PCR was performed using the Go Taq®

PCR was performed using the Go Taq® Green Master Mix Kit (Promega, EUA), with the objective to amplify the cp40 gene (accession number NC_014329.1NCBI). The primers used in the PCR assay were CP40F (5´ CGCGGATCCATGCATAATTCTCCTCGATCAG 3’) and CP40R (5’ CGGGAATTCTTATCTAG AACCAGTTGGCTTTC 3’), which contain BamHI and EcoRI restriction sites, respectively. Each PCR reaction had a final volume of 50 μL, with 25 μL from the kit, 1 μL of each primer (100 μM), 22 μL of ultra-purified water and 1 μL of genomic DNA from C. pseudotuberculosis strain T1. The amplification reaction consisted of an initial denaturation step at 94°C for 2 min, 35 cycles of denaturation for 1 min at 94°C, primer hybridisation for 1 min at 55°C and extension at 72°C for 1.5 min, followed by a final extension at 72°C for 10 min. The reaction was conducted in a thermocycler (Mastercycler Gradient, Eppendorf, Germany), and the final product was analysed by electrophoresis on a 1% agarose gel with GelRed™ (Biotium, USA) staining.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PCR ที่ดำเนินการโดยใช้การไป Taq ®สีเขียวหลักผสมชุด (Promega เอื้อ), มีวัตถุประสงค์ขยายยีน cp40 (เลขทะเบียน NC_014329.1NCBI) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการทดสอบ PCR ถูก CP40F (5´ CGCGGATCCATGCATAATTCTCCTCGATCAG 3) และ CP40R (5' 3' AACCAGTTGGCTTTC CGGGAATTCTTATCTAG), ซึ่งประกอบด้วยอเมริกาจำกัด BamHI และ EcoRI ตามลำดับ แต่ละปฏิกิริยา PCR มีปริมาตรสุดท้ายของ μL 50 กับ μL 25 จากชุด μL 1 แต่ละพื้น (100 μM), μL 22 น้ำบริสุทธิ์พิเศษและ μL 1 ของ genomic DNA จาก C. pseudotuberculosis ต้องใช้ T1 ปฏิกิริยาขยายประกอบด้วยการขั้นตอน denaturation เริ่มต้นที่ 94° C สำหรับ 2 นาที รอบ 35 ของ denaturation ใน 1 นาทีที่ 94° C, hybridisation รองพื้นใน 1 นาทีที่ 55° C และ 72° C สำหรับ 1.5 นาที ตาม ด้วยส่วนขยายที่ 72° C สำหรับ 10 นาทีสุดท้าย ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการใน thermocycler (การไล่ระดับสี Mastercycler, Eppendorf เยอรมนี), และผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายคือ analysed โดย electrophoresis ในเจ 1% agarose กับย้อมสี™ GelRed (Biotium สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้ไปTaq®เขียว Master Mix Kit (Promega, EUA) โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อขยายยีน CP40 (ภาคยานุวัติจำนวน NC_014329.1NCBI) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการทดสอบ PCR เป็น CP40F (5'CGCGGATCCATGCATAATTCTCCTCGATCAG 3) และ CP40R (5 'CGGGAATTCTTATCTAG AACCAGTTGGCTTTC 3') ซึ่งมี BamHI และ EcoRI เว็บไซต์ข้อ จำกัด ตามลำดับ แต่ละปฏิกิริยา PCR มีปริมาณสุดท้ายของ 50 ไมโครลิตรมี 25 ไมโครลิตรจากชุดที่ 1 ไมโครลิตรของแต่ละไพรเมอร์ (100 ไมครอน), 22 ไมโครลิตรของน้ำอัลตร้าบริสุทธิ์และ 1 ไมโครลิตรของดีเอ็นเอจาก C. pseudotuberculosis ความเครียด T1 ปฏิกิริยาการขยายประกอบด้วยขั้นตอนที่สูญเสียสภาพธรรมชาติเริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที, 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติเป็นเวลา 1 นาทีที่ 94 ° C, hybridisation ไพรเมอร์เป็นเวลา 1 นาทีที่ 55 องศาเซลเซียสและนามสกุลที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1.5 นาทีตามมาด้วย ขยายสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ปฏิกิริยาได้ดำเนินการในเครื่อง thermocycler (Mastercycler ไล่โทนสี Eppendorf, เยอรมนี) และผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายได้รับการวิเคราะห์โดย electrophoresis บน agarose 1% เจลที่มี GelRed ™ (Biotium สหรัฐอเมริกา) การย้อมสี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสโดยใช้ไปแท็ค®สีเขียวต้นแบบผสมชุด ( promega , สหรัฐฯ ) โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อขยาย cp40 ยีน ( เข้าเบอร์ nc_014329.1ncbi ) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการตรวจวิเคราะห์ถูก cp40f ( 5 ใหม่ cgcggatccatgcataattctcctcgatcag 3 ' ) และ cp40r ( 5 ' cgggaattcttatctag aaccagttggctttc 3 ' ) ซึ่งมีข้อ จำกัด ด้วย BamHI และเว็บไซต์ , ตามลำดับแต่ละเทคนิคปฏิกิริยามีเล่มสุดท้ายของμ 50 ลิตร กับ 25 μ L จากชุดที่ 1 μ L ของแต่ละสี ( 100 μ M ) , 22 μลิตรน้ำบริสุทธิ์พิเศษ 1 μ L ของ genomic DNA จาก pseudotuberculosis สายพันธุ์ T1 . โดยการเพิ่มปฏิกิริยาประกอบด้วยขั้นตอน ( เริ่มต้นที่ 94 ° C เป็นเวลา 2 นาที 3 รอบ ( 1 นาทีที่ 94 ° Cไพรเมอร์ ไฮบริไดเซชัน 1 นาทีที่ 55 องศา C และส่วนขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 1.5 นาที ตามด้วยส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 องศา C นาน 10 นาที ปฏิกิริยาที่ดำเนินการในเทอมอไซเคล ์ ( mastercycler ลาด , เพนดอร์ฟ , เยอรมนี ) , และผลิตภัณฑ์สุดท้ายที่วิเคราะห์โดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน 1% , gelred ™ด้วยเจล ( biotium , USA ) staining