3.1.3. Transformation of E. coliAft

3.1.3. Transformation of E. coli
After linking with gfp fragment by T4 ligase, the recycled 4.8 kb fragment was transformed to E.coli. The bacterial colony growing on the chloramphenicol medium was showed in Fig. 6. Extracted transformant plasmid was used to recombine the plasmid through enzyme digestionwithHindIII and ECOlI, which was linked with the two fragments to produce two new fragments with the same size of 6.8 kb (detected by electrophoresis). The size of the plasmids indicated the right insertion.

3.1.4. GFP transformation of F. oxysporum strain F-H.SY0975
3.1.4.1. Preparation of protoplast. Microscopy was used to observe the production of protoplast after going through one hour enzymolysis with Driselase buffer. The morphology of the protoplast was shown in Fig. 8a, whose product mode was: top-end release (Fig. 8b), and intermediate release (Fig. 8c).

3.1.4.2. Stability verification of F. oxysporum F-H.SY0975
green fluorescent protein marking transformants.In order to detect the genetic stability of green fluorescent protein gene in transformant genome, the third culture ofF. oxysporum GFP transformants was inoculated onto the PDA medium without hygromycin. After continuous culturing for five generations, it was later inoculated onto the hygromycin medium. The lines witnessing normal growth were a stable transformant. GFP expression was maintained in mycelia (results not presented).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เป็น 3.1.3 การเปลี่ยนแปลงของ E. coliหลังจากการเชื่อมโยงกับส่วน gfp โดย T4 ligase ส่วน 4.8 kb กลับถูกแปลงไประบบ โคโลนีแบคทีเรียที่เติบโตในสื่อ chloramphenicol ถูกพบใน Fig. 6 แยก transformant plasmid ถูกใช้ recombine plasmid ผ่านเอนไซม์ digestionwithHindIII และ ECOlI ซึ่งถูกเชื่อมโยงกับการกระจายตัวที่สองเพื่อผลิตชิ้นส่วนใหม่สองขนาด 6.8 kb (ตรวจพบ โดย electrophoresis) เดียวกัน ขนาดของ plasmids ที่ระบุแทรกขวา3.1.4. GFP แปลงของต้องใช้ oxysporum F. F H.SY09753.1.4.1 การเตรียม protoplast Microscopy ถูกใช้ในการปฏิบัติการผลิตของ protoplast หลังผ่านหนึ่งชั่วโมง enzymolysis กับ Driselase บัฟเฟอร์ สัณฐานวิทยาของ protoplast ถูกแสดงใน Fig. 8a โหมดผลิตภัณฑ์ถูก: ปล่อยปลายบน (Fig. 8b), และปล่อยกลางกินซี 8)3.1.4.2 การตรวจสอบเสถียรภาพ oxysporum F. F H.SY0975โปรตีนเรืองแสงสีเขียวเครื่อง transformantsเพื่อตรวจสอบความมั่นคงทางพันธุกรรมของยีนโปรตีนเรืองแสงสีเขียวในกลุ่ม transformant วัฒนธรรมสามปิด oxysporum GFP transformants ได้ inoculated ลงกลาง PDA โดย hygromycin หลังจากต่อเนื่อง culturing สำหรับรุ่น 5 มันในภายหลังถูก inoculated บนสื่อ hygromycin ใบพยานการเจริญเติบโตปกติ transformant มั่นคงได้ นิพจน์ GFP ถูกรักษาใน mycelia (ไม่แสดงผล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.1.3 การเปลี่ยนแปลงของเชื้อ E. coli
หลังจากที่เชื่อมโยงกับส่วน GFP โดย ligase T4, รีไซเคิล 4.8 กิโลส่วนถูกเปลี่ยนเป็นอีโคไล อาณานิคมของแบคทีเรียที่เจริญเติบโตบนกลาง chloramphenicol ถูกแสดงให้เห็นในรูป 6. สกัดพลาสมิด transformant ถูกใช้ในการ recombine พลาสมิดผ่านเอนไซม์ digestionwithHindIII และ eColi ซึ่งได้รับการเชื่อมโยงกับทั้งสองชิ้นส่วนในการผลิตสองชิ้นใหม่ที่มีขนาดเท่ากัน 6.8 กิโล (ตรวจพบโดย electrophoresis) ขนาดของพลาสมิดที่ระบุแทรกขวา. 3.1.4 การเปลี่ยนแปลงของสายพันธุ์ GFP F. oxysporum FH.SY0975 3.1.4.1 เตรียมโปรโตพลา กล้องจุลทรรศน์ถูกใช้ในการสังเกตการผลิตของโปรโตพลาหลังจากผ่านหนึ่งชั่วโมง enzymolysis กับบัฟเฟอร์ Driselase สัณฐานวิทยาของโปรโตพลาก็แสดงให้เห็นในรูป 8a ซึ่งเป็นโหมดสินค้า. ปล่อยปลายบนสุด (Fig. 8b) และปล่อยกลาง (Fig. 8c) 3.1.4.2 การตรวจสอบความมั่นคงของ F. oxysporum FH.SY0975 เครื่องหมายโปรตีนเรืองแสงสีเขียวเพื่อ transformants.In ในการตรวจสอบความมั่นคงทางพันธุกรรมของยีนโปรตีนเรืองแสงสีเขียวในจีโนม transformant วัฒนธรรมที่สามออก transformants oxysporum GFP ได้รับเชื้อเข้าสู่กลาง PDA โดยไม่ต้องไฮ หลังจากเพาะเลี้ยงอย่างต่อเนื่องห้าชั่วมันก็เชื้อภายหลังลงกลางไฮ สายพยานเจริญเติบโตตามปกติเป็น transformant มั่นคง การแสดงออก GFP ถูกเก็บรักษาไว้ในเส้นใย (ผลไม่ได้นำเสนอ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.1.3 . การเปลี่ยนแปลงของ E . coli
หลังจากที่เชื่อมโยงกับส่วนของ GFP T4 ไลเกส , รีไซเคิล 4.8 กิโลเบสได้ถูก E.coli อาณานิคมแบคทีเรียเติบโตบน chloramphenicol ) ที่แสดงในรูปที่ 6 สกัดพลาสมิด / ใช้พลาสมิดและแขกที่ผ่าน digestionwithhindiii ecoli เอนไซม์ ,ซึ่งเชื่อมโยงกับสองชิ้นส่วนผลิตสองชิ้นใหม่ที่มีขนาดเดียวกันของ 6.8 KB ( ตรวจพบโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีส ) ขนาดของพลาสมิดพบการแทรกที่ถูกต้อง

3.1.4 . การเปลี่ยนแปลงของ GFP F . oxysporum เมื่อย f-h.sy0975
3.1.4.1 . การเตรียมโปร .กล้องจุลทรรศน์ที่ใช้สังเกตการผลิตหลังจากผ่านโปร enzymolysis หนึ่งชั่วโมงกับ driselase บัฟเฟอร์ สัณฐานวิทยาของแบคทีเรียที่ถูกแสดงในรูปที่ 8A มีโหมดผลิตภัณฑ์ : ปลายด้านบนออก ( รูปที่ใส่ ( รูปกลาง ) และรุ่น 8C )

3.1.4.2 . การตรวจสอบเสถียรภาพของ F . oxysporum f-h.sy0975
โปรตีนเรืองแสงสีเขียวเครื่องหมาย transformants .เพื่อตรวจสอบความมั่นคงทางพันธุกรรมของยีนโปรตีนเรืองแสงสีเขียวใน / จีโนม สามวัฒนธรรมไป GFP เป็นเชื้อเชื้อพลาสมิดเข้าสู่ PDA ปานกลางโดยไม่มียีนต้านยา hygromycin . หลังจากเพาะเลี้ยงต่อเนื่อง 5 รุ่น ต่อมาปลูกเชื้อลงบนยีนต้านยา hygromycin ) เส้นเป็นพยานการเจริญเติบโตปกติเป็น / คงที่การแสดงออกของ GFP ถูกรักษาในแต่ละ ( ไม่แสดงผล )