomassie Blue สดใส R-250 โปรตีนโดย SDS – หน้าไฟฟ้าถ่ายโอนลง polyvinylidene difluoride (PVDF) โอนเยื่อ (ออก Amersham ปิสกาตาเวย์ นิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา) ในบัฟเฟอร์โอน (ทริสเรทติ้งฐาน 3.04 g, glycine 14.41 g และเมทานอล 200 มล.) สำหรับหลาย เมมเบรนถูกแช่ใน PBS T บัฟเฟอร์ (Na2HPO4 5.75 กรัม NaH2-PO4 ? 2H2O 1.48 กรัม NaCl 2.92 g และ 20 แต่ 0.5 mL) เพิ่ม ด้วยนมพร่องมันเนย 5% สำหรับ 1 ชั่วโมง หลังล้างสามครั้งในบัฟเฟอร์ PBS T เมมเบรน incubated สำหรับชั่วโมงที่ 2 มีแอนติบอดีของแท็ก ล้างเมมเบรนถูกซ้ำสามครั้งกับบัฟเฟอร์ PBS T และวงดนตรีมาแสดงเป็นภาพ โดยปฏิกิริยา ECL เวสเทิร์น blotting ตรวจจับเปื้อน (GE ดูแลสุขภาพออก พิตส์เบิร์ก PA สหรัฐอเมริกา) ในเมมเบรน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ระบบ SDS-PAGE ได้ดำเนินการตามที่อธิบาย Laemmli (1970) กลุ่มตัวอย่างได้รับการแก้ไขในวันที่ 10% เจลอะคริเลตที่มี SDS 0.1% ที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก electrophoresis เจลถูกย้อมด้วยสีฟ้าสดใส Coomassie R-250 โปรตีนที่แยกออกจากกันโดยวิธี SDS-PAGE ถูกโอนเข้าสู่ระบบไฟฟ้า Polyvinylidene difluoride (PVDF) เมมเบรนโอนเงิน (Amersham ชีววิทยาศาสตร์ Piscataway, NJ, USA) ในบัฟเฟอร์การถ่ายโอน (Tris ฐาน 3.04 กรัม glycine 14.41 กรัมและ 200 มลเมทานอล) สำหรับในชั่วข้ามคืน เมมเบรนที่ถูกแช่ในพีบีเอส-T บัฟเฟอร์ (Na2HPO4 5.75 กรัม NaH2-
PO4? 2H2O 1.48 กรัมโซเดียมคลอไรด์ 2.92 กรัมและ Tween-20 0.5 มิลลิลิตร) เพิ่มด้วยนมพร่องมันเนย 5% เป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากได้รับการล้างสามครั้งในพีบีเอส-T บัฟเฟอร์เมมเบรนถูกบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงกับแท็กของเขาแอนติบอดี.

เมมเบรนซักผ้าซ้ำสามครั้งกับพีบีเอส-T บัฟเฟอร์แล้ววงดนตรีที่ได้รับการมองเห็นโดยปฏิกิริยา ECL Western blotting น้ำยาตรวจจับ (GE การดูแลสุขภาพชีววิทยาศาสตร์, Pittsburgh, PA, สหรัฐอเมริกา) ในเมมเบรน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

SDS - หน้าถูกแสดงตามที่อธิบายไว้โดย laemmli ( 1970 ) จำนวนการแก้ไขบน 10% polyacrylamide เจลที่ประกอบด้วย 0.1% SDS ที่อุณหภูมิห้อง หลังจากอิเล็กเจลถูกย้อมด้วยสีเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส โปรตีนที่แยกจากกันโดย SDS - หน้า ไฟฟ้า โอนไปยังีนไดฟลูออไรด์ ( PVDF ) เมมเบรนถ่ายโอน ( ชาม ชีววิทยา ปิสกาตาเวย์ , NJ , USA ) ในบัฟเฟอร์การโอน ( จากฐาน 3.04 กรัม ไกลซีน 14.41 กรัมและเมทานอล 200 มล. ) สำหรับค้างคืน เยื่อแผ่นแช่ใน pbs-t บัฟเฟอร์ ( na2hpo4 nah2 - 5.75 กรัมpo4 ? 2H2O-dx 1.48 กรัม , เกลือ 2.92 กรัมและ tween-20 0.5 มล. ) เพิ่ม 5% หางนม 1 ชั่วโมง หลังจากการล้างสามครั้งใน pbs-t บัฟเฟอร์ , เยื่อแผ่นบ่ม 2 ชั่วโมงกับแอนติบอดีป้ายของเขาล้างเมมเบรนทำซ้ำสามครั้งกับบัฟเฟอร์ pbs-t แล้ววงถูกมองเห็นโดยปฏิกิริยา ECL Western blotting เพื่อตรวจจับ ( GE Healthcare ชีววิทยา Pittsburgh , PA , USA ) บนเยื่อแผ่น