16S rRNA gene of gram positive cocc

16S rRNA gene of gram positive cocci (11 isolates) were extracted and amplified by
using universal primer. These fragments of each species were cloned in plasmids and
preserved as clone libraries. Plasmid DNA was amplified by using M13 primer and PCR
product used as DNA template to blot on a nylon membrane. V6 region in 16S rRNA gene of
Streptococcus pneumoniae was amplified by PCR using digoxigenin-11-dUTP. PCR product
was an initial experimental probe to optimize conditions of the hybridization with the
reference DNA blotted on nylon membrane. Various anneal temperature and concentration of
SSC buffer were tested to determine optimum hybridization conditions based on visual
observation by using anti-DIG-AP conjugate, CDP-StarTM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

16S rRNA ยีนของแบคทีเรียแกรมบวก cocci (แยก 11) ถูกแยก และขยายโดยการใช้รองพื้นอเนกประสงค์ ชิ้นส่วนเหล่านี้ของแต่ละสายพันธุ์มีโคลนใน plasmids และเก็บรักษาไว้เป็นไลบรารีโคลน Plasmid DNA ถูกขยาย โดยใช้ไพรเมอร์ M13 และ PCRผลิตภัณฑ์ที่ใช้เป็นแม่แบบดีเอ็นเอเพื่อ blot บนเยื่อไนล่อน ภูมิภาค V6 ใน 16S rRNA ยีนของPneumoniae อุณหภูมิถูกขยาย โดยใช้ digoxigenin-11-dUTP PCR ผลิตภัณฑ์ PCRได้รบการทดลองเบื้องต้นเพื่อปรับเงื่อนไขการ hybridization กับการเรทดีเอ็นเอ blotted บนเมมเบรนไนลอน ต่าง ๆ หลอมอุณหภูมิและความเข้มข้นของSSC บัฟเฟอร์ที่ได้รับการทดสอบเพื่อกำหนดเงื่อนไขที่เหมาะสม hybridization อิง visualการสังเกต โดยใช้ conjugate DIG-AP, CDP-StarTM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยีน 16S rRNA กรัม cocci บวก (11 ไอโซเลท) สกัดเข้มข้นและขยายโดย
ใช้ไพรเมอร์สากล ชิ้นส่วนเหล่านี้ของแต่ละสายพันธุ์ที่ถูกโคลนในพลาสมิดและ
เก็บรักษาไว้เป็นห้องสมุดโคลน พลาสมิดดีเอ็นเอถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ M13 และ PCR
ผลิตภัณฑ์ที่ใช้เป็นแม่แบบดีเอ็นเอเพื่อลบเมมเบรนไนลอน ภูมิภาค V6 ในยีน 16S rRNA ของ
Streptococcus pneumoniae ถูกขยายโดยใช้วิธี PCR digoxigenin-11-dUTP ผลิตภัณฑ์ PCR
เป็นหัววัดการทดลองครั้งแรกเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการเงื่อนไขของการผสมข้ามพันธุ์กับ
ดีเอ็นเออ้างอิงเปื้อนเมมเบรนไนลอน อุณหภูมิหลอมต่างๆและความเข้มข้นของ
บัฟเฟอร์ SSC ได้รับการทดสอบเพื่อตรวจสอบเงื่อนไขการผสมข้ามพันธุ์ที่เหมาะสมขึ้นอยู่กับภาพ
การสังเกตโดยใช้ป้องกัน DIG-AP คอนจูเกต, CDP-StarTM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฉันและเพื่อนของฉันอยู่ togethet