The laboratory S. cerevisiae strain

The laboratory
S. cerevisiae strain FY5 (Mat a and α, S288C background)
was used as the background strain for constructing mutants.

The mutants in this study were made by first PCR-amplifying an antibiotic
resistance marker surrounded by Lox sites, followed by transformation
of the construct into the yeast to delete the targeted gene in the
genome following the protocol from Gietz and Woods (2006).

Two different
antibiotic resistance markers (Kanamycin A and Hygromycin
B) were used in this study to be able to select double mutants on selective
media containing both antibiotics. The single deletions with each
different marker were mated to obtain diploid yeasts with double deletion.
The diploid cells were then sporulated to obtain haploid cells with
both deletions and antibiotic resistance markers. Primer sequences used
in this study are listed in Table A in Appendix A. Deletions were con-
firmed by PCR using the primers listed in Table B in Appendix A.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ห้องปฏิบัติการเอส cerevisiae สายพันธุ์ FY5 (จ้าและαพื้นหลัง S288C)
ถูกใช้เป็นสายพันธุ์พื้นหลังในการสร้างการกลายพันธุ์. กลายพันธุ์ในการศึกษานี้ถูกสร้างขึ้นครั้งแรกโดยการขยาย-PCR ยาปฏิชีวนะเครื่องหมายต้านทานล้อมรอบด้วยสถานที่Lox ตามด้วยการเปลี่ยนแปลงของโครงสร้างลงยีสต์ลบยีนที่กำหนดเป้าหมายในจีโนมต่อไปนี้โปรโตคอลจาก Gietz และวูดส์ (2006). สองแตกต่างกันเครื่องหมายต้านทานยาปฏิชีวนะ (กานามัยซินและไฮโกร B) ถูกนำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้จะสามารถเลือกการกลายพันธุ์สองครั้งที่เลือกสื่อที่มีทั้ง ยาปฏิชีวนะ ลบเดียวกับแต่ละเครื่องหมายที่แตกต่างกันเพื่อให้ได้แต่งงานยีสต์ซ้ำกับคู่ลบ. เซลล์ซ้ำจากนั้นก็จะได้รับ sporulated เซลล์เดี่ยวที่มีการลบและเครื่องหมายความต้านทานยาปฏิชีวนะ ลำดับไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีการระบุไว้ในตารางในภาคผนวก A ลบถูกทำายืนยันโดยวิธีPCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่ระบุไว้ในตาราง B ในภาคผนวก A

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ห้องปฏิบัติการ
S . cerevisiae สายพันธุ์ fy5 ( เสื่อและα s288c , พื้นหลัง )
ถูกใช้เป็นสายพันธุ์พื้นหลังสำหรับการสร้างสายพันธุ์

พวกกลายพันธุ์ ในการศึกษานี้ สร้างโดยแรก PCR amplifying ยาปฏิชีวนะ
ความต้านทานเครื่องหมายล้อมรอบเว็บไซต์ปลาแซลมอนรมควัน , ตามด้วยการเปลี่ยนแปลง
ของสร้างในยีสต์ เพื่อลบเป้าหมาย ยีนใน
จีโนมดังต่อไปนี้โปรโตคอลจาก gietz และป่า ( 2006 )


ที่ต้านทานยาปฏิชีวนะที่แตกต่างกันสองเครื่องหมาย ( kanamycin และยีนต้านยา hygromycin
b ) สถิติที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ จะสามารถเลือกพันธ์คู่บนสื่อเลือก
ที่มีทั้งยาปฏิชีวนะ ที่ลบเดียวกันต่างเป็นคู่กันเพื่อขอรับเครื่องหมาย
เกิดยีสต์กับคู่
ลบ .เซลล์ดิพลอยด์โครโมโซมแล้วสร้างสปอร์มากเพื่อให้ได้เซลล์
ทั้งลบและเครื่องหมายความต้านทานยาปฏิชีวนะ ลำดับการใช้ไพรเมอร์
ในการศึกษานี้มีการระบุไว้ในตารางในภาคผนวก A ลบเป็น con -
ยืนยันโดยวิธี PCR โดยใช้ primers ที่ระบุไว้ในตาราง B ในภาคผนวก A