Method BMethod B was the Mg/NP-40 e

Method B
Method B was the Mg/NP-40 extraction method. This
method was performrd as described by Kim et al. (2001)
with some modifications. The powdered sample was
homogenized in 10 mL of ice-cold Mg/NP-40 extraction
buffer containing 0.5 mol L-1 Tris-HCl, pH 8.3, 2%
(v/v) NP-40, 20 mmol L-1 MgCl2, 2% (v/v) β-ME, 1 mmol
L-1 phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and 1% (w/v)
PVPP. The mixture was sonicated in ice bath for 10
min and shaken on ice for 30 min. After centrifugation
at 12 000 × g for 15 min at 4°C, proteins in the supernatant
were precipitated by adding 4 times volume of cold
acetone containing 10% TCA and 0.07% β-ME at
-20°C for at least 3 h. The precipitated proteins were
pelleted and washed with ice-cold acetone containing
0.07% β-ME. The treatment was repeated until the
supernatant was colorless. Pellets were vacuum-dried
and stored at -80°C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการ B
วิธีการ B เป็น Mg NP-40 / วิธีการสกัด นี้
วิธีการที่ถูก performrd ตามที่อธิบายไว้โดยคิม, et al (2001)
มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง กลุ่มตัวอย่างที่เป็นผงถูก
ปั่นใน 10 มลเย็น mg / NP-40 สกัด
บัฟเฟอร์ที่มี 0.5 mol L-1 Tris-HCl พีเอช 8.3, 2%
(v / v) NP-40, 20 มิลลิโมล L-1 MgCl2, 2% (v / v) β-ME 1 มิลลิโมล
L-1 phenylmethylsulfonyl ลูออไรด์ (PMSF) และ 1% (w / v)
PVPP ส่วนผสมที่ถูก sonicated ในห้องอาบน้ำน้ำแข็งเป็นเวลา 10
นาทีและเขย่าบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยง
ที่ 12 × 000 กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 ° C, โปรตีนในสารละลาย
ถูกตกตะกอนโดยการเพิ่มปริมาณครั้งที่ 4 ของความหนาวเย็น
อะซิโตนที่มี 10% TCA และ 0.07% β-ME ที่
-20 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอย่างน้อย 3 ชั่วโมง โปรตีนที่ตกตะกอนได้รับ
เม็ดและล้างด้วยเย็นอะซิโตนที่มี
0.07% β-ME การรักษาซ้ำจน
ใสเป็นสี เม็ดถูกสูญญากาศแห้ง
และเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธี Bวิธี B เป็น mg / np-40 การสกัดโดยวิธี นี้วิธี performrd ตามที่อธิบายไว้โดย Kim et al . ( 2544 )กับการปรับเปลี่ยน ตัวอย่างผงบดน้ำแข็ง 10 มิลลิลิตรต่อ np-40 การสกัดเย็นบัฟเฟอร์ที่มี 0.5 โมล L-1 ซึ่ง HCl , pH 8.3 % 2( v / v ) np-40 20 mmol L-1 ไอโซโทป , 2% ( v / v ) บีตา - ชั้น 1 มิลลิโมลL-1 phenylmethylsulfonyl ฟลูออไรด์ ( PMSF ) และ 1% ( w / v )pvpp . ผสมส่วนผสมในอ่าง sonicated น้ำแข็ง 10มิน และหวั่นไหวในน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 12 000 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C , โปรตีนในน่านเป็นตะกอน โดยการเพิ่มปริมาณของเย็น 4 ครั้งอะซิโตนที่มี TCA 10% และ 0.07 % บีตา - ฉัน- 20 ° C เป็นเวลาอย่างน้อย 3 ชั่วโมงตกตะกอนโปรตีนคือเม็ด และล้างด้วยอะซิโตนผสมเย็น0.07 % บีตา - ฉัน การทำซ้ำจนกว่าน่านเป็นไม่มีสี เครื่องดูดฝุ่นแห้งอัดเม็ดคือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ - 80 องศา