Pre-macrophagic J774 cells from mur

Pre-macrophagic J774 cells from murine lymphomas were cultivated in Dulbecco’s modified Eagle’s essential medium (DMEM, Sigma-Aldrich, USA) supplemented with 5% foetal bovine serum, 50 μg/mL gentamicin and 2.5 μg/mL fungizone at 37°C in a 5% CO2 atmosphere. The CP09 mutant strain and T1 wild-type strain were grown for 48 hours at 37°C and washed three times with PBS, resuspended in DMEM to a concentration of 106 CFU/mL, and used to infect J774 cells (multiplicity of infection [MOI]: 10 bacteria: 1 cell) grown to approximately 95% confluence in 24-well tissue culture plates.

For determination of intracellular viable bacteria, after 1, 3 and 6 hours of incubation, infected J774 monolayers were washed six times with PBS and treated with 150 μg/mL gentamicin sulphate (Sigma-Aldrich, USA) diluted in DMEM for 1 h. The number of intracellular bacteria was determined by viable counts after lysis of monolayers with 0.5 mL of 0.1% TritonX-100 (Sigma-Aldrich, USA) in PBS.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์ J774 macrophagic ก่อนจาก murine lymphomas ถูกปลูกในดุลเบกโกของแก้ไขอีเกิลของจำเป็นปานกลาง (DMEM ซิก Aldrich สหรัฐอเมริกา) เสริม ด้วยเซรั่มวัว foetal 5%, 50 μg/mL gentamicin fungizone μg 2.5 mL ที่ 37 ° C ในบรรยากาศ 5% CO2 CP09 กลายพันธุ์ต้องใช้และต้องใช้ชนิดป่า T1 โต 48 ชั่วโมงที่ 37° C และล้างสามครั้ง ด้วย PBS, resuspended ใน DMEM เพื่อความเข้มข้นของ 106 CFU/mL และใช้ในการติดเชื้อเซลล์ J774 (มากมายหลายหลากของเชื้อ [อย]: แบคทีเรีย 10:1 เซลล์) เติบโตขึ้นประมาณ 95% บรรจบในแผ่นเยื่อดี 24สำหรับการกำหนด intracellular แบคทีเรียทำงานได้ หลัง 1, 3 และ 6 ชั่วโมงของคณะทันตแพทยศาสตร์ ติดเชื้อ J774 monolayers ล้าง 6 ครั้ง ด้วย PBS และรับ 150 μg/mL gentamicin ซัลเฟต (Aldrich ซิก สหรัฐอเมริกา) ยกเว้นใน DMEM สำหรับ 1 h จำนวนแบคทีเรีย intracellular กำหนด โดยนับได้หลังจาก lysis ของ monolayers กับ 0.5 mL ของ 0.1% TritonX-100 (Aldrich ซิก สหรัฐอเมริกา) ใน PBS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Pre-macrophagic เซลล์ J774 จาก lymphomas หมาได้รับการปลูกฝังใน Dulbecco ของการปรับเปลี่ยนขนาดกลางที่สำคัญของอีเกิล (DMEM, Sigma-Aldrich สหรัฐอเมริกา) เสริมด้วย 5% ของทารกในครรภ์ในซีรั่มวัว 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร GENTAMICIN และ 2.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร fungizone ที่ 37 ° C ใน บรรยากาศ CO2 5% สายพันธุ์ CP09 และ T1 สายพันธุ์ชนิดป่าที่ปลูกเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C และล้างสามครั้งกับพีบีเอส resuspended ใน DMEM กับความเข้มข้นของ 106 CFU / มิลลิลิตรและใช้ในการติดเชื้อเซลล์ J774 (หลายหลากของการติดเชื้อ [MOI ]: 10 แบคทีเรีย: 1 เซลล์) การเติบโตที่จะไหลมารวมกันประมาณ 95% ในจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 24 หลุม. สำหรับความมุ่งมั่นของแบคทีเรียทำงานได้ภายในเซลล์, หลังวันที่ 1, 3 และ 6 ชั่วโมงของการบ่มติดเชื้อ monolayers J774 ถูกล้างหกครั้งกับพีบีเอสและได้รับการรักษา 150 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรซัลเฟต GENTAMICIN (Sigma-Aldrich สหรัฐอเมริกา) เจือจางใน DMEM เป็นเวลา 1 ชั่วโมง จำนวนแบคทีเรียเซลล์ถูกกำหนดโดยนับทำงานหลังจากที่สลายของ monolayers 0.5 มิลลิลิตร 0.1% TritonX-100 (Sigma-Aldrich สหรัฐอเมริกา) ในพีบีเอส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ก่อน macrophagic j774 lymphomas เซลล์จาก ~ ปลูกในดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลางที่จำเป็น ( dmem ซิกม่า Aldrich , USA ) เสริมด้วย 5% ซีรั่มวัว foetal 50 μ g / ml ยาเจนตาไมซินและ 2.5 μ g / ml fungizone 37 ° C ในบรรยากาศคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ สายพันธุ์ที่กลายพันธุ์ของ cp09 T1 สายพันธุ์ปลูกเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศา C และล้างสามครั้งกับพีบีเอสresuspended ใน dmem เพื่อความเข้มข้น 106 cfu / มิลลิลิตร และใช้ติด j774 เซลล์ ( ความหลากหลายของการติดเชื้อ [ กระผม ] : 10 แบคทีเรีย 1 เซลล์ ) เติบโตขึ้นประมาณ 95% บรรจบในจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 24 ดี

หาเซลล์แบคทีเรียที่มีชีวิตหลัง 1 , 3 และ 6 ชั่วโมง ระยะเวลาติดเชื้อ j774 monolayers ถูกล้าง 6 ครั้งกับ PBS และรักษาด้วย 150 μ g / ml ไมซิน ซัลเฟต ( ซิกม่า Aldrich , USA ) เจือจางใน dmem เป็นเวลา 1 ชั่วโมง จำนวนเซลล์ของแบคทีเรียถูกกำหนดโดยรัฐนับหลังจากการสลายของ monolayers 0.5 ml 0.1% tritonx-100 ( ซิกม่า Aldrich , USA ) ใน PBS