he proteins are extracted from an o

he proteins are extracted from an overnight culture and purified using Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC). Naturally occurring proteins do not exhibit an affinity for chelated cobalt or nickel ions on the resin, but our scFv-AP fusion proteins do because their C-terminus contains a 6-His tag. Purification occurs in three main phases: binding of the cell lysate to the beads, washing away the unbound proteins, and selective eluting of the bound scFv-AP fusion protein. Imidazole is used to elute the captured protein off of the beads because it competes with the His-tag proteins for binding to the chelated Nickel ions. The yield and purity of the purified scFv-AP fusion proteins are measured by polyacrylamide gel electrophoresis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เขาโปรตีนที่สกัดจากวัฒนธรรมการค้างคืน และบริสุทธิ์ที่ใช้หาโลหะความสัมพันธ์ Chromatography (IMAC) ธรรมชาติโปรตีนเกิดขึ้นไม่แสดงมีความเกี่ยวข้องของ chelated นิกเกิลหรือโคบอลต์ประจุบน resin แต่โปรตีนฟิวชั่นของเรา scFv-AP ทำเนื่องจากของ C-นัสประกอบด้วยแท็ก 6 พระองค์ ฟอกที่เกิดขึ้นในระยะสามหลัก: เซลล์ lysate การปัด ชะโปรตีนผูก และเลือก eluting โปรตีนฟิวชั่น AP scFv ผูกมัด อิมิดาโซลใช้ elute โปรตีนจับออกจากเม็ดเนื่องจากจะแข่งขันกับโปรตีนของแท็กสำหรับผูกกับประจุนิกเกิล chelated ผลตอบแทนและความบริสุทธิ์ของโปรตีนบริสุทธิ์ scFv-AP ฟิวชั่นวัด โดยเจ polyacrylamide electrophoresis

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เขาโปรตีนที่สกัดจากวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนและบริสุทธิ์ใช้ตรึงโลหะ Affinity โครมาโต (IMAC) โปรตีนธรรมชาติที่เกิดขึ้นไม่แสดงความใกล้ชิดกับโคบอลต์ chelated หรือไอออนนิกเกิลบนเรซิน แต่โปรตีน scFv-AP ของเราทำเพราะ C-ปลายทางของพวกเขามี 6 แท็กของเขา การทำให้บริสุทธิ์ที่เกิดขึ้นในสามขั้นตอนหลักที่มีผลผูกพันของ lysate เซลล์เม็ดล้างออกไปไม่ได้ผูกไว้โปรตีนและ eluting เลือกของโปรตีนที่ถูกผูกไว้ฟิวชั่น scFv-AP imidazole จะใช้ในการชะโปรตีนจับออกจากลูกปัดเพราะแข่งขันกับโปรตีนของเขาแท็กสำหรับการผูกกับ chelated ไอออนนิกเกิล อัตราผลตอบแทนและความบริสุทธิ์ของบริสุทธิ์ scFv-AP โปรตีนฟิวชั่นจะถูกวัดโดยข่าวคราว polyacrylamide

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรตีนสกัดจากวัฒนธรรมเขาค้างคืนและบริสุทธิ์ใช้ตรึงโลหะ affinity chromatography ( iMac ) เกิดขึ้นตามธรรมชาติ โปรตีนไม่แสดงความสัมพันธ์กันสำหรับคีเลต โคบอลต์ หรือนิกเกิลไอออนในเรซิน แต่ scfv ฟิวชั่นเอพีโปรตีนของเรา เพราะ c-terminus ของพวกเขาประกอบด้วย 6-his แท็ก บริสุทธิ์เกิดขึ้นใน 3 ขั้นตอนหลัก : ผูกเซลล์ lysate กับลูกปัดซักผ้าไปจับกับโปรตีน และใช้ hexane ของผูกพัน scfv AP ของโปรตีน . อิมิดาโซลใช้ elute ที่จับโปรตีนออกจากเม็ดเพราะมันแข่งขันกับเขาแท็กโปรตีนเพื่อจับกับไอออนนิกเกิล คีเลต . ผลผลิตและความบริสุทธิ์ของบริสุทธิ์ scfv AP ฟิวชั่นโปรตีนจะถูกวัดโดย polyacrylamide gel electrophoresis .