Carboxylesterase activity was measu

Carboxylesterase activity was measured in the microsomal or post-mitocondrial fractions by a continuous assay using 96-wellmicroplates. Homogenates (25 _l)were incubated with 200 _l 4-NPA as substrate (1 mM final concentration) and the buffer 50 mM phosphate buffer (pH 7.4) for 5 min at 25◦C. Formation of 4-nitrophenolate was read at 405 nm in a TECAN Infinite 200 microplate reader. Serial 4-NPA concentrations(0.03–1 mM) were assayed to estimate Vmax and Km values using the Michaelis–Menten equation, and the linearity transformation of Line weaver–Burk plot. Carboxylesterase activity was measured in triplicate and results are expressed as nmol/min/mg protein. Total protein content was determined by the Bradford’s method(1976), adapted to microplate and using the Bradford Bio-Rad Pro-tein Assay reagent and bovine serum albumin as the standard(0.05–0.5 mg/ml). The absorbance was read at 595 nm. All protein determinations were performed in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรม Carboxylesterase โดยวัดในเศษ microsomal หรือโพสต์ mitocondrial จากการทดสอบต่อเนื่องใช้ 96-wellmicroplates Homogenates (25 _l) ได้รับการกก 200 _l 4-NPA เป็นพื้นผิว (ความเข้มข้นสุดท้าย 1 มม.) และบัฟเฟอร์ 50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) 5 นาทีที่ 25◦C ก่อตัวของ 4 nitrophenolate ถูกอ่านที่ 405 nm ในเครื่อง TECAN อนันต์ 200 microplate อ่าน ความเข้มข้นของอนุกรม 4-NPA (0.03 – 1 มิลลิเมตร) ถูก assayed ประเมินค่า Km และ Vmax โดยใช้สมการ Michaelis – Menten และการแปลงเชิงเส้นของสายนกจาบ – Burk พล็อต กิจกรรม Carboxylesterase โดยวัดลข้อ และผลลัพธ์จะแสดงเป็นนาโนโมล/นาที/มิลลิกรัมโปรตีน กำหนดปริมาณโปรตีนทั้งหมด โดย method(1976) ของแบรดฟอร์ด microplate ดัดแปลง และใช้ชีวภาพแบรดฟอร์ด-Rad Pro-เทียน Assay เอเจนต์และวัว serum albumin เป็นตัว standard(0.05–0.5 mg/ml) ค่าที่ถูกอ่านที่ 595 nm ดำเนินการวิเคราะห์ปริมาณโปรตีนทั้งหมดลข้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรม Carboxylesterase วัดในไมโครหรือโพสต์ mitocondrial เศษส่วนโดยการทดสอบอย่างต่อเนื่องโดยใช้ 96 wellmicroplates homogenates (25 _L) ถูกบ่มกับ 200 _L 4 NPA เป็นสารตั้งต้น (1 มิลลิเข้มข้นสุดท้าย) และบัฟเฟอร์ขนาด 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) เป็นเวลา 5 นาทีที่25◦C การก่อตัวของ 4 nitrophenolate ได้อ่านที่ 405 นาโนเมตรอ่าน microplate TECAN อนันต์ 200 อนุกรมความเข้มข้น 4 NPA (0.03-1 มิลลิเมตร) และนำไปวิเคราะห์เพื่อประเมินและ Vmax Km ค่าใช้สมการ Michaelis-Menten และการเปลี่ยนแปลงเชิงเส้นของสายทอผ้า-Burk พล็อต กิจกรรม Carboxylesterase วัดในเพิ่มขึ้นสามเท่าและผลจะแสดงเป็น nmol / นาที / มิลลิกรัมโปรตีน ปริมาณโปรตีนรวมถูกกำหนดโดยวิธีการที่แบรดฟอร์ (1976) ดัดแปลง microplate และการใช้น้ำยาแบรดฟอ Bio-Rad Pro-Tein Assay และซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน (0.05-0.5 mg / ml) ค่าการดูดกลืนได้อ่านที่ 595 นาโนเมตร หาความโปรตีนทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรม carboxylesterase วัดในไมโครโซม หรือโพสต์ mitocondrial เศษส่วนโดยต่อเนื่อง โดยการใช้ wellmicroplates 96 . homogenates ( 25 _l ) ถูกบ่มกับ 200 _l 4-npa เป็นสับสเตรท ( 1 มิลลิเมตรความเข้มข้นสุดท้าย ) และ 50 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( Buffer pH 7.4 ) สำหรับ 5 นาทีที่ 25 ◦ C . การก่อตัวของ 4-nitrophenolate คืออ่านที่ 405 nm ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย TECAN อนันต์ 200 เครื่องอ่าน อนุกรม 4-npa ความเข้มข้น ( 0.03 มม. ( 1 ) เพื่อประเมินถึงปริมาณและมูลค่าการใช้ KM มาก– menten สมการ และถึงการแปลงสายทอเบิร์กและพล็อต กิจกรรม carboxylesterase วัดในการทำสำเนาสามฉบับ และจะแสดงเป็นโปรตีน nmol / min / mg ปริมาณโปรตีนทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีของแบรดฟอร์ด ( 1976 ) , ปรับให้เข้ากับพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยและการใช้ไบโอโปรเตียนในแบรดฟอร์ด RAD และระดับอัลบูมินเป็นมาตรฐาน ( 0.05 ) 0.5 mg / ml ) นได้อ่านที่ 595 นาโนเมตร การวิเคราะห์ปริมาณโปรตีนมีการปฏิบัติทั้งสามใบ