The couple was extensively counsele

The couple was extensively counseled before deciding to proceed with PGD. Blood samples from the
proband, the parents and the grandparents were used for genotype and haplotype analysis. From each
sample, both genomic DNA and single lymphocytes were isolated for the standardization of procedures.
For the purpose of PGD, four Short Tandem Repeat (STR) markers closely linked to the HEXA gene were
used as already described elsewhere (Altarescu et al., 2007). These were carefully selected following an
initial workup with a number of STR markers, so that they would be informative for the family and
flanking the HEXA gene (in order, D15S204 and TS-AAAT are 5′ and D15S215 and D15S169 are 3′ to the
gene). Initial multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification of all four STR's was followed by
hemi-nested PCR. The reactions of 50 μl were set up for each step using Multiplex HotStart Taq (Qiagen,
Germany) according to the manufacturer's instructions. In the hemi-nested reactions, the internal forward
primers were labeled with fluorescent dyes and products were analyzed on an ABI 3130XL genetic
analyzer

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คู่ถูกอย่างกว้างขวางแนะก่อนตัดสินใจจะดำเนินการ PGD ตัวอย่างจากเลือดproband มารดาและปู่ย่าตายายที่ใช้สำหรับวิเคราะห์ haplotype และลักษณะทางพันธุกรรม จากแต่ละตัว อย่าง ทั้ง genomic DNA และ lymphocytes เดียวถูกแยกสำหรับมาตรฐานของขั้นตอนเพื่อ PGD มีเครื่องหมายทำซ้ำตัวตามกันไปของสั้น (STR) สี่ที่เชื่อมโยงอย่างใกล้ชิดกับยีน HEXAใช้เป็นแล้วอธิบายอื่น (Altarescu et al., 2007) เหล่านี้ถูกเลือกอย่างระมัดระวังต่อการเริ่มต้น workup กับจำนวนเครื่องหมาย STR เพื่อว่าพวกเขาจะเป็นข้อมูลสำหรับครอบครัว และflanking ยีน HEXA (ลำดับ D15S204 และ TS AAAT 5′ และ D15S215 และ D15S169 3′ เพื่อยีน) ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) multiplex เริ่มขยายของสี่ของ STR ทั้งหมดได้ตามPCR ซีกซ้อนกัน ปฏิกิริยาของ 50 μl ถูกตั้งค่าสำหรับแต่ละขั้นตอนใช้ Multiplex HotStart Taq (Qiagenเยอรมนี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในการซ้อนซีกปฏิกิริยา ไปข้างหน้าภายในไพรเมอร์ถูกป้าย ด้วยสีเรืองแสง และมีวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ใน 3130XL ABI พันธุกรรมวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งคู่ได้รับการให้คำปรึกษาอย่างกว้างขวางก่อนที่จะตัดสินใจดำเนินการกับการทำพีจีดี ตัวอย่างเลือดจาก
Proband พ่อแม่และปู่ย่าตายายถูกนำมาใช้สำหรับจีโนไทป์และ haplotype วิเคราะห์ จากแต่ละ
กลุ่มตัวอย่างทั้งดีเอ็นเอและลิมโฟไซต์เดียวที่แยกสำหรับมาตรฐานของวิธีการ
เพื่อประโยชน์ในการทำพีจีดีสี่สั้นตีคู่ซ้ำ (STR) เครื่องหมายการเชื่อมโยงอย่างใกล้ชิดกับยีน HEXA ถูก
นำมาใช้ตามที่อธิบายไว้แล้วที่อื่น ๆ (Altarescu et al., 2007) เหล่านี้ได้รับการคัดเลือกอย่างระมัดระวังต่อไปนี้
workup เริ่มต้นด้วยหมายเลขของเครื่องหมาย STR เพื่อที่ว่าพวกเขาจะมีข้อมูลสำหรับครอบครัวและ
ขนาบข้างยีน HEXA (ตามลำดับ D15S204 และ TS-AAAT เป็น 5 'และ D15S215 และ D15S169 3' เพื่อ
ยีน) เริ่มต้นปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ Multiplex (PCR) การขยายของทั้งสี่ของ STR ตามมาด้วย
ครึ่ง-PCR ที่ซ้อนกัน ปฏิกิริยา 50 ไมโครลิตรถูกตั้งขึ้นสำหรับขั้นตอนการใช้ Multiplex HotStart Taq (Qiagen แต่ละ
เยอรมนี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในปฏิกิริยาครึ่ง-ซ้อนกันไปข้างหน้าภายใน
ไพรเมอร์ได้รับการติดฉลากด้วยสีเรืองแสงและผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการวิเคราะห์ในทางพันธุกรรม ABI 3130XL
วิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คู่เป็นอย่างกว้างขวางให้คำปรึกษาก่อนตัดสินใจทำ PGD . ตัวอย่างเลือดจาก
proband พ่อแม่และปู่ย่าตายายที่ใช้คือพันธุกรรมและการวิเคราะห์พบ . จากแต่ละ
ตัวอย่างดีเอ็นเอถูกทำลายทั้งเดี่ยวและแยกสำหรับมาตรฐานของขั้นตอน
เพื่อ PGD สี่ซ้ำควบคู่สั้น ( STR ) เครื่องหมายเชื่อมโยงอย่างใกล้ชิดกับหกยีนถูก
ใช้ตามที่อธิบายไว้แล้วในที่อื่น ๆ ( altarescu et al . , 2007 ) เหล่านี้ถูกเลือกอย่างระมัดระวังตาม
ตรวจสอบเริ่มต้นด้วยหมายเลขของ STR markers , ดังนั้นพวกเขาจะเป็นข้อมูลสำหรับครอบครัวและ
จเยีน ( ในใบสั่ง และ d15s204 ts-aaat 5 และ 3 และได้รับ d15s215 d15s169 ’กับ
ยีน )เริ่มต้นแบบปฏิกิริยาลูกโซ่แบบสี่ STR ก็ตาม
Hemi อยู่ PCR ปฏิกิริยาของ 50 μผมตั้งของแต่ละขั้นตอน โดยใช้มัลติ hotstart แท็ค ( QIAGEN
, เยอรมนี ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ซ้อนกันในครึ่งปฏิกิริยา
ส่งต่อภายในไพรเมอร์ถูกป้ายด้วยสีเรืองแสงและผลิตภัณฑ์ วิเคราะห์เกี่ยวกับ ABI 3130xl
วิเคราะห์พันธุกรรม