2.5. HPLC analysis of steviosideThe

2.5. HPLC analysis of stevioside
The analysis was performed using the high performance liquid
chromatography system Dionex 120 (Dionex P680 HPLC pump,
automatic injector with 100 ll loop), with results processed by
Chromeleon software (Version 6.70 SP8 Build 1957), Dionex Corporation,
CA, USA, with some modifications (Rajasekaran, Ramakrishna,
UdayaSankar, Giridhar, & Ravishankar, 2008).
Separations were performed on a column: Acclaim 120 silica, RP-
18 (5 lm particle size, 250  4.6 mm id). The mobile phase consisted
of acetonitrile: water (2:3) and each solvent was filtered
through a 0.2 lm pore size hydrophilic filter and degassed in an
ultrasonic bath before use. The separation was performed, following
isocratic conditions, using a solvent ratio of 40:60 and chromatogram
detected at 258 nm. The analysis was performed at
25 C, with 0.5 ml min1 flow rate. The samples of standard stevioside
were diluted in acetonitrile to a concentration of
0.5 mg ml1. All prepared HPLC samples were filtered through a
non-sterile 0.45 lm PTFE syringe filter, after which 10 ll of commercial
sample and 20 ll of extracted sample (enzyme based)
were analysed.
2.6. Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy
The structure of stevioside (Fig 1) was determined by NMR
spectroscopy. NMR spectra of extracted (Fig 2a) and reference
(Fig 2b) stevioside (15 mg ml1in deuterium oxide, 0.5 ml) were
obtained using a Bruker Avance II 400 MHz Spectrometer.
3. Results and discussion
3.1. General
The effects of a variety of parameters on the extraction yield of
stevioside from S. rebaudiana leaves were studied. These parameters
included the time and the temperature of extraction, and the
concentration and type of enzymes added. Response surface methodology
(RSM) was used to optimise the use of different enzyme
combinations, as described in detail below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 วิเคราะห์ HPLC stevioside
ทำการวิเคราะห์โดยใช้ของเหลวประสิทธิภาพสูง
ระบบ chromatography Dionex 120 (Dionex P680 HPLC ปั๊ม,
อัดอัตโนมัติกับลูปจะ 100), กับผลลัพธ์ที่ประมวลผลโดย
Chromeleon ซอฟต์แวร์ (รุ่น 6.70 SP8 สร้าง 1957), Dionex Corporation,
CA, USA มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง (Rajasekaran สวามีรามกฤษณะ,
UdayaSankar, Giridhar & Ravishankar, 2008)
ประโยชน์ได้ดำเนินการบนคอลัมน์: Acclaim 120 ซิลิก้า RP-
18 (ขนาดอนุภาค lm 5 รหัส 4.6 มม. 250) ประกอบด้วยเฟสเคลื่อนที่
ของ acetonitrile: ที่กรองน้ำ (2:3) และตัวทำละลายแต่ละ
ผ่าน 0.2 lm กรอง hydrophilic ขนาดรูขุมขน และ degassed ในการ
ห้องอัลตราโซนิกก่อนใช้ แยกที่ทำการ ต่อ
isocratic คิดเงื่อนไข โดยใช้อัตราส่วนตัวทำละลายของ 40:60 และ chromatogram
ตรวจพบที่ 258 nm ทำการวิเคราะห์ที่
25 C มีอัตราการไหลต่ำสุด 1 0.5 ml ตัวอย่างของมาตรฐาน stevioside
ถูกทำให้เจือจางใน acetonitrile เพื่อความเข้มข้นของ
0.5 มิลลิกรัมมล. 1 ทั้งหมดเตรียม HPLC ตัวอย่างถูกกรองผ่าน
ไม่ใส่ 0.45 lm PTFE เข็มกรอง หลัง 10 ที่จะค้า
จะ 20 และชิ้นงานตัวอย่างของตัวอย่างแยก (เอนไซม์ตาม)
ถูก analysed.
2.6 การสั่นพ้องแม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR) ก
กำหนดโครงสร้างของ stevioside (ฟิก 1) โดย NMR
ก แรมสเป็คตรา NMR ของสกัด (ฟิก 2a) และถูกอ้างอิง
(Fig 2b) stevioside (15 mg ml ใน 1 ดิวเทอเรียมออกไซด์ 0.5 ml)
รับใช้เป็น Bruker Avance II 400 MHz สเปกโตรมิเตอร์.
3 ผลลัพธ์และสนทนา
3.1 ทั่วไป
ผลของพารามิเตอร์การสกัดผลผลิตของ
stevioside จากใบไม้ rebaudiana S. ได้ศึกษา พารามิเตอร์เหล่านี้
เวลาและอุณหภูมิของสกัด และ
ความเข้มข้นและชนิดของเอนไซม์เพิ่มขึ้น ตอบผิว methodology
(RSM) ถูกใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของการใช้เอนไซม์ต่าง ๆ
ชุด ตามที่อธิบายไว้ในรายละเอียดด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การวิเคราะห์ HPLC พุก
การวิเคราะห์ที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้ประสิทธิภาพสูงของเหลว
ระบบโค Dionex? 120 (P680 Dionex HPLC ปั๊ม
หัวฉีดอัตโนมัติด้วยวง 100 LL) โดยมีผลการดำเนินการโดย
ซอฟแวร์ Chromeleon (เวอร์ชั่น 6.70 SP8 Build 1957), Dionex คอร์ปอเรชั่น
CA, USA ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง (Rajasekaran, Ramakrishna,
UdayaSankar, Giridhar และ Ravishankar 2008)
แยกได้ดำเนินการในคอลัมน์: โห่ร้อง 120 ซิลิกา RP-
18 (ขนาดอนุภาค 5 LM 250 4.6 มม id)? เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย
ของ acetonitrile: น้ำ (2: 3) และแต่ละตัวทำละลายถูกกรอง
ผ่าน 0.2 ลูเมนขนาดรูขุมขนกรองน้ำและกำจัดก๊าซใน
ห้องอาบน้ำล้ำก่อนการใช้งาน แยกได้ดำเนินการดังต่อไปนี้
เงื่อนไข Isocratic โดยใช้อัตราส่วนของตัวทำละลาย 40:60 และ chromatogram
ตรวจพบที่ 258 นาโนเมตร การวิเคราะห์ที่ได้รับการดำเนินการที่
25 องศาเซลเซียสกับ 0.5 มลนาที? อัตราการไหล 1 ตัวอย่างของสตีวิโอไซมาตรฐาน
ถูกเจือจางใน acetonitrile กับความเข้มข้นของ
0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 ตัวอย่าง HPLC ทั้งหมดเตรียมถูกกรองผ่าน
ที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อ 0.45 LM กรอง PTFE เข็มฉีดยาหลังจากที่ 10 LL เชิงพาณิชย์ของ
กลุ่มตัวอย่างและ 20 LL ของตัวอย่างสกัด (เอนไซม์ based)
วิเคราะห์
2.6 แม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR) สเปก
โครงสร้างของสตีวิโอไซ (รูปที่ 1) ถูกกำหนดโดย NMR
spectroscopy NMR สเปกตรัมของสารสกัด (รูปที่ 2a) และการอ้างอิง
(รูปที่ 2b) สตีวิโอไซ (15 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร? 1in ไฮโดรเจนออกไซด์ 0.5 ml) ได้
รับใช้ Bruker Avance II 400 MHz Spectrometer
3 ผลลัพธ์และการอภิปราย
3.1 ทั่วไป
ผลของความหลากหลายของพารามิเตอร์ในอัตราผลตอบแทนจากการสกัด
สตีวิโอไซจากเอสใบ rebaudiana การศึกษา พารามิเตอร์เหล่านี้
รวมถึงเวลาและอุณหภูมิของการสกัดและ
ความเข้มข้นและชนิดของเอนไซม์เพิ่ม วิธีการพื้นผิวตอบสนอง
(RSM) ถูกใช้ในการเพิ่มประสิทธิภาพการใช้เอนไซม์ที่แตกต่างกัน
รวมที่กล่าวไว้ในรายละเอียดด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การวิเคราะห์ HPLC ของสตีวิโอไซด์
วิเคราะห์ของเหลวแบบสมรรถนะสูง ระบบ DIONEX  120
chromatography ( HPLC DIONEX p680 ปั๊มหัวฉีดด้วย 100 จะห่วง
อัตโนมัติ ) , กับผลลัพธ์ที่ประมวลผลด้วย
chromeleon ซอฟต์แวร์ ( รุ่น 6.70 sp8 สร้าง 2500 ) DIONEX Corporation
CA , USA ( rajasekaran กับการปรับเปลี่ยนบางอย่าง , สถานที่ udayasankar , giridhar
, ,
&ราวี ชังการ์ , 2008 )สำหรับจำนวนคอลัมน์ : โห่ร้อง 120 ซิลิกา , RP -
18 ( 5 LM ขนาด 250  4.6 mm ID ) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย
ของไนน้ำ ( 2 : 3 ) และแต่ละชนิดถูกกรองผ่าน 0.2 โดย
ขนาดรูน้ำกรองและ degassed ใน
นํ้าเครื่องก่อนใช้งาน การกระทำต่อไปนี้
เงื่อนไข Isocratic โดยใช้อัตราส่วน 40 : 60 และ ตัวทำละลายโครมา
ตรวจพบ 258 nm . ผลจากการวิเคราะห์ที่
25  C 0.5 มิลลิลิตรต่อนาที  1 อัตราการไหล ตัวอย่างของมาตรฐาน
สตีวิโอไซด์เจือจางใน Acetonitrile กับความเข้มข้นของ
mg 0.5 ml  1 พร้อมตัวอย่างและถูกกรองผ่าน
ไม่เป็นหมัน 0.45 โดยเข็ม PTFE กรองหลังจากที่ 10 จะตัวอย่างพาณิชย์
20 จะสกัดตัวอย่าง ( ใช้เอนไซม์วิเคราะห์ )
.
2.6แม่เหล็กนิวเคลียร์ ( NMR ) spectroscopy
โครงสร้างของสตีวิโอไซด์ ( ตารางที่ 1 ) โดยการวัด NMR
สเปกโทรสโกปี NMR สเปกตรัมของสกัด ( มะเดื่อ 2A ) และอ้างอิง
( รูปที่ 2B ) สตีวิโอไซด์ ( 15 มิลลิกรัม ml  1in ดิวทีเรียมออกไซด์ 0.5 มิลลิลิตร
ได้มาโดยใช้ BRUKER วนซ์ II 400 MHz สเปกโตรมิเตอร์ .
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ทั่วไป
ผลของความหลากหลายของพารามิเตอร์ในการสกัดผลผลิต
สกัดจากเอสว่าใบที่แตกต่างกัน พารามิเตอร์เหล่านี้
รวมเวลาและอุณหภูมิของการสกัดและความเข้มข้นและชนิดของเอนไซม์
เพิ่ม Response Surface Methodology
( RSM ) ถูกใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการใช้ชุดค่าผสมเอนไซม์
แตกต่างกันตามที่อธิบายไว้ในรายละเอียดด้านล่าง