All the EST-SSR and SSR primer pair

All the EST-SSR and SSR primer pairs were screened with the parental samples in order to identify the potentially polymorphic markers, used to genotype with 100 F 1 progenies. The PCR reactions for EST-SSR analysis were performed according to Tangphatsornruang et al. (2008). Briefly, the amplification reactions in 20 ll consisted of 50 ng of DNA template, 10 pmol of each forward and reverse primers, 200 lM dNTP, 19 PCR Buffer, 1.5 mM
MgCl2 , and 1.5 U Taq DNA polymerase. The PCR conditions consisted of 1 cycle of 94_C for 1 min,
followed by 30 cycles of 94_C for 45 s, annealing temperature for 1 min and 72_C for 1 min, and 1 cycle of 72_C for 5 min. The PCR reactions of SSR analysis were performed as described in Kunkeaw et al. (2010)
in 15 ll reaction volumes containing 25 ng of genomic DNA, 0.06 lM of each primer, 0.2 mM dNTPs , and 1 U
Taq DNA polymerase (Promega). PCR was accomplished by 2 min at 94_C, followed by 30 cycles of
45 s at primer annealing temperature, and 1 min at 72_C for 30 cycles. The PCR products were analyzed by 5% (w/v) denaturing polyacrylamide gel electrophoresis and visualized by silver staining (Benbouza
et al. 2006). Sequences of EST primers used in this study are shown in Table 1. (Promega), 19 PCR Buffer, 1.5 mM MgCl2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คู่ไพรเมอร์ EST SSR และ SSR คัดกลุ่มตัวอย่างผู้ปกครองเพื่อระบุเครื่องหมายอาจ polymorphic ใช้จีโนไทป์กับ 100 F 1 progenies ปฏิกิริยา PCR สำหรับเอส-SSR วิเคราะห์ดำเนินการตาม Tangphatsornruang et al. (2008) Briefly ปฏิกิริยา amplification ใน 20 ll ประกอบด้วย 50 ฉบับของดีเอ็นเอต้นแบบ 10 pmol ของไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับแต่ละ 200 lM dNTP, 19 PCR บัฟเฟอร์ 1.5 มม.MgCl2 และ 1.5 U Taq DNA พอลิเมอเรส เงื่อนไข PCR ประกอบด้วย 1 94_C รอบ 1 นาทีตาม ด้วยรอบ 30 ของ 94_C 45 s อุณหภูมิหลอม 1 นาทีและ 72_C 1 นาที และ 1 รอบ 72_C 5 นาที ปฏิกิริยา PCR ของ SSR วิเคราะห์ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ใน Kunkeaw et al. (2010)ใน 15 ปริมาณปฏิกิริยาจะประกอบด้วย 25 ฉบับของดีเอ็นเอออก 0.06 lM รองพื้นแต่ละ dNTPs 0.2 mM และ 1 UTaq DNA พอลิเมอเรส (Promega) สามารถทำได้ โดย 2 นาทีที่ 94_C ตาม ด้วย 30 รอบของ PCR45 s ที่รองพื้นหลอมอุณหภูมิ และ 1 นาทีที่ 72_C 30 รอบ วิเคราะห์ 5% (w/v) การตรวจสอบวิเคราะห์ denaturing ผลิตภัณฑ์ PCR และโดยย้อมสี (Benbouza สีเงินet al. 2006) ลำดับของไพรเมอร์เอสที่ใช้ในการศึกษานี้จะแสดงในตารางที่ 1 (Promega), 19 PCR บัฟเฟอร์ MgCl2 1.5 มม.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งหมด EST-SSR และ SSR คู่ไพรเมอร์ที่ได้รับการคัดเลือกด้วยตัวอย่างของผู้ปกครองเพื่อที่จะระบุเครื่องหมายอาจ polymorphic ที่ใช้ในการตรวจหาสายพันธุ์ 100 F 1 ลูก ปฏิกิริยา PCR สำหรับการวิเคราะห์ EST-SSR ได้ดำเนินการตาม Tangphatsornruang et al, (2008) Brie ชั้นปีที่ ampli ปฏิกิริยา Fi ไอออนบวกใน 20 LL ประกอบด้วย 50 NG ของแม่แบบดีเอ็นเอ 10 pmol ของแต่ละข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ 200 LM dNTP 19 PCR บัฟเฟอร์ 1.5 มิลลิ
MgCl2 และ 1.5 U Taq DNA Polymerase เงื่อนไข PCR ประกอบด้วย 1 วงจรของ 94_C 1 นาที
ตามด้วย 30 รอบของ 94_C 45 s อุณหภูมิการหลอมเป็นเวลา 1 นาทีและ 72_C เป็นเวลา 1 นาทีและ 1 รอบของ 72_C เป็นเวลา 5 นาที ปฏิกิริยา PCR ของการวิเคราะห์ SSR ได้ดำเนินการตามที่อธิบายใน Kunkeaw et al, (2010)
ในวันที่ 15 LL ปริมาณปฏิกิริยาที่มี 25 NG ของดีเอ็นเอ 0.06 LM ของแต่ละไพรเมอร์ 0.2 มิลลิ dNTPs และ 1 U
Taq DNA Polymerase (Promega) PCR ก็ประสบความสำเร็จโดย 2 นาทีที่ 94_C ตามด้วย 30 รอบของ
45 s ไพรเมอร์ที่อุณหภูมิการหลอมและ 1 นาทีที่ 72_C 30 รอบ ผลิตภัณฑ์ PCR มาวิเคราะห์โดย 5% (w / v) denaturing polyacrylamide electrophoresis เจลและมองเห็นโดยการย้อมสีเงิน (Benbouza
et al. 2006) ลำดับของไพรเมอร์ EST ใช้ในการศึกษาครั้งนี้จะแสดงในตารางที่ 1 (Promega) 19 PCR บัฟเฟอร์ 1.5 มิลลิ MgCl2