We developed an approach for gene t

We developed an approach for gene therapy of haemophilia B with
the aim of overcoming some of the obstacles faced by the previous
AAV-based haemophilia B clinical trials. A codon-optimised version of
the human FIX (hFIXco) gene was synthesised to maximise the protein
expression in vivo by increasing the translational efficiency of the FIX
gene. Codons were modified according to the codon usage of highly expressed human genes, without changing the amino acids of the synthesised
protein. The hFIXco genewas cloned downstream of a compact
synthetic liver-specific promoter (LP1) to enable packaging into selfcomplementary
AAV vectors (scAAV) (Fig. 3), which have a packaging
capacity of approximately 2.3 kb [22] but appear to be more potent at
mediating gene transfer than conventional single-stranded AAV
vectors, which have to be converted to a double stranded form, a process
that requires either inter-molecular annealing or second strand
synthesis. In contrast, a self-complementary AAV vector contains both
the coding and complementary sequence of the transgene expression cassette within a single virion. This DNA structure can readily fold into
transcriptionally active double-stranded DNA after uncoating of the
vector. Our preclinical studies in mice and non-human primates
(NHP) showed that scAAV vectors were more potent than comparable
single-stranded AAV (ssAAV) vectors, thus raising the possibility of
achieving therapeutic levels of FIX using lower and potentially safer
doses of vector [22,23].
Another critical aspect of our study was the use of vectors
pseudotyped with AAV serotype 8 capsid. This offered several potential
advantages over strategies using AAV2 vectors. In particular, the remarkable
liver tropism of AAV8 was exploited to enable efficient transduction
of the hepatocytes following administration of the vector in the
peripheral circulation [23,24,29]. This simple non-invasive route of vector
administration is much safer for patients with a bleeding diathesis
when compared to procedures for selective catheterisation of the hepatic
vessels required for delivery of vector in the vicinity of the liver,which
is the native site for FIX synthesis. Additionally, the lower seroprevalence
of AAV8 in humans (~25% compared with over 70% for AAV2
[25], enabled us to exclude subjectswith pre-existing humoral immunity
to AAV8 from participating in the trial, thus reducing the risk of
in-vivo transduction of the liver being blocked by the presence of
neutralising anti-AAV8 antibodies.
Six subjects with severe haemophilia B were enrolled to the initial
phase of this study with two subjects recruited sequentially at one of
three vector doses (low 2 × 1011 vg/kg, intermediate 6 × 1011 vg/kg, or
high dose 2 × 1012 vg/kg) of scAAV2/8-LP1-hFIXco. Subsequently, four
additional severe haemophilia B subjects (FIX b1%) were enrolled to
the high-dose level to better understand the kinetic of transgene expression.
A dose-dependent increase in circulating FIX expression at 1–6% of
normal was established in all ten subjectswith follow-up period extending
to 4 years [26,27]. At the higher dose, a remarkably consistent rise in
FIX activity to 5.1 ± 1.7% was observed in all 6 subjects. Asymptomatic,
transient elevation of serum liver enzymes, likely a result of a cellular
immune response to the AAV8 capsid, was observed between weeks 7
and 10 following gene transfer in four of six high-dose subjects. Treatment
of each with a short course of prednisolone, led to rapid normalisation
of liver enzymes and maintenance of FIX levels in the 2–4% range.
Four of the 7 subjects whowere on prophylaxis before gene transfer
were able to stop regular FIX replacement therapy, whilst most of the
otherswere able to increase the interval between prophylactic FIX infusions.
The overall reduction in FIX usage over the duration of the study
in the 10 subjects recruited is N3 million units thus far, resulting in a financial
saving that is in excess of N£2.5 M. Despite the reduction in FIX
usage, the average annual bleeding rate was consistently lower after
gene transfer, most notably in patients in the high-dose cohort
who achieved steady state FIX expression at around 5% of normal.
Importantly, this reduction in annual bleeding rate occurred on a background
of higher overall physical activity levels reported by all subjects,
which included participation in sporting activities that had previously
been associatedwith bleeding. This is consistentwith the natural bleeding
history in mild haemophilia patients (FIX levels of between 5 and
40%)where bleeding episodes generally only occurs after trauma or surgery
with very few or no spontaneous bleeds [28]. Importantly with a
median follow-up of 3.2 ± 1 years, late toxicities from gene therapy
have not been observed.
This, the largest experience with AAV8-mediated gene transfer in
humans, shows that it is possible to achieve durable FIX expression
and long-lasting amelioration of the bleeding diathesis in subjects
with severe haemophilia B following a single systemic administration
of vector. The safety of the approach has been encouraging with the
main vector related adverse event being a rise in liver enzymes that
can be readily attenuated by a short tapering course of prednisolone.
Cessation of prednisolone is not followed by a late rise in liver enzymes
or reduction in transgene expression, presumably because capsid antigen
has likely been degraded and cleared from the remaining transduced
hepatocytes by this point. This therefore represents the first
unequivocal evidence of success in gene therapy for haemophilia B.
Our results provide a solid platform for the further development of
AAV mediated gene transfer for the haemophilias as well as other
disorders including lysosomal storage disorders and inborn errors of
metabolism such as phenylketonuria. Two haemophilia B clinical trials
using slightly different variation of our approach are currently underway
for haemophilia B (Table 2). The first entails the use of a selfcomplementary
AAV8 vector carrying the FIX Padua, a factor IX variant with increased specific activity, administrated by peripheral vein infusion
(Sponsored by Baxter) [54,55]. The second trial, spearheaded by
the Spark Therapeutics based in Philadelphia, uses a single stranded
AAV expression cassette encoding FIX pseudotyped with serotype 8
capsid protein. Formal reporting of the safety and efficacy of both
these trials is awaited.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราพัฒนาวิธีการสำหรับการบำบัดยีนของโรคฮีโมฟิเลียบีด้วยเป้าหมายของอุปสรรคที่ต้องเผชิญ โดยก่อนหน้ามากเพียงใดใช้ AAV โรคฮีโมฟิเลียบีคลินิก รุ่นเหมาะงานกราฟฟิกรหัสพันธุกรรมของยีน (hFIXco) การแก้ไขมนุษย์ถูก synthesised เพื่อเพิ่มโปรตีนในสัตว์ทดลอง โดยการเพิ่มประสิทธิภาพของการแก้ไข translational นิพจน์ยีน Codons ได้ปรับเปลี่ยนตามการใช้งานรหัสพันธุกรรมของยีนมนุษย์แสดงสูง โดยไม่ต้องเปลี่ยนกรดอะมิโนของที่ synthesisedโปรตีน HFIXco genewas โคลนน้ำของคอมแพคสังเคราะห์ตับเฉพาะโปรโมเตอร์ (LP1) ให้บรรจุลงใน selfcomplementaryAAV เวกเตอร์ (scAAV) (Fig. 3), ซึ่งมีการบรรจุภัณฑ์จุประมาณ 2.3 kb [22] แต่ต้องมีศักยภาพที่มากขึ้นเป็นสื่อกลางถ่ายโอนยีนกว่า AAV ควั่นเดียวธรรมดาเวกเตอร์ ที่ได้ถูกแปลงเป็นคู่ตกค้างแบบ กระบวนการที่ต้องการอบเหนียวระหว่างโมเลกุลหรือสองสแตรนด์สังเคราะห์ ในทางตรงกันข้าม เวกเตอร์ AAV ตนเองเสริมประกอบด้วยทั้งลำดับรหัส และเพิ่มเติมของเทปนิพจน์ transgene ภายใน virion เดียว โครงสร้างดีเอ็นเอนี้สามารถพับไปพร้อมtranscriptionally งานขนคู่ดีเอ็นเอหลังจาก uncoating ของแบบเวกเตอร์ ของเราการศึกษาในหนูและไม่ใช่มนุษย์ primates preclinical(NHP) แสดงให้เห็นว่า เวกเตอร์ scAAV ได้มีศักยภาพมากขึ้นกว่าเทียบเท่าขนเดี่ยว AAV (ssAAV) เวกเตอร์ จึง เพิ่มความเป็นไปได้ของระดับการรักษาแก้ไขใช้ต่ำ และปลอดภัยอาจบรรลุปริมาณของเวกเตอร์ [22,23]สำคัญด้านการศึกษาของเราได้ใช้ของเวกเตอร์pseudotyped กับ AAV capsid serotype 8 นี้นำเสนอศักยภาพหลายข้อได้เปรียบกว่ากลยุทธ์โดยใช้เวกเตอร์ AAV2 โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ที่โดดเด่นการเบนของพืชตับของ AAV8 ที่สามารถให้ประสิทธิภาพ transductionของ hepatocytes ต่อบริหารเวกเตอร์ในการอุปกรณ์ต่อพ่วงหมุนเวียน [23,24,29] เส้นทางนี้ไม่รุกรานอย่างของเวกเตอร์ดูแลจะปลอดภัยมากสำหรับผู้ป่วยที่มี diathesis มีเลือดออกเมื่อเทียบกับวิธีการใช้ catheterisation ของตับเรือที่จำเป็นสำหรับการจัดส่งของเวกเตอร์อีกตับ ซึ่งเว็บไซต์ท้องถิ่นสำหรับสังเคราะห์แก้ไขได้ นอกจากนี้ seroprevalence ล่างของ AAV8 ในมนุษย์ (~ 25% เมื่อเทียบกับกว่า 70% สำหรับ AAV2[25], เราสามารถแยก humoral subjectswith เตรียมภูมิคุ้มกันAAV8 จากการมีส่วนร่วมในการทดลอง การลดความเสี่ยงของใน vivo transduction ของตับที่ถูกบล็อก โดยสถานะของneutralising แอนตี้ต่อต้าน-AAV8เรื่องที่หกกับรุนแรงโรคฮีโมฟิเลียบีได้ลงทะเบียนเพื่อเริ่มต้นการขั้นตอนของการศึกษานี้มีสองเรื่องที่พิจารณาตามลำดับที่สามเวกเตอร์ปริมาณ (ต่ำ 2 × 1011 vg/kg กลาง 6 × 1011 vg/kg หรือปริมาณรังสีสูง 2 × 1012 vg/kg) ของ scAAV2/8-LP1-hFIXco ในเวลาต่อมา 4เรื่องโรคฮีโมฟิเลียรุนแรงเพิ่มเติม B (แก้ไข b1%) ถูกลงทะเบียนไประดับยาสูงให้ความเข้าใจเดิม ๆ ของนิพจน์ transgeneเพิ่มขึ้นหมุนเวียนแก้ไขนิพจน์ที่ 1 – 6% ของปริมาณขึ้นอยู่กับปกติก่อทั้งหมดสิบ subjectswith ติดตามผลรอบระยะเวลาขยาย4 ปี [26,27] ในปริมาณสูง ขึ้นสอดคล้องกันอย่างยิ่งแก้ไขกิจกรรม 5.1 ± 1.7% ถูกตรวจสอบในทุกหัวข้อที่ 6 แสดงอาการชั่วคราวยกระดับเอนไซม์ตับเซรั่ม ผลมีแนวโน้มของโทรศัพท์เคลื่อนภูมิคุ้มกันตอบสนอง AAV8 capsid ถูกตรวจสอบระหว่างสัปดาห์ที่ 7และ 10 ต่อถ่ายโอนยีนในเรื่องปริมาณรังสีสูงหกสี่ รักษาของแต่ละหลักสูตรระยะสั้นของ prednisolone นำไปอย่างรวดเร็ว normalisationเอนไซม์ตับและบำรุงรักษาแก้ไขระดับในช่วง 2 – 4%สี่ whowere 7 เรื่องบน prophylaxis ก่อนโอนย้ายยีนสามารถหยุดปกติแก้ไขบำบัดทดแทน ขณะที่ส่วนใหญ่ของการotherswere สามารถเพิ่มช่วงทานแก้ไข infusionsการลดโดยรวมในการใช้แก้ไขช่วงระยะเวลาของการศึกษาในหัวข้อ 10 พิจารณาคือ N3 ล้านหน่วยฉะนี้ เกิดการเงินบันทึกที่มีขนาดเกินกว่า N£ 2.5 M แม้ มีการลดลงในการแก้ไขการใช้งาน อัตราการมีเลือดออกประจำปีเฉลี่ยถูกลดลงอย่างต่อเนื่องหลังจากโอนย้ายยีน ส่วนใหญ่ในผู้ป่วยใน cohort ยาสูงใครได้ท่อนแก้ไขนิพจน์ที่ประมาณ 5% ของปกติสำคัญ อัตรารายปีมีเลือดออกที่ลดลงนี้เกิดขึ้นบนพื้นหลังof higher overall physical activity levels reported by all subjects,which included participation in sporting activities that had previouslybeen associatedwith bleeding. This is consistentwith the natural bleedinghistory in mild haemophilia patients (FIX levels of between 5 and40%)where bleeding episodes generally only occurs after trauma or surgerywith very few or no spontaneous bleeds [28]. Importantly with amedian follow-up of 3.2 ± 1 years, late toxicities from gene therapyhave not been observed.This, the largest experience with AAV8-mediated gene transfer inhumans, shows that it is possible to achieve durable FIX expressionand long-lasting amelioration of the bleeding diathesis in subjectswith severe haemophilia B following a single systemic administrationof vector. The safety of the approach has been encouraging with themain vector related adverse event being a rise in liver enzymes thatcan be readily attenuated by a short tapering course of prednisolone.Cessation of prednisolone is not followed by a late rise in liver enzymesor reduction in transgene expression, presumably because capsid antigenhas likely been degraded and cleared from the remaining transducedhepatocytes by this point. This therefore represents the firstunequivocal evidence of success in gene therapy for haemophilia B.Our results provide a solid platform for the further development ofAAV mediated gene transfer for the haemophilias as well as otherdisorders including lysosomal storage disorders and inborn errors ofmetabolism such as phenylketonuria. Two haemophilia B clinical trialsusing slightly different variation of our approach are currently underwayfor haemophilia B (Table 2). The first entails the use of a selfcomplementaryAAV8 vector carrying the FIX Padua, a factor IX variant with increased specific activity, administrated by peripheral vein infusion(Sponsored by Baxter) [54,55]. The second trial, spearheaded bythe Spark Therapeutics based in Philadelphia, uses a single strandedAAV expression cassette encoding FIX pseudotyped with serotype 8capsid protein. Formal reporting of the safety and efficacy of boththese trials is awaited.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราได้พัฒนาวิธีการสำหรับการรักษาด้วยยีนของฮีโมฟีเลียบีมีจุดมุ่งหมายในการเอาชนะบางส่วนของอุปสรรคที่ต้องเผชิญโดยก่อนหน้านี้ใรAAV ตาม B การทดลองทางคลินิก รุ่น codon ที่ดีที่สุดของการแก้ไขของมนุษย์(hFIXco) ยีนสังเคราะห์เพื่อเพิ่มโปรตีนแสดงออกในร่างกายโดยการเพิ่มประสิทธิภาพของการแปลแก้ไขยีน codons ถูกปรับเปลี่ยนตามการใช้งานของ codon แสดงสูงยีนของมนุษย์โดยไม่ต้องเปลี่ยนกรดอะมิโนในการสังเคราะห์โปรตีน hFIXco genewas โคลนล่องกะทัดรัดตับเฉพาะสังเคราะห์ก่อการ(LP1) เพื่อเปิดใช้บรรจุภัณฑ์เข้า selfcomplementary เวกเตอร์ AAV (scAAV) (รูป. 3) ที่มีบรรจุภัณฑ์ที่มีความจุประมาณ2.3 กิโลไบต์ [22] แต่ดูเหมือนจะมีศักยภาพมากขึ้นในการถ่ายโอนยีน mediating กว่าเดียวควั่นธรรมดา AAV เวกเตอร์ซึ่งจะต้องมีการแปลงเป็นรูปแบบที่ติดอยู่คู่กระบวนการที่ต้องใช้ทั้งการหลอมระหว่างโมเลกุลหรือสองฝั่งสังเคราะห์ ในทางตรงกันข้ามเวกเตอร์ AAV ตัวเองที่สมบูรณ์มีทั้งการเข้ารหัสและลำดับที่สมบูรณ์ของเทปการแสดงออกของยีนภายในvirion เดียว โครงสร้างดีเอ็นเอนี้พร้อมที่สามารถพับเป็นดีเอ็นเอเกลียวคู่ที่ใช้งาน transcriptionally หลังจาก uncoating ของเวกเตอร์ การศึกษาพรีคลินิกของเราในหนูและลิงที่ไม่ใช่มนุษย์(NHP) พบว่าพาหะ scAAV มีศักยภาพมากขึ้นกว่าเทียบเคียงAAV เดียวควั่น (ssAAV) เวกเตอร์จึงเพิ่มความเป็นไปได้ของการบรรลุระดับการรักษาของการแก้ไขโดยใช้ลดลงและอาจเกิดความปลอดภัยมากขึ้นปริมาณเวกเตอร์[ 22,23]. อีกด้านที่สำคัญของการศึกษาของเราคือการใช้เวกเตอร์pseudotyped กับ serotype AAV 8 capsid ที่อาจเกิดขึ้นนี้นำเสนอหลายข้อได้เปรียบกว่าการใช้กลยุทธ์เวกเตอร์ AAV2 โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่โดดเด่นtropism ตับ AAV8 ถูกใช้ประโยชน์เพื่อให้สามารถใช้พลังงานที่มีประสิทธิภาพของเซลล์ตับต่อไปนี้การบริหารงานของเวกเตอร์ในการไหลเวียนของอุปกรณ์ต่อพ่วง[23,24,29] เส้นทางนี้ไม่รุกรานที่เรียบง่ายของเวกเตอร์การบริหารงานเป็นอย่างมากที่ปลอดภัยสำหรับผู้ป่วยที่มีเลือดออก diathesis เมื่อเปรียบเทียบกับวิธีการในการเลือกของ catheterisation ตับเรือที่จำเป็นสำหรับการจัดส่งของเวกเตอร์ในบริเวณใกล้เคียงของตับซึ่งเป็นเว็บไซต์พื้นเมืองสำหรับการสังเคราะห์การแก้ไข นอกจากนี้ความชุกต่ำของ AAV8 ในมนุษย์ (~ 25% เมื่อเทียบกับ 70% สำหรับ AAV2 [25], ช่วยให้เราสามารถที่จะไม่รวม subjectswith ภูมิคุ้มกันของร่างกายที่มีอยู่ก่อนที่จะAAV8 จากการเข้าร่วมในการพิจารณาคดีจึงลดความเสี่ยงของในร่างกายพลังงานของตับที่ถูกบล็อกโดยการปรากฏตัวของneutralizing แอนติบอดีต่อต้าน AAV8. หกวิชาที่มีบีฮีโมฟีเลียที่รุนแรงได้รับการคัดเลือกจะเริ่มต้นขั้นตอนของการศึกษาครั้งนี้มีสองเรื่องได้รับคัดเลือกตามลำดับที่หนึ่งในสามปริมาณเวกเตอร์(ต่ำ 2 × 1011 vg / กก กลาง 6 × 1011 vg / กก. หรือขนาดสูง2 × 1012 vg / กิโลกรัม) scAAV2 / 8 LP1-hFIXco. ต่อจากนั้นสี่เพิ่มเติมวิชาB ใรรุนแรง (แก้ไข b1%) ได้รับการคัดเลือกที่จะอยู่ในระดับที่สูงปริมาณการทำความเข้าใจเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวการแสดงออกของยีน. เพิ่มขึ้นขึ้นอยู่กับปริมาณการไหลเวียนของการแสดงออกในการแก้ไขที่ 1-6% ของปกติก่อตั้งขึ้นในทั้งสิบsubjectswith ติดตามการขยายระยะเวลาถึง4 ปี [26,27]. ในปริมาณที่สูงขึ้น เพิ่มขึ้นอย่างน่าทึ่งที่สอดคล้องกันในกิจกรรมการแก้ไข5.1 ± 1.7% พบว่าใน 6 วิชา โรคสูงชั่วคราวของเอนไซม์ในตับซีรั่มน่าจะเป็นผลมาจากโทรศัพท์มือถือที่ตอบสนองของภูมิคุ้มกันกับcapsid AAV8 ถูกตั้งข้อสังเกตระหว่างสัปดาห์ที่ 7 และ 10 การถ่ายโอนยีนต่อไปนี้ในสี่หกวิชาขนาดสูง การรักษาของแต่ละคนมีหลักสูตรระยะสั้นของ prednisolone นำไปสู่การฟื้นฟูอย่างรวดเร็วของเอนไซม์ในตับและการบำรุงรักษาระดับการแก้ไขอยู่ในช่วง2-4%. สี่ของ 7 วิชา whowere ในการป้องกันโรคก่อนที่จะถ่ายโอนยีนก็สามารถที่จะหยุดการบำบัดทดแทนการแก้ไขปกติในขณะที่ส่วนใหญ่ของotherswere สามารถที่จะเพิ่มช่วงเวลาระหว่างเงินทุนการแก้ไขป้องกันโรคได้. ลดลงโดยรวมในการใช้งานการแก้ไขในช่วงระยะเวลาของการศึกษาใน 10 วิชาที่ได้รับคัดเลือกเป็น N3 ล้านหน่วยป่านนี้ผลในทางการเงินการออมที่อยู่ในส่วนที่เกินจากไม่มี£ 2.5 เมตรแม้จะมีการลดลงในการแก้ไขปัญหาการใช้งาน, อัตราการมีเลือดออกเป็นประจำทุกปีอย่างต่อเนื่องเฉลี่ยที่ลดลงหลังจากการถ่ายโอนยีนโดดเด่นที่สุดในผู้ป่วยในการศึกษาขนาดสูงที่ประสบความสำเร็จมั่นคงของรัฐแสดงออกการแก้ไขที่ประมาณ 5% ของปกติ. ที่สำคัญการลดลงนี้ มีเลือดออกในอัตราประจำปีที่เกิดขึ้นบนพื้นหลังของระดับการออกกำลังกายโดยรวมสูงกว่าที่รายงานโดยทุกวิชาซึ่งรวมถึงการมีส่วนร่วมในกิจกรรมกีฬาที่เคยรับassociatedwith เลือดออก นี่คือ consistentwith เลือดออกตามธรรมชาติประวัติศาสตร์ในผู้ป่วยฮีโมฟีเลียอ่อน(ระดับของการแก้ไขระหว่าง 5 และ40%) ที่มีเลือดออกตอนโดยทั่วไปเกิดขึ้นหลังจากการบาดเจ็บหรือการผ่าตัดมีน้อยมากหรือไม่มีเลยเลือดที่เกิดขึ้นเอง[28] ที่สำคัญที่มีการติดตามเฉลี่ย 3.2 ± 1 ปีที่ผ่านมาความเป็นพิษปลายจากยีนบำบัดยังไม่ได้รับการปฏิบัติ. นี้ประสบการณ์ที่ใหญ่ที่สุดที่มีการถ่ายโอนยีน AAV8 สื่อกลางในมนุษย์แสดงให้เห็นว่ามันเป็นไปได้ที่จะบรรลุการแสดงออกของการแก้ไขความทนทานและยาวการเยียวยาที่ยั่งยืนของ diathesis เลือดออกในวิชาที่มีฮีโมฟีเลียบีรุนแรงต่อไปนี้การบริหารระบบเดียวของเวกเตอร์ ความปลอดภัยของวิธีการที่ได้รับการส่งเสริมให้กับเวกเตอร์หลักของเหตุการณ์ไม่พึงประสงค์ที่เกี่ยวข้องกับการเป็นการเพิ่มขึ้นของเอนไซม์ในตับที่สามารถยับยั้งได้อย่างง่ายดายโดยหลักสูตรเรียวสั้นprednisolone. เลิกของ prednisolone ไม่ได้ตามด้วยการเพิ่มขึ้นในช่วงปลายเอนไซม์ในตับหรือลดลงในแสดงออกของยีนคงเพราะแอนติเจน capsid ได้รับน่าจะสลายตัวและล้างออกจากส่วนที่เหลืออีก transduced เซลล์ตับจากจุดนี้ นี้จึงแสดงให้เห็นถึงครั้งแรกที่มีหลักฐานที่ชัดเจนของความสำเร็จในการรักษาด้วยยีนฮีโมฟีเลียบีผลของเราให้เป็นแพลตฟอร์มที่มั่นคงสำหรับการพัฒนาต่อไปของAAV การถ่ายโอนยีนสื่อกลางสำหรับ haemophilias เช่นเดียวกับคนอื่น ๆความผิดปกติรวมถึงความผิดปกติของการจัดเก็บ lysosomal และข้อผิดพลาดมา แต่กำเนิดของการเผาผลาญอาหารเช่นphenylketonuria ฮีโมฟีเลียบีสองการทดลองทางคลินิกโดยใช้รูปแบบที่แตกต่างกันเล็กน้อยจากวิธีการของเราอยู่ในขณะนี้กำลังอยู่ระหว่างการหาฮีโมฟีเลียบี(ตารางที่ 2) ครั้งแรกที่ส่งผลการใช้ selfcomplementary AAV8 เวกเตอร์แบกแก้ไขปาดัวเป็นปัจจัยที่แตกต่างทรงเครื่องกับกิจกรรมเฉพาะที่เพิ่มขึ้นปกครองโดยการแช่หลอดเลือดดำต่อพ่วง(สนับสนุนโดยแบ็กซ์เตอร์) [54,55] การพิจารณาคดีที่สองทันสมัยโดยบำบัด Spark อยู่ในฟิลาเดลใช้ควั่นเดียวเข้ารหัสแสดงออกAAV เทปการแก้ไข pseudotyped กับ serotype 8 โปรตีน capsid การรายงานอย่างเป็นทางการของความปลอดภัยและประสิทธิภาพของทั้งสองการทดลองเหล่านี้ที่รอคอย