2.7. Evaluation of protein stabiliz

2.7. Evaluation of protein stabilizing effects of hard-to-crystallize
sugar matrices
The protein-stabilizing effects of hard-to-crystallize sugar
(sucrose) matrices as well as sucrose alone were evaluated using
ALP as a model protein. Sucrose and the potential crystallization
inhibitor were dissolved at final concentrations of 50 mg/mL and
1 mg/mL, respectively, in a 10 mM diethanolamine buffer (pH
9.5). An aqueous solution containing the heat-treated sucrose, as
described above, was also prepared. Using these solutions, the
stock solution of ALP (1.2 mg/mL ALP, containing 50% glycerol)
was diluted to a final concentration of 72 ng/mL. Each 100 lL aliquot
of the resulting solution was freeze-dried in the same manner
as described above. The freeze-dried samples were stored in a vacuum
desiccator over silica gel at 75 C for 1 or 3 h. The samples
were then withdrawn and reconstituted in distilled water to measure
the remaining ALP activity. The remaining ALP activity was
measured in the same procedures as was used in our previous
study (Imamura et al., 2014). In brief, 100 lL aliquot of the reconstituted
ALP solution was mixed with 2.9 mL of the reaction mixture
containing 1 M diethanolamine, 0.25 mM MgCl2, and
100 mM p-NPP (pH 10.5). Immediately thereafter, the increase in
absorbance at 405 nm was monitored at 37 C. The storage stabilities
of ALP in the hard-to-crystallize matrices as well as in pure
sucrose matrix were evaluated from the initial increasing rate of
the 405-nm absorbance.
All analyses were performed in duplicate or more for each
sample.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 การประเมิน stabilizing ผลของยากจะตกผลึกโปรตีนน้ำตาลเมทริกซ์ผล stabilizing โปรตีนหนักไปตกผลึกน้ำตาล(ซูโครส) เมทริกซ์เป็นซูโครสเพียงอย่างเดียวได้ถูกประเมินโดยใช้แอลป์เป็นโปรตีนรูปแบบ ซูโครสและตกผลึกเป็นไปได้ผลได้ส่วนยุบที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 50 mg/mL และ1 mg/mL ตามลำดับ ใน 10 มม. diethanolamine บัฟเฟอร์ (pH9.5) การละลายที่ประกอบด้วยซูโครส heat-treated เป็นข้าง ถูกยังเตรียมไว้ ใช้โซลูชั่นเหล่านี้ การโซลูชั่นหุ้นของแอลป์ (1.2 mg/mL แอลป์ ประกอบด้วยกลีเซอร 50%)ถูกผสมให้เข้มข้นสุดท้ายของ 72 ng/mL แต่ละส่วนลงตัวจะ 100ของการแก้ปัญหาได้ถูกอบแห้งในลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ตัวอย่างกรอบถูกเก็บไว้ในสุญญากาศdesiccator ผ่านซิลิก้าเจลที่ 75 C 1 หรือ 3 h ตัวอย่างถูกถอน แล้ว reconstituted ในน้ำกลั่นวัดกิจกรรมแข่งมอนสเตอร์ที่เหลือ กิจกรรมแข่งมอนสเตอร์ที่เหลือถูกวัดในกระบวนการเดียวกันกับที่ใช้ในของเราก่อนหน้านี้ศึกษา (อิมะมุระ et al., 2014) อย่างย่อ 100 ส่วนลงตัวจะของที่ reconstitutedโซลูชั่นแอลป์ถูกผสมกับ 2.9 mL ของส่วนผสมของปฏิกิริยาประกอบด้วย 1 M diethanolamine, 0.25 mM MgCl2 และ100 มม. p-NPP (pH 10.5) ทันทีหลังจากนั้น การเพิ่มขึ้นabsorbance ที่ 405 nm ถูกตรวจสอบที่ 37 เซลเซียส หงิม ๆ เก็บของแอลป์ในยากจะตกผลึกเมทริกซ์เช่นในบริสุทธิ์ซูโครสเมทริกซ์ถูกประเมินจากอัตราเริ่มต้นที่เพิ่มขึ้นของabsorbance 405 nmวิเคราะห์ทั้งหมดถูกทำซ้ำ หรือเพิ่มเติม สำหรับแต่ละตัวอย่างการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 การประเมินผลกระทบของการรักษาเสถียรภาพของโปรตีนที่ยากต่อการตกผลึกเมทริกซ์น้ำตาลผลโปรตีนการรักษาเสถียรภาพของที่ยากต่อการตกผลึกน้ำตาล(ซูโครส) เมทริกซ์เช่นเดียวกับน้ำตาลซูโครสอยู่คนเดียวได้รับการประเมินโดยใช้ALP โปรตีนรูปแบบ ซูโครสและตกผลึกศักยภาพยับยั้งละลายที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรและ 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรตามลำดับใน 10 มิลลิ Diethanolamine บัฟเฟอร์ (pH 9.5) สารละลายน้ำตาลซูโครสที่มีความร้อนที่ได้รับในขณะที่อธิบายไว้ข้างต้นนอกจากนี้ยังได้จัดทำ ใช้แก้ปัญหาเหล่านี้แก้ปัญหาสต็อกของภูเขา (1.2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรภูเขาที่มีกลีเซอรีน 50%) ถูกเจือจางเพื่อความเข้มข้นสุดท้ายของ 72 นาโนกรัม / มิลลิลิตร แต่ละ aliquot 100 LL ของการแก้ปัญหาที่เกิดขึ้นเป็นแห้งในลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น กลุ่มตัวอย่างแห้งที่ถูกเก็บไว้ในสูญญากาศเดซิมากกว่าซิลิกาเจลที่ 75 องศาเซลเซียสสำหรับ 1 หรือ 3 ชั่วโมง กลุ่มตัวอย่างที่ถูกถอนออกแล้วและสร้างขึ้นในน้ำกลั่นในการวัดส่วนที่เหลืออีกกิจกรรมALP กิจกรรม ALP ที่เหลือได้รับการวัดในขั้นตอนการเช่นเดียวกับที่ใช้ในก่อนหน้านี้การศึกษา(Imamura et al., 2014) ในช่วงสั้น ๆ 100 หารจะสร้างขึ้นในการแก้ปัญหาภูเขาผสมกับ2.9 มิลลิลิตรผสมปฏิกิริยาที่มีM 1 Diethanolamine, 0.25 มิลลิ MgCl2 และ100 มิลลิพีเอ็นพีพี (pH 10.5) ทันทีหลังจากนั้นเพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตรได้รับการตรวจสอบที่ 37 องศาเซลเซียส เสถียรจัดเก็บข้อมูลของภูเขาในที่ยากต่อการตกผลึกการฝึกอบรมเช่นเดียวกับในที่บริสุทธิ์เมทริกซ์ซูโครสได้รับการประเมินจากอัตราการเพิ่มขึ้นเริ่มต้นของการดูดกลืนแสงที่405 นาโนเมตร. วิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการในที่ซ้ำกันหรือมากกว่าสำหรับแต่ละตัวอย่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . การประเมินผลของโปรตีนดังกล่าวผลของยากที่จะตกผลึกน้ำตาล

เมทริกซ์โปรตีนเสถียรภาพผลของยากที่จะตกผลึกน้ำตาล
( ซูโครส ) เมทริกซ์ รวมทั้งประเมินการใช้ซูโครสคนเดียว
ALP เป็นโปรตีนแบบ ซูโครสและสารยับยั้งการตกผลึก
อาจละลายที่ความเข้มข้นสุดท้าย 50 mg / ml และ
1 mg / ml ตามลำดับใน 10 มม. ไดเอทาโนลามีนบัฟเฟอร์ pH
9.5 ) สารละลายที่มีปริมาณความร้อนที่
ที่อธิบายไว้ข้างต้น ก็เตรียม การใช้โซลูชั่นเหล่านี้
โซลูชั่นหุ้นของ ALP ( 1.2 มก. / มล. และ ALP ที่มี 50% กลีเซอรอล )
เจือจางในความเข้มข้นสุดท้าย 72 นาโนกรัม / มิลลิลิตรละ 100 จะส่วนลงตัว
ของผลแห้งในสารละลาย
ลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้นตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ในแห้งแช่แข็งสุญญากาศ
เดซิกเคเตอร์มากกว่าซิลิกาเจลที่ 75  C 1 หรือ 3 ชั่วโมง ตัวอย่าง
แล้วถอนและสร้างในน้ำกลั่นวัด
เหลือแอลป์กิจกรรม เหลือแอลป์กิจกรรม
วัดในกระบวนการเดียวกัน เช่น ถูกใช้ในการศึกษา
( อิมามุระ et al . , 2010 ) ในช่วงสั้น ๆ , 100 จะส่วนลงตัวของธรรมชาติ
แอลป์ในสารละลายผสมกับ 2.9 กรัมปฏิกิริยาที่มีส่วนผสม
1 m ไดเอทาโนลามีนชุด , 0.25 มม. และ 100 มม. p-npp
( pH 10.5 ) ทันทีหลังจากนั้น เพิ่ม
การดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตรถูกตรวจสอบที่ 37  C เสถียรภาพกระเป๋า
ของ ALP ในยากที่จะตกผลึกเมทริกซ์เป็นเมทริกซ์ชนิดบริสุทธิ์
ประเมินจากการอัตราการเพิ่มของ 405 nm ค่า

.ทั้งหมดที่วิเคราะห์ได้ในที่ซ้ำกันหรือมากกว่าในแต่ละ
ตัวอย่าง