The IFAT is conducted directly afte

The IFAT is conducted directly after virus isolation in cell culture.
i) Prepare monolayers of cells on cover-slips to reach approximately 80% confluence, which is
usually achieved within 24 hours of incubation at 25°C. The FBS content of cell culture medium
is reduced to 2%.
ii) When the cell monolayers are ready, inoculate the virus suspension to be identified at tenfold
dilution steps by adding directly into the cell culture wells or flasks.
iii) Incubate at 25°C for 24–72 hours.
iv) When CPE appears, remove the cell culture medium, rinse three times with phosphate-buffered
saline (PBS). Air-dry the infected cells and fix with cold acetone (stored at –20°C) for 10 minutes.
v) Allow the cell monolayers to air-dry for at least 30 minutes and process immediately or freeze at –20°C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

IFAT จะดำเนินการโดยตรงหลังจากแยกไวรัสในเซลล์i) เตรียม monolayers เซลล์บนใบปกคลุมถึงประมาณ 80% บรรจบ ซึ่งเป็นปกติได้ภายใน 24 ชั่วโมงของการบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส เนื้อหาของเซลล์วัฒนธรรมกลาง FBSจะลดลงไป 2%ii) เมื่อ monolayers เซลล์พร้อม ฉีดระงับไวรัสจะระบุที่สิบเท่าขั้นตอนการเจือจาง โดยการเพิ่มลงในเซลล์โดยตรงวัฒนธรรมหลุมหรือขวดiii) ฟักที่ 25 ° C สำหรับ 24 – 72 ชั่วโมงiv) เมื่อ CPE ปรากฏ เอาสื่อวัฒนธรรมเซลล์ ล้าง 3 ครั้งด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS) Air-dry เซลล์ที่ติดเชื้อ และแก้ไข ด้วยอะซีโตนเย็น (เก็บไว้ที่ 20 ° C) 10 นาทีv) อนุญาต monolayers เซลล์ air-dry อย่างน้อย 30 นาที และดำเนินการโดยทันที หรือแช่แข็งที่อุณหภูมิ –20 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

IFAT จะดำเนินการโดยตรงหลังจากการแยกเชื้อไวรัสในเซลล์เพาะเลี้ยง.
i) การเตรียมความพร้อมของ monolayers เซลล์บนปกหลุดไปถึงจุดบรรจบประมาณ 80% ซึ่ง
มักจะประสบความสำเร็จภายใน 24 ชั่วโมงของการบ่มที่ 25 ° C เนื้อหา FBS ของกลางการเพาะเลี้ยงเซลล์
จะลดลงไป 2%.
ii) เมื่อ monolayers เซลล์พร้อมฉีดวัคซีนระงับไวรัสที่จะระบุที่สิบเท่า
ขั้นตอนการเจือจางโดยการเพิ่มโดยตรงลงในบ่อเพาะเลี้ยงเซลล์หรือขวด.
iii) บที่ 25 ° C เป็นเวลา 24-72 ชั่วโมง.
IV) เมื่อ CPE ปรากฏเอาอาหารเลี้ยงเซลล์ล้างสามครั้งด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์
น้ำเกลือ (พีบีเอส) แห้งเซลล์ที่ติดเชื้อและแก้ไขด้วยอะซิโตนเย็น (เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 ° C) เป็นเวลา 10 นาที.
V) อนุญาต monolayers เซลล์ที่ที่มีอากาศแห้งอย่างน้อย 30 นาทีและกระบวนการทันทีหรือแช่แข็งที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ ifat จะดําเนินการโดยตรงหลังจากการแยกเชื้อไวรัสในเซลล์เพาะเลี้ยงผมเตรียม monolayers ของเซลล์บนปกหลุดไปถึงประมาณ 80% ซึ่งบรรจบมักจะเกิดขึ้นภายใน 24 ชั่วโมงของการบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C FBS เนื้อหาของเซลล์ปานกลางลดลง 2 เปอร์เซ็นต์2 ) เมื่อเซลล์ monolayers พร้อมฉีดวัคซีนไวรัสระงับการระบุที่โตขั้นตอนการเพิ่มโดยตรงลงในเซลล์ เวลส์ หรือขวด .3 ) พักที่ 25 ° C เป็นเวลา 24 - 72 ชั่วโมง4 ) เมื่อถุงจะลบเซลล์ที่เพาะเลี้ยงขนาดกลางล้างสามครั้งด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ ( PBS ) อากาศแห้ง เซลล์ที่ติดเชื้อ และแก้ไขด้วยอะซีโทนเย็น ( อุณหภูมิ - 20 ° C ) เป็นเวลา 10 นาที5 ) ช่วยให้เซลล์ monolayers อากาศแห้งอย่างน้อย 30 นาที และกระบวนการได้ทันทีหรือแช่แข็งที่ - 20 องศา