Zinc Finger Nuclease (ZFN) CompoZr

Zinc Finger Nuclease (ZFN)

CompoZr® Zinc Finger Nuclease Technology
Zinc finger nucleases (ZFNs) are a class of engineered DNA-binding proteins that facilitate genome editing by creating a double-stranded break in DNA at a user-specified location.
A double-stranded break is important for site-specific mutagenesis in that it stimulates the cell’s natural DNA-repair processes, namely homologous recombination and Non-Homologous End Joining (NHEJ).
Using well-established and robust protocols, these cellular processes can be harnessed to generate precisely targeted in vitro or in vivo genomic edits with targeted gene deletions (Knockouts), integrations, or modifications.

CompoZr ZFNs – Now More Affordable
Improvements in CompoZr ZFN design and manufacturing have acted to significantly increase the affordability of genome editing with CompoZr ZFN technology for the research community. All researchers now have access to this well characterized and highly published technology.

What Is ZFN Technology?

Zinc finger nucleases (ZFNs) are a class of engineered DNA-binding proteins that facilitate targeted editing of the genome by creating double-strand breaks in DNA at user-specified locations.
- See more at

Figure 1: Each Zinc Finger Nuclease (ZFN) consists of two functional domains: a.) A DNA-binding domain comprised of a chain of two-finger modules, each recognizing a unique hexamer (6 bp) sequence of DNA. Two-finger modules are stitched together to form a Zinc Finger Protein, each with specificity of ≥ 24 bp. b.) A DNA-cleaving domain comprised of the nuclease domain of Fok I. When the DNA-binding and DNA-cleaving domains are fused together, a highly-specific pair of 'genomic scissors' are created. - See more at: http://www.sigmaaldrich.com/life-science/zinc-finger-nuclease-technology/learning-center/what-is-zfn.html#sthash.Xi8JoIN9.dpuf
Double-strand breaks are important for site-specific mutagenesis in that they stimulate the cell's natural DNA-repair processes, namely homologous recombination and Non-Homologous End Joining (NHEJ). By implementing established, field proven methods, these processes are harnessed to generate precisely targeted genomic edits, resulting in cell lines with targeted gene deletions, integrations, or modifications. - See more at:
Benefits
• Rapid disruption of, or integration into, any genomic loci
• Mutations made are permanent and heritable
• Works in a variety of mammalian somatic cell types
• Edits induced through a single transfection experiment
• Knockout or knock-in cell lines in as little as two months
• Single or biallelic edits occur in 1–20% of clone population
• No antibiotic selection required for screening


Target Applications
• Functional Genomics/Target Validation
o Creation of gene knockouts in multiple cell lines
o Complete knockout of genes not amenable to RNAi
• Cell-based screening
o Creation of knock-in cell lines with promoters, fusion tags or reporters integrated into endogenous genes
• Cell Line Optimization
o Creation of cell lines that produce higher yields of proteins or antibodies

Figure 2: ZFN-mediated genome editing takes place in the nucleus when a ZFN pair targeting the user’s gene of interest is delivered into a parental cell line, either by transfection, electroporation or viral delivery.


How Do ZFNs Work?
Cell Line Engineering Made Simple
CompoZr™ ZFNs are used to create modified cell lines with targeted gene deletions, gene insertions, or gene corrections.
The CompoZr protocol for cell line modification starts with the delivery of a ZFN pair into a cell line of interest, and has been designed to be compatible with various standard methods of cellular delivery, including lipid-based transfection, electroporation and nucleofection™. Following delivery into the cell, ZFN-mediated editing will occur in as little as three days (see Figure 1), at which point the clonal pool is ready to be assayed for rate-of-mutation.

 

Using ZFNs to Create Modified Cell Lines

Figure 1: Cell line modification using ZFNs is simple and relies on standard processes such as transfection, dilution cloning, and genotyping.

Gauging ZFN Efficiency
In the absence of an exogenous repair template, ZFN-induced double-strand breaks are typically repaired by a non-perfect cellular repair mechanism called Non-Homologous End Joining (NHEJ). Due to the imperfect fidelity of NHEJ, a minority of double-strand breaks within a ZFN-treated cellular population will be misrepaired, leading to cells in which either random heterogeneous genetic insertions or deletions have been made at the site of the double-stand break. Sigma uses a mismatch sensitive enzyme to look for these imperfect repairs, thereby quantifying the effectiveness of a ZFN pair.

Quantifying ZFN Efficiency

Figure 2: A nucleotide mismatch assay is used to quantify the effectiveness of ZFNs. The mismatch assay consists of amplifying the target region from ZFN-treated genomic DNA via standard PCR. Resultant PCR products are denatured and allowed to re-anneal. A fraction of re-annealed products will contain bulges of DNA where heterogeneous mismatches occur. When a mismatch sensitive enzyme is added to the reaction, DNA digestion will occur at the site of the nucleotide mismatch. PCR pools are analyzed via PAGE. Sample pools 3–5 above contain cells that have been edited via ZFN-induced editing. The ratio of digested PCR products vs. wildtype PCR product is quantified by densitometry to determine rate of ZFN effectiveness.

CompoZr™ ZFNs for Targeted Knockout Animals

Enabling Unprecedented Research in Virtually Any Species Including Rats, Mice,
Rabbits, Zebrafish and More
Benefits
Recent Developments in Animals
ZFN Knockout Animal Creation via Microinjection
How to Order
CompoZr Zinc Finger Nuclease (ZFN) Technology is a novel system for rapid creation of targeted gene knockouts, genomic insertions or gene editing in eukaryotic systems. ZFNs are highly efficient pairs of custom nucleases designed and made by Sigma-Aldrich to target your gene or genomic sequence of interest. ZFNs (mRNA or plasmid formats) are delivered to cells by transfection methods or to embryos by microinjection. Upon cleavage of the target site, endogenous cellular processes are harnessed to produce targeted mutations that result in gene knockout.

Benefits:
• Unlimited Species Possibilities—
Animals with ES cell method limitations can now be targeted
• Rapid Animal Engineering—
Fastest method for creation of knockout rodents (2-3 months) and other higher eukaryotes
• Robust Mutation Rate—
Achieve up to a 10-15% mutation rate in founder animals
• Heritable Transmission—
Faithful germline transmission of targeted mutations
• Universal Tool—
Move quickly from cell line proof-of-concept studies into animals

Recent Developments in Animals
Recent work has shown that the ZFN-based gene knockout method is highly effective not only in cell lines, but also in embryos for the creation of animal models. Such developments enable targeted genetic engineering of organisms such as rats and zebrafish, where conventional methods of genetic manipulation have been unsuccessful. ZFN-based gene targeting has been proven to work in a wide variety of organisms including rats, mice, rabbits, zebrafish, Drosophila and C. elegans with testing in additional model systems underway.
CompoZr ZFN-based genetic engineering does not require the use of embryonic stem (ES) cells because ZFNs can be injected directly into early stage embryos (see illustration below). This allows targeted gene disruption in a wider spectrum of organisms (i.e. rats and zebrafish) and in much shorter timeframes. Knockout rats and mice can be created in as little as 2-3 months at high efficiencies (monoallelic 10-15%, biallelic 1%) compared to the ES cell method in mice that can take up to 12-18 months. ZFN methods result in efficient germline transmission of targeted genetic mutations without incorporation of foreign DNA sequences.


ZFN Knockout Animal Creation via Microinjection
Knockout model creation using Zinc Finger Nucleases starts with a fertilized single cell embryo (see illustration below). The ZFN, in mRNA form, is microinjected into the nucleus, cytoplasm, or yolk (e.g. zebrafish) where it locates the target sequence and creates a double strand break. ZFNs in plasmid form may also be injected into the nucleus. The double strand break stimulates the cellular process of non-homologous end joining and results in the mis-repair of the DNA sequence. The resulting mutation usually gives rise to a knockout genotype/phenotype. The embryos are then plated or implanted into the foster mother and allowed to divide and grow into whole organisms. At birth, the animals are screened for mutations and the founder animals are identified. Biallelic knockouts are achievable in the founder generation. However, monoallelic knockouts can also be interbred to produce biallelic knockout animals.
inquiry form. After discussion of the ZFN project details, you will be provided with pricing and relevant licensing details (if applicable). - See more at: http://www.sigmaaldrich.com/life-science/zinc-finger-nuclease-technology/learning-center/zfns-in-animals.html#sthash.wuOVSol8.dpufHow to Order CompoZr ZFNs (Product No. CSTZFN-1KT) are considered custom projects and are quoted through your local sales representative. You may start the process by completing online ZFN inquiry form. After discussion of the ZFN project details, you will be provided with pricing and relevant licensing details (if applicable). - See more at:
How to Order
CompoZr ZFNs (Product No. CSTZFN-1KT) are considered custom projects and are quoted through your local sales representative. You may start the process by completing online ZFN inquiry form. After discussion of the ZFN project details, you will be provided with pricing and relevant licensing details (if applicable). - See more at: http://www.sig

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Nuclease นิ้วสังกะสี (ZFN) CompoZr ®สังกะสีนิ้ว Nuclease เทคโนโลยีสังกะสี nucleases นิ้ว (ZFNs) เป็นชั้นของโปรตีนดีเอ็นเอรวมออกแบบที่อำนวยความสะดวกกลุ่มแก้ไข โดยการสร้างตัวแบ่งขนคู่ในดีเอ็นเอในตำแหน่งที่ผู้ใช้ระบุพักคู่ควั่นเป็นสิ่งสำคัญสำหรับ mutagenesis เฉพาะที่มันกระตุ้นของเซลล์ธรรมชาติซ่อมแซมดีเอ็นเอกระบวนการ คือ homologous recombination และรวมจุดสิ้นสุดของไม่ใช่ Homologous (NHEJ)โดยใช้โพรโทคอดีขึ้น และแข็งแกร่ง กระบวนการโทรศัพท์มือถือเหล่านี้สามารถควบคุมการสร้างตรงเป้าหมายในหลอด หรือใน vivo แก้ไข genomic กับเป้าหมายลบยีน (Knockouts), การรวม หรือปรับเปลี่ยนCompoZr ZFNs-ตอนนี้ราคาไม่แพงมากปรับปรุง CompoZr ZFN ออกแบบและผลิตได้ดำเนินการเพิ่มที่สามารถในการจ่ายของจีโนมแก้ไขด้วยเทคโนโลยี CompoZr ZFN ชุมชนวิจัย นักวิจัยทั้งหมดขณะนี้มีการเข้าถึงเทคโนโลยีนี้ทั้งลักษณะ และขอเผยแพร่ZFN เทคโนโลยีคืออะไร คลาสของโปรตีนดีเอ็นเอรวมออกแบบที่ช่วยเป้าหมายแก้ไขกลุ่มที่สร้างแบ่งสองสแตรนด์ในดีเอ็นเอที่ตำแหน่งที่ระบุผู้ใช้ สังกะสี nucleases นิ้ว (ZFNs) ได้-ดูเพิ่มเติมได้ที่ รูปที่ 1: Nuclease นิ้วสังกะสี (ZFN) แต่ละประกอบด้วยสองโดเมนที่ทำงาน: อ.) โดเมนรวม A DNA ประกอบด้วยโซ่ของโมดูลทั้งสองนิ้ว แต่ละที่จดจำ hexamer เฉพาะ (6 bp) ลำดับของดีเอ็นเอ Two-finger โมจะเย็บเข้าด้วยกันเพื่อเป็นสังกะสีนิ้วโปรตีน มี specificity ≥ 24 bp. บี.) โดเมน cleaving ดีเอ็นเอประกอบด้วยโดเมน nuclease ของ Fok ฉันด้วย เมื่อรวมดีเอ็นเอและดีเอ็นเอ cleaving โดเมนมี fused กัน มีสร้างคู่สูงเฉพาะ 'genomic กรรไกร' -ดูเพิ่มเติมได้ที่: http://www.sigmaaldrich.com/life-science/zinc-finger-nuclease-technology/learning-center/what-is-zfn.html#sthash.Xi8JoIN9.dpufแบ่งสองสแตรนด์มีความสำคัญสำหรับ mutagenesis เฉพาะที่จะช่วยกระตุ้นเซลล์ของธรรมชาติซ่อมแซมดีเอ็นเอกระบวนการ คือ homologous recombination และรวมจุดสิ้นสุดของไม่ใช่ Homologous (NHEJ) โดยดำเนินการก่อตั้ง ฟิลด์พิสูจน์วิธีการ กระบวนการเหล่านี้จะควบคุมเพื่อสร้างตรงเป้าหมาย genomic แก้ไข ในบรรทัดที่เซลล์มียีนเป้าหมายลบ การรวม หรือปรับเปลี่ยน -ดูเพิ่มเติมได้ที่: ประโยชน์•รวดเร็วทรัพย หรือรวมเข้า loci genomic ใด ๆกลายพันธุ์•ทำ ใจถาวร heritable•ทำงานในหลากหลายชนิด mammalian มาติกเซลล์•แก้ไขเกิดผ่านทดลอง transfection ที่เดียว•น่าพิศวง หรือเคาะในเซลล์บรรทัดเล็กน้อยเป็นสองเดือน•เดี่ยวหรือ biallelic การแก้ไขที่เกิดขึ้นใน 1-20% ของประชากรโคลน•การเลือกยาปฏิชีวนะไม่จำเป็นสำหรับการคัดกรองโปรแกรมประยุกต์เป้าหมาย• Genomics เป้าหมายทำงานตรวจสอบo สร้าง knockouts ยีนในเซลล์หลายบรรทัดo น่าพิศวงสมบูรณ์ของยีนไม่คล้อยตามการตก RNAi•คัดกรองตามเซลล์o สร้างบรรทัดเคาะในเซลล์ก่อ แท็กฟิวชั่น หรือผู้สื่อข่าวรวมอยู่ในยีน endogenous•เซลล์บรรทัดเพิ่มประสิทธิภาพo สร้างบรรทัดของเซลล์ที่ผลิตผลผลิตสูงของโปรตีนหรือแอนตี้ รูปที่ 2: ZFN mediated จีโนมแก้ไขเกิดขึ้นในนิวเคลียสเมื่อคู่ ZFN กำหนดเป้าหมายของผู้ใช้ยีนน่าสนใจจะจัดส่งบรรทัดเซลล์โดยผู้ปกครอง โดย transfection, electroporation หรือส่งไวรัส วิธีทำการทำงาน ZFNsรายการเซลล์วิศวกรรมทำง่ายCompoZr ™ ZFNs จะใช้ในการสร้างบรรทัดการแก้ไขเซลล์ กับยีนเป้าหมายลบ แทรกยีน ยีนแก้ไขโพรโทคอล CompoZr การเปลี่ยนแปลงเซลล์เริ่มต้น ด้วยการจัดส่งของคู่ ZFN บรรทัดเซลล์น่าสนใจ และได้รับการออกแบบให้เข้ากับวิธีการมาตรฐานต่าง ๆ จัดส่งมือถือ รวมทั้งกระบวนการ transfection, electroporation และ nucleofection ™ ต่อไปนี้จัดส่งลงในเซลล์ ZFN mediated แก้ไขจะเกิดขึ้นในเวลาเพียงสามวัน (ดูรูปที่ 1), จุดที่สระ clonal มีพร้อมสามารถ assayed สำหรับอัตราของกลายพันธุ์ ใช้ ZFNs เพื่อสร้างปรับเปลี่ยนบรรทัดเซลล์ รูปที่ 1: ใช้ ZFNs เปลี่ยนแปลงเซลล์ง่าย และอาศัยกระบวนการมาตรฐานเช่น transfection เจือจางโคลน และ genotypingGauging ZFN ประสิทธิภาพในกรณีต้นแบบการซ่อมแซมบ่อย แบ่งสองสแตรนด์เกิด ZFN จะโดยทั่วไปซ่อม โดยกลไกซ่อมโทรศัพท์มือถือไม่ดีเรียกว่ารวมสุดท้ายของไม่ใช่ Homologous (NHEJ) เนื่องจากคุณภาพไม่สมบูรณ์ของ NHEJ ชนกลุ่มน้อยของสแตรนด์คู่แบ่งภายใน ZFN ถือว่าประชากรโทรศัพท์มือถือจะเป็น misrepaired นำไปยังเซลล์ที่แทรกทางพันธุกรรมแตกต่างกันสุ่มหรือลบทำที่ไซต์ของแบ่งขาตั้งคู่ ซิกมาใช้เป็นเอนไซม์สำคัญตรงหาซ่อมไม่สมบูรณ์เหล่านี้ จึง quantifying ประสิทธิภาพของคู่ ZFNQuantifying ZFN ประสิทธิภาพ รูปที่ 2: การทดสอบไม่ตรงนิวคลีโอไทด์ถูกใช้เพื่อกำหนดปริมาณประสิทธิภาพของ ZFNs ประกอบด้วยมือภูมิภาคเป้าหมายจาก ZFN ถือว่า DNA genomic ทาง PCR มาตรฐานทดสอบไม่ตรงกัน ผลิตภัณฑ์ PCR ผลแก่ denatured และสามารถหลอมแบบใหม่ เศษส่วนของผลิตภัณฑ์ใหม่ annealed จะประกอบด้วย bulges เอ็นที่ mismatches ต่างชนิดเกิดขึ้น เมื่อเพิ่มปฏิกิริยาเอนไซม์สำคัญไม่ตรงกัน การย่อยอาหารดีเอ็นเอจะเกิดขึ้นที่เว็บไซต์ของนิวคลีโอไทด์ที่ไม่ตรงกัน ประเภท PCR จะวิเคราะห์ผ่านหน้า กลุ่มตัวอย่าง 3-5 ข้างต้นประกอบด้วยเซลล์ที่มีการแก้ไขทาง ZFN ทำให้เกิดการแก้ไข อัตราส่วนของเจ่าผลิตภัณฑ์ PCR เทียบกับ wildtype ผลิตภัณฑ์ PCR จะ quantified โดย densitometry เพื่อกำหนดอัตราประสิทธิภาพ ZFNZFNs CompoZr ™สัตว์เป้าหมายน่าพิศวง เปิดใช้งานวิจัยเป็นประวัติการณ์ในทุกชนิดรวมทั้งหนู หนูกระต่าย ปลาม้าลาย และอื่น ๆประโยชน์พัฒนาล่าสุดในสัตว์ชนะน็อกโดยเทคนิค ZFN สัตว์สร้างผ่าน Microinjectionวิธีการสั่งซื้อCompoZr สังกะสีนิ้ว Nuclease (ZFN) เทคโนโลยีเป็นระบบนวนิยายสำหรับยีนเป้าหมาย knockouts, genomic แทรกหรือแก้ไขในระบบ eukaryotic ยีนสร้างอย่างรวดเร็ว ZFNs มีประสิทธิภาพคู่ nucleases เองออกแบบ และทำ โดยซิก Aldrich เป้าหมายของยีนหรือลำดับ genomic น่าสนใจ ZFNs (รูป mRNA หรือ plasmid) จะถูกส่งไป ยังเซลล์โดยวิธี transfection หรือโคลนโดย microinjection เมื่อปริไซต์เป้าหมาย กระบวน endogenous โทรศัพท์มือถือจะควบคุมการกลายพันธุ์เป้าหมายที่ส่งผลให้ยีนน่าพิศวงประโยชน์:•ไปชนิดไม่จำกัด —สัตว์กับ ES เซลล์วิธีการนี้มีเป้าหมายจำกัดวิศวกรรมสัตว์อย่างรวดเร็ว• —วิธีที่เร็วที่สุดสำหรับการสร้างงานน่าพิศวง (2-3 เดือน) และ eukaryotes อื่น ๆ สูงขึ้น•อัตราการกลายพันธุ์ที่แข็งแกร่ง —บรรลุถึง 10-15% อัตราการกลายพันธุ์ในสัตว์ผู้ก่อตั้งส่ง heritable • —ส่ง germline ซื่อสัตย์กลายพันธุ์เป้าหมายเครื่องมือสากล• —ไปอย่างรวดเร็วจากเซลล์รายการหลักฐานของแนวคิดการศึกษาในสัตว์พัฒนาล่าสุดในสัตว์งานล่าสุดได้แสดงว่าวิธีชนะน็อกโดยเทคนิคยีนตาม ZFN มีประสิทธิภาพสูงไม่เพียงแต่ในเซลล์บรรทัด แต่ยังอยู่ในโคลนสำหรับการสร้างแบบจำลองสัตว์ พัฒนาดังกล่าวเปิดใช้งานเป้าหมายพันธุวิศวกรรมของสิ่งมีชีวิตเช่นหนูและปลาม้าลาย ซึ่งปกติวิธีการจัดการทางพันธุกรรมได้สำเร็จ ยีน ZFN ตามเป้าหมายได้รับการพิสูจน์การทำงานในความหลากหลายของสิ่งมีชีวิตรวมทั้งหนู หนู กระต่าย ปลาม้าลาย แมลง และ C. elegans มีการทดสอบระบบแบบจำลองเพิ่มเติมระหว่างดำเนินการตาม CompoZr ZFN พันธุวิศวกรรมต้องใช้เซลล์ต้นกำเนิดตัวอ่อน (ES) เนื่องจากว่าสามารถฉีด ZFNs ลงโคลนขั้นต้น (ดูภาพประกอบด้านล่าง) นี้ช่วยให้ยีนเป้าหมายทรัพย ในสเปกตรัมกว้างของสิ่งมีชีวิต (เช่นหนูและปลาม้าลาย) และ timeframes สั้นกว่า ชนะน็อกโดยเทคนิคหนูและหนูสามารถสร้างขึ้นในเวลาเพียง 2-3 เดือนที่ประสิทธิภาพสูง (monoallelic 10-15%, biallelic 1%) เมื่อเทียบกับวิธีการเซลล์ ES ในหนูที่ได้รับถึง 12-18 เดือน ZFN วิธีทำส่งมีประสิทธิภาพ germline กลายพันธุ์ทางพันธุกรรมเป้าหมายโดยไม่จดทะเบียนของลำดับดีเอ็นเอต่างประเทศชนะน็อกโดยเทคนิค ZFN สัตว์สร้างผ่าน Microinjectionชนะน็อกโดยเทคนิคการสร้างแบบจำลองใช้สังกะสี Nucleases นิ้วเริ่มต้น ด้วยการฝากตัวอ่อนการปฏิสนธิเซลล์เดียว (ดูภาพประกอบด้านล่าง) ZFN ใน mRNA ฟอร์ม เป็น microinjected ในนิวเคลียส ไซโทพลาซึม หรือแดง (เช่นปลาม้าลาย) ที่มันตั้งลำดับเป้าหมาย และสร้างตัวแบ่งสาระคู่ ZFNs ใน plasmid ฟอร์มอาจยังมีหัวฉีดเข้าไปในนิวเคลียส แบ่งสาระคู่กระตุ้นการโทรศัพท์มือถือรวมสิ้นสุดไม่ใช่ homologous และผลในการซ่อมแซมต่อลำดับดีเอ็นเอ การกลายพันธุ์ที่เกิดขึ้นมักก่อให้เกิด phenotype/ลักษณะ ทางพันธุกรรมที่น่าพิศวง การโคลนแล้วชุบ หรือ implanted เป็นแม่เลี้ยง และสามารถแบ่ง และเติบโตเป็นสิ่งมีชีวิตทั้งหมด แรกเกิด สัตว์จะฉายการกลายพันธุ์ และสัตว์ผู้ก่อตั้งจะ Biallelic knockouts ทำได้ในการสร้างผู้ก่อตั้งได้ อย่างไรก็ตาม monoallelic knockouts สามารถยังสามารถ interbred การผลิตสัตว์ชนะน็อกโดยเทคนิค biallelicแบบฟอร์มสอบถาม หลังจากสนทนารายละเอียดโครงการ ZFN คุณจะไม่ให้อนุญาตให้ใช้สิทธิ์การแสดงรายละเอียด พร้อมราคา และที่เกี่ยวข้อง (ถ้ามี) -ดูเพิ่มเติมได้ที่: http://www.sigmaaldrich.com/life-science/zinc-finger-nuclease-technology/learning-center/zfns-in-animals.html#sthash.wuOVSol8.dpufHow ไปจะสั่ง CompoZr ZFNs (หมายเลขผลิตภัณฑ์ CSTZFN-1KT) ถือว่าโครงการที่กำหนดเอง และเสนอราคา โดยตัวแทนขายท้องถิ่นของคุณ คุณอาจเริ่มต้นกระบวนการ โดยการกรอกแบบฟอร์มสอบถาม ZFN ออนไลน์ หลังจากสนทนารายละเอียดโครงการ ZFN คุณจะไม่ให้อนุญาตให้ใช้สิทธิ์การแสดงรายละเอียด พร้อมราคา และที่เกี่ยวข้อง (ถ้ามี) -ดูเพิ่มเติมได้ที่: วิธีการสั่งซื้อ CompoZr ZFNs (หมายเลขผลิตภัณฑ์ CSTZFN-1KT) ถือว่าโครงการที่กำหนดเอง และเสนอราคา โดยตัวแทนขายท้องถิ่นของคุณ คุณอาจเริ่มต้นกระบวนการ โดยการกรอกแบบฟอร์มสอบถาม ZFN ออนไลน์ หลังจากสนทนารายละเอียดโครงการ ZFN คุณจะไม่ให้อนุญาตให้ใช้สิทธิ์การแสดงรายละเอียด พร้อมราคา และที่เกี่ยวข้อง (ถ้ามี) -ดูเพิ่มเติมได้ที่: http://www.sig

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สังกะสีนิ้ว Nuclease (ZFN) CompoZr®สังกะสีนิ้ว Nuclease เทคโนโลยีนิ้วสังกะสีนิ(ZFNs) เป็นระดับของการออกแบบโปรตีนดีเอ็นเอผูกพันที่อำนวยความสะดวกในการแก้ไขจีโนมโดยการสร้างแบ่งเกลียวคู่ดีเอ็นเอในที่สถานที่ที่ผู้ใช้ระบุ. สองครั้ง แบ่งควั่นเป็นสิ่งสำคัญสำหรับฉับเว็บไซต์ที่เฉพาะเจาะจงในการที่จะช่วยกระตุ้นเซลล์กระบวนการดีเอ็นเอซ่อมแซมธรรมชาติคือการรวมตัวกันคล้ายคลึงกันและสิ้นสุดไม่คล้ายคลึงกันการเข้าร่วม (NHEJ). การใช้ที่ดีขึ้นและโปรโตคอลที่แข็งแกร่งเซลล์กระบวนการเหล่านี้จะสามารถควบคุมการสร้าง การกำหนดเป้าหมายได้อย่างแม่นยำในหลอดทดลองหรือในร่างกายแก้ไขจีโนมที่มีการลบยีนเป้าหมาย (Knockouts) การผนวกรวมหรือการปรับเปลี่ยน. CompoZr ZFNs - ตอนนี้ราคาไม่แพงมากการปรับปรุงในการออกแบบCompoZr ZFN และการผลิตมีการดำเนินการอย่างมีนัยสำคัญเพิ่มความสามารถในการจ่ายของการแก้ไขจีโนมด้วยเทคโนโลยี CompoZr ZFN สำหรับ วิจัยชุมชน นักวิจัยทั้งหมดในขณะนี้มีการเข้าถึงเทคโนโลยีที่ดีโดดเด่นและเผยแพร่สูง. คืออะไร ZFN เทคโนโลยี? นิ้วสังกะสีนิ (ZFNs) เป็นชั้นของการออกแบบโปรตีนดีเอ็นเอผูกพันที่อำนวยความสะดวกในการกำหนดเป้าหมายการแก้ไขของจีโนมโดยการสร้างแบ่งดับเบิลสาระใน DNA ที่ . สถานที่ที่ผู้ใช้กำหนด- ดูเพิ่มเติมได้ที่. รูปที่ 1: แต่ละนิ้วสังกะสี Nuclease (ZFN) ประกอบด้วยสองโดเมนทำงานก) โดเมนดีเอ็นเอผูกพันประกอบด้วยห่วงโซ่ของโมดูลสองนิ้วแต่ละตระหนักถึง hexamer ที่ไม่ซ้ำกัน (6 bp) ลำดับของดีเอ็นเอ โมดูลสองนิ้วเย็บกันในรูปแบบโปรตีนนิ้วสังกะสีแต่ละคนมีความจำเพาะของ≥ 24 bp ข.) คำดีเอ็นเอฝ่าโดเมนประกอบด้วยโดเมน Nuclease ของ Fok I. เมื่อดีเอ็นเอผูกพันและโดเมนดีเอ็นเอฝ่าจะหลอมรวมกันเป็นคู่ที่เฉพาะเจาะจงสูงของ 'กรรไกรจีโนม' จะถูกสร้างขึ้น - ดูเพิ่มเติมได้ที่: แบ่งมีความสำคัญสำหรับฉับเว็บไซต์ที่เฉพาะเจาะจงในการที่พวกเขากระตุ้นให้เกิดกระบวนการทางธรรมชาติของเซลล์ดีเอ็นเอซ่อมแซมคือการรวมตัวกันคล้ายคลึงกันและสิ้นสุดไม่คล้ายคลึงกันการเข้าร่วม (NHEJ) โดยการดำเนินการจัดตั้งวิธีการพิสูจน์เขตกระบวนการเหล่านี้ควบคุมการสร้างการกำหนดเป้าหมายอย่างแม่นยำแก้ไขจีโนมที่เกิดขึ้นในเซลล์ที่มีการลบยีนเป้าหมายการผสานรวมหรือการดัดแปลง - ดูเพิ่มเติมได้ที่: คุณประโยชน์•การหยุดชะงักอย่างรวดเร็วของหรือบูรณาการเข้าสู่ตำแหน่งใด ๆ จีโนม•การกลายพันธุ์ทำถาวรและสืบทอด•ใช้งานในความหลากหลายของชนิดเซลล์ร่างกายเลี้ยงลูกด้วยนม•แก้ไขเหนี่ยวนำผ่านการทดลองtransfection เดียว•สิ่งที่น่าพิศวงหรือเคาะในเซลล์เส้นในการเป็นเพียงสองเดือน•เดี่ยวหรือแก้ไข biallelic เกิดขึ้นใน 1-20% ของประชากรโคลน•ไม่มีการเลือกยาปฏิชีวนะที่จำเป็นสำหรับการตรวจคัดกรองการประยุกต์ใช้งานเป้าหมาย•ฟังก์ชั่นการทำงาน/ การตรวจสอบเป้าหมายo การสร้าง knockouts ยีนในเซลล์หลายo ที่น่าพิศวงที่สมบูรณ์ของยีน ไม่คล้อยตาม RNAi •การตรวจคัดกรองเซลล์ตามo การสร้างเคาะในเซลล์ที่มีโปรโมเตอร์, แท็กฟิวชั่นหรือผู้สื่อข่าวรวมเข้ากับยีนภายนอก•การเพิ่มประสิทธิภาพของเซลล์สายo การสร้างเซลล์ที่ผลิตผลผลิตสูงของโปรตีนหรือแอนติบอดีรูปที่2: ZFN- แก้ไขจีโนมพึ่งจะเกิดขึ้นในนิวเคลียสเมื่อคู่ ZFN กำหนดเป้าหมายของยีนของผู้ใช้ที่สนใจจะถูกส่งเข้าไปในเซลล์ของผู้ปกครองทั้งโดย transfection, electroporation หรือจัดส่งไวรัส. วิธีทำ ZFNs ทำงาน? เซลล์สายวิศวกรรม Made Simple CompoZr ZFNs ™ถูกนำมาใช้ ในการสร้างสายพันธุ์เซลล์แก้ไขด้วยการลบยีนเป้าหมายแทรกยีนหรือแก้ไขยีน. โปรโตคอล CompoZr สำหรับการปรับเปลี่ยนสายพันธุ์ของเซลล์เริ่มต้นด้วยการจัดส่งของคู่ ZFN เป็นเซลล์ที่น่าสนใจและได้รับการออกแบบมาให้เข้ากันได้กับวิธีการมาตรฐานต่างๆ ของการจัดส่งโทรศัพท์มือถือรวมทั้ง transfection ไขมันตาม electroporation และ nucleofection ™ ต่อไปนี้การจัดส่งเข้าไปในเซลล์แก้ไข ZFN พึ่งจะเกิดขึ้นในการเป็นเพียงสามวัน (ดูรูปที่ 1) จุดที่สระว่ายน้ำ clonal พร้อมที่จะถูก assayed อัตราของการกลายพันธุ์. การใช้ ZFNs การสร้างเซลล์ดัดแปลงรูป1. การปรับเปลี่ยนสายโทรศัพท์มือถือโดยใช้ ZFNs เป็นเรื่องง่ายและต้องอาศัยกระบวนการมาตรฐานเช่น transfection โคลนเจือจางและ genotyping การประเมินประสิทธิภาพ ZFN ในกรณีที่ไม่มีแม่แบบการซ่อมแซมภายนอกที่ ZFN เหนี่ยวนำให้เกิดการแบ่งสองครั้งที่มีการซ่อมแซมสาระโดยทั่วไปที่ไม่ใช่ กลไกการซ่อมโทรศัพท์มือถือที่สมบูรณ์แบบที่เรียกว่า Non-End คล้ายคลึงกันการเข้าร่วม (NHEJ) เนื่องจากความจงรักภักดีที่ไม่สมบูรณ์ของ NHEJ เป็นชนกลุ่มน้อยของการแบ่งดับเบิลสาระภายในประชากรโทรศัพท์มือถือ ZFN ได้รับการรักษาจะได้รับการ misrepaired นำไปสู่เซลล์ซึ่งทั้งแทรกพันธุกรรมสุ่มที่แตกต่างกันหรือลบได้รับการทำที่เว็บไซต์ของการแบ่งสองครั้งที่ยืน . Sigma ใช้ไม่ตรงกันเอนไซม์ที่มีความสำคัญที่จะมองหาการซ่อมแซมข้อบกพร่องเหล่านี้จึงปริมาณประสิทธิผลของคู่ ZFN ได้. เชิงปริมาณ ZFN ประสิทธิภาพรูปที่2: การทดสอบไม่ตรงกันเบื่อหน่ายจะใช้ในการวัดปริมาณประสิทธิผลของ ZFNs การทดสอบไม่ตรงกันประกอบด้วยขยายพื้นที่เป้าหมายจาก ZFN รับการรักษาดีเอ็นเอผ่าน PCR มาตรฐาน ผลิตภัณฑ์ผล PCR มีเอทิลแอลกอฮอล์และได้รับอนุญาตให้กลับมาหลอม เศษของผลิตภัณฑ์ใหม่อบนูนจะมีดีเอ็นเอที่ไม่ตรงกันต่างกันเกิดขึ้น เมื่อไม่ตรงกันเอนไซม์ที่สำคัญจะถูกเพิ่มในการเกิดปฏิกิริยาการย่อยอาหารดีเอ็นเอจะเกิดขึ้นที่เว็บไซต์ของไม่ตรงกันเบื่อหน่ายที่ สระว่ายน้ำ PCR มีการวิเคราะห์ผ่านทางหน้า สระว่ายน้ำ 3-5 ตัวอย่างข้างต้นมีเซลล์ที่ได้รับการแก้ไขผ่านการแก้ไข ZFN ที่เกิดขึ้น อัตราส่วนของผลิตภัณฑ์ย่อย PCR เทียบกับผลิตภัณฑ์ wildtype PCR โดยมีการวัดความหนาแน่นในการกำหนดอัตราประสิทธิภาพ ZFN. CompoZr ZFNs ™สำหรับสัตว์ที่น่าพิศวงเป้าหมายการเปิดใช้งานวิจัยเป็นประวัติการณ์ในแทบทุกสายพันธุ์รวมทั้งหนู, หนู, กระต่าย, Zebrafish และอื่น ๆประโยชน์ที่ได้รับการพัฒนาล่าสุดในสัตว์ZFN ที่น่าพิศวงสร้างสัตว์ผ่าน Microinjection วิธีการสั่งซื้อCompoZr สังกะสีนิ้ว Nuclease (ZFN) เทคโนโลยีเป็นระบบใหม่สำหรับการสร้างอย่างรวดเร็วของ knockouts ยีนเป้าหมายแทรกจีโนมหรือยีนในการแก้ไขระบบ eukaryotic ZFNs คู่ที่มีประสิทธิภาพสูงของนิที่กำหนดเองได้รับการออกแบบและทำโดย Sigma-Aldrich ในการกำหนดเป้าหมายของยีนหรือลำดับจีโนมของความสนใจของคุณ ZFNs (mRNA หรือรูปแบบพลาสมิด) จะถูกส่งไปยังเซลล์โดยวิธีการ transfection หรือตัวอ่อนโดย microinjection เมื่อความแตกแยกของเว็บไซต์เป้าหมายเซลล์กระบวนการภายนอกมีการควบคุมการผลิตการกลายพันธุ์ที่มีการกำหนดเป้าหมายที่มีผลในการแสดงออกของยีนที่น่าพิศวง. ประโยชน์: •ไม่ จำกัด สายพันธุ์ Possibilities- สัตว์ที่มีข้อ จำกัด วิธีการเซลล์ ES ขณะนี้สามารถกำหนดเป้าหมาย•สัตว์อย่างรวดเร็ววิศวกรรมวิธีที่เร็วที่สุดสำหรับการสร้างสิ่งที่น่าพิศวงหนู (2-3 เดือน) และยูคาริโออื่น ๆ ที่สูงขึ้น•อัตราที่กลายพันธุ์ที่มีประสิทธิภาพบรรลุถึงอัตราการกลายพันธุ์10-15% ในสัตว์ก่อตั้ง•สืบทอดTransmission- ซื่อสัตย์ส่ง germline การกำหนดเป้าหมายของการกลายพันธุ์•ยูนิเวอร์แซยืดย้ายได้อย่างรวดเร็วจากเซลล์proof- การศึกษาของแนวคิดเป็นสัตว์การพัฒนาล่าสุดในสัตว์งานล่าสุดแสดงให้เห็นว่ายีนZFN ตามวิธีการที่น่าพิศวงที่มีประสิทธิภาพสูงไม่เพียง แต่ในเซลล์ แต่ยังอยู่ในตัวอ่อนสำหรับการสร้างแบบจำลองสัตว์ การพัฒนาดังกล่าวช่วยให้การกำหนดเป้าหมายทางพันธุวิศวกรรมของสิ่งมีชีวิตเช่นหนูและ zebrafish ที่วิธีการทั่วไปของการจัดการทางพันธุกรรมได้สำเร็จ กำหนดเป้าหมายยีน ZFN ตามที่ได้รับการพิสูจน์ในการทำงานในหลากหลายของสิ่งมีชีวิตรวมทั้งหนูหนูกระต่าย zebrafish, แมลงหวี่และ C. elegans กับการทดสอบระบบในรูปแบบเพิ่มเติมซื่อ. CompoZr ZFN ตามพันธุวิศวกรรมไม่จำเป็นต้องใช้ ต้นกำเนิดตัวอ่อน (ES) เพราะเซลล์ ZFNs สามารถฉีดโดยตรงลงในตัวอ่อนในระยะเริ่มต้น (ดูภาพประกอบด้านล่าง) นี้จะช่วยให้เกิดการหยุดชะงักของยีนเป้าหมายในคลื่นความถี่ที่กว้างขึ้นของสิ่งมีชีวิต (เช่นหนูและ zebrafish) และในระยะเวลาที่สั้นมาก หนูที่น่าพิศวงและเมาส์ที่สามารถสร้างขึ้นในการเป็นเพียง 2-3 เดือนที่มีประสิทธิภาพสูง (monoallelic 10-15% biallelic 1%) เมื่อเทียบกับวิธี ES เซลล์ในหนูที่สามารถใช้เวลาถึง 12-18 เดือน วิธีการ ZFN ส่งผลให้ประสิทธิภาพในการส่ง germline ของการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมโดยไม่ต้องกำหนดเป้าหมายการรวมตัวกันของลำดับดีเอ็นเอต่างประเทศ. ZFN ที่น่าพิศวงสร้างสัตว์ผ่าน Microinjection การสร้างรูปแบบที่น่าพิศวงโดยใช้นิ้วมือสังกะสีนิเริ่มต้นด้วยการเพาะตัวอ่อนเซลล์เดียว (ดูภาพประกอบด้านล่าง) ZFN ในรูปแบบ mRNA เป็น microinjected เข้าไปในนิวเคลียสพลาสซึมหรือไข่แดง (เช่น zebrafish) ซึ่งที่ตั้งอยู่ลำดับเป้าหมายและสร้างเส้นแบ่งคู่ ZFNs ในรูปแบบพลาสมิดอาจจะถูกฉีดเข้าไปในนิวเคลียส แบ่งสาระคู่ช่วยกระตุ้นกระบวนการเซลล์ของปลายที่ไม่คล้ายคลึงกันมาร่วมงานและผลในการซ่อมแซมผิดพลาดของลำดับดีเอ็นเอ การกลายพันธุ์ที่เกิดขึ้นมักจะก่อให้เกิดสิ่งที่น่าพิศวงจีโนไทป์ / ฟีโนไทป์ ตัวอ่อนจะชุบแล้วหรือฝังลงในแม่บุญธรรมและได้รับอนุญาตในการแบ่งและเติบโตเป็นสิ่งมีชีวิตทั้งหมด ที่เกิดสัตว์ที่ได้รับการคัดกรองการกลายพันธุ์และสัตว์จะมีการระบุผู้ก่อตั้ง knockouts Biallelic จะทำได้ในการผลิตผู้ก่อตั้ง อย่างไรก็ตาม knockouts monoallelic ยังสามารถพันธุ์ผสมในการผลิตสัตว์ที่น่าพิศวง biallelic. แบบฟอร์มสอบถามรายละเอียดเพิ่มเติม หลังจากการอภิปรายของ ZFN รายละเอียดโครงการ, คุณจะได้มีการกำหนดราคาและรายละเอียดการออกใบอนุญาตที่เกี่ยวข้อง (ถ้ามี) - ดูเพิ่มเติมได้ที่: การสั่งซื้อ CompoZr ZFNs (สินค้าหมายเลข CSTZFN-1KT) จะมีการพิจารณาโครงการที่กำหนดเองและได้รับการยกผ่านตัวแทนจำหน่ายในพื้นที่ของคุณ คุณอาจเริ่มต้นกระบวนการโดยการกรอกแบบฟอร์มสอบถามรายละเอียดเพิ่มเติม ZFN ออนไลน์ หลังจากการอภิปรายของ ZFN รายละเอียดโครงการ, คุณจะได้มีการกำหนดราคาและรายละเอียดการออกใบอนุญาตที่เกี่ยวข้อง (ถ้ามี) - ดูเพิ่มเติมได้ที่: วิธีการสั่งซื้อCompoZr ZFNs (สินค้าหมายเลข CSTZFN-1KT) จะมีการพิจารณาโครงการที่กำหนดเองและได้รับการยกผ่านตัวแทนจำหน่ายในพื้นที่ของคุณ คุณอาจเริ่มต้นกระบวนการโดยการกรอกแบบฟอร์มสอบถามรายละเอียดเพิ่มเติม ZFN ออนไลน์ หลังจากการอภิปรายของ ZFN รายละเอียดโครงการ, คุณจะได้มีการกำหนดราคาและรายละเอียดการออกใบอนุญาตที่เกี่ยวข้อง (ถ้ามี) - ดูเพิ่มเติมได้ที่: http: //www.sig











































 

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สังกะสีนิ้วนิวเคลียส ( zfn )

compozr ®สังกะสีนิ้วนิวเคลียสเทคโนโลยี
สังกะสีนิ้ว nucleases ( zfns ) เป็นชั้นของวิศวกรรมโปรตีนดีเอ็นเอมัดที่อำนวยความสะดวกในการแก้ไข โดยการสร้างคู่เกลียวแตกในดีเอ็นเอที่ผู้ใช้ระบุตำแหน่งพันธุกรรม .
คู่ติดแบ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับเว็บไซต์เฉพาะในที่การกระตุ้นของเซลล์กระบวนการซ่อมแซมดีเอ็นเอธรรมชาติ ,คือการเปรียบเทียบความคล้ายคลึงจบและไม่เข้าร่วม ( nhej ) .
โดยใช้โปรโตคอลและมีชื่อเสียงที่แข็งแกร่ง , กระบวนการโทรศัพท์มือถือเหล่านี้สามารถใช้เพื่อสร้างเป้าหมายอย่างแม่นยำในหลอดทดลองหรือในสิ่งมีชีวิตที่มียีนเป้าหมายแก้ไขด้วยการลบ ( knockouts ) การทำงานหรือการปรับเปลี่ยน compozr zfns


) ยิ่งมากการปรับปรุงในการออกแบบและการผลิต zfn compozr ทำเพื่อเพิ่มความประหยัดของการแก้ไขด้วยเทคโนโลยี zfn compozr สำหรับชุมชนการวิจัยจีโนม . นักวิจัยทั้งหมดในขณะนี้มีการเข้าถึงนี้คือลักษณะขอเผยแพร่เทคโนโลยี

มีอะไร zfn เทคโนโลยี ?